ICS65.020.20

CCSB05

37083708

濟(jì)寧市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB3708/T51-2024

液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程第1部分：真姬菇

Productiontechnicalcodeofliquidspawn

——Part1：hypsizygusmarmoreus

2024-08-26發(fā)布2024-09-26實施

濟(jì)寧市市場監(jiān)督管理局發(fā)布

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)

定起草。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。

本文件由濟(jì)寧市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出、歸口并組織實施。

II

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引言

食用菌是可食用的大型真菌的統(tǒng)稱，如真姬菇、香菇、木耳、金針菇等。食用菌栽培使用的菌種是

人工培育的純菌絲體及其培養(yǎng)基的混合體，根據(jù)不同的培養(yǎng)基質(zhì)又可分為固體菌種和液體菌種。不同食

用菌的生物學(xué)特性不同，菌種生產(chǎn)條件差異較大，單一文件不能涵蓋所有食用菌種類，為了規(guī)范我市食

用菌液體菌種生產(chǎn)和使用，確保我市食用菌生產(chǎn)持續(xù)健康發(fā)展，特制定液體菌種生產(chǎn)技術(shù)系列規(guī)程，本

文件為該系列規(guī)程的第一部分。

III

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液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程第1部分：真姬菇

1范圍

本文件規(guī)定了真姬菇液體菌種生產(chǎn)的人員要求、生產(chǎn)環(huán)境、生產(chǎn)設(shè)施與設(shè)備、生產(chǎn)技術(shù)要求、液體

菌種質(zhì)量要求、菌種保存、生產(chǎn)檔案等要求。

本文件適用于真姬菇液體菌種的制備。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T150（所有部分）壓力容器

GB3095環(huán)境空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB/T12728-2006食用菌術(shù)語

GB19298食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)包裝飲用水

GB50073潔凈廠房設(shè)計規(guī)范(附條文說明）

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY/T1846食用菌菌種檢驗規(guī)程

3術(shù)語和定義

GB/T12728界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

真姬菇hypsizygusmarmoreus

屬擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、白蘑科、玉蕈屬，外形美觀，質(zhì)地脆嫩，味道鮮美，具有海蟹味，

又名玉蕈、斑玉蕈。目前我國市場上有“蟹味菇”“白玉菇”“海鮮菇”3個品系。

3.2

母種stockculture

經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物，也稱一級種、試管種。

[來源：GB/T12728-2006，2.5.7]

3.3

液體菌種liquidspawn

在搖瓶和發(fā)酵罐中通過液體發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)的液體形態(tài)的食用菌菌種。

3.4

空氣壓縮機(jī)aircompressor

1

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為液體菌種生產(chǎn)提供壓縮空氣的設(shè)備。

3.5

空氣過濾系統(tǒng)airfiltrationsystem

對液體菌種生產(chǎn)所用空氣中的油、水、雜質(zhì)和雜菌等進(jìn)行過濾，達(dá)到無菌潔凈要求的設(shè)備，一般包

括冷凍干燥機(jī)、吸附式干燥機(jī)、過濾器等。

3.6

罐壓tankpressure

液體菌種生產(chǎn)過程中發(fā)酵罐內(nèi)保持的空氣壓力，單位：MPa。

3.7

通氣率aerationrate

液體菌種培養(yǎng)過程中每分鐘通入發(fā)酵罐中無菌空氣體積與實際發(fā)酵液體積的比值。用vvm（每分

鐘通入無菌空氣體積/發(fā)酵液體積）表示。

3.8

接種量inoculationamount

接入的菌種體積與培養(yǎng)基體積的比值，用%表示。

3.9

液體菌種菌齡cellageofliquidspawn

菌種接入培養(yǎng)基開始計算的液體菌種培養(yǎng)時間，用d表示。

3.10

發(fā)酵罐空消sterilizationforemptyfermenter

對尚未加培養(yǎng)基的空發(fā)酵罐進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。

3.11

投料addingculturemedium

將配制好的培養(yǎng)基投放到發(fā)酵罐中。

3.12

定容constantvolume

培養(yǎng)器中加入培養(yǎng)基后，加水至所要求體積。

3.13

發(fā)酵罐實消sterilizationforfermenter

指對投料后的發(fā)酵罐進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。

4人員要求

工作人員應(yīng)熟練掌握菌種生產(chǎn)所需的專業(yè)技術(shù)，并注意保持個人衛(wèi)生。進(jìn)入凈化車間應(yīng)穿戴經(jīng)清洗

干凈且消毒處理符合進(jìn)入凈化車間要求的工作服、口罩、鞋、帽等。

5生產(chǎn)環(huán)境

5.1環(huán)境要求

環(huán)境空氣質(zhì)量應(yīng)符合GB3095要求。配制培養(yǎng)基用水宜使用純凈水，純凈水應(yīng)符合GB19298要求。

其他生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749要求。

5.2生產(chǎn)場地、廠房設(shè)置和布局

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生產(chǎn)場地、廠房設(shè)置和布局應(yīng)符合NY/T528的要求。增設(shè)搖瓶菌種培養(yǎng)室、發(fā)酵罐菌種培養(yǎng)室。

凈化車間應(yīng)符合GB50073的要求。

6生產(chǎn)設(shè)施與設(shè)備

生產(chǎn)應(yīng)具備NY/T528規(guī)定的相關(guān)設(shè)施設(shè)備，還應(yīng)增加搖床、發(fā)酵罐系統(tǒng)。壓力容器應(yīng)使用經(jīng)有資

質(zhì)部門生產(chǎn)與檢驗的安全合格產(chǎn)品，符合GB/T150（所有部分）的規(guī)定。

7生產(chǎn)技術(shù)要求

7.1工藝流程

真姬菇液體菌種生產(chǎn)工藝見圖1。

圖１真姬菇液體菌種生產(chǎn)工藝流程

7.2品種選擇

從具有相應(yīng)資質(zhì)的供種單位引種，且種性清楚。引種后應(yīng)進(jìn)行適應(yīng)性出菇試驗驗證，選用高產(chǎn)、優(yōu)

質(zhì)、抗逆性強(qiáng)的真姬菇品種。

7.3母種生產(chǎn)

7.3.1容器

使用18mm×180mm或20mm×200mm玻璃試管，試管應(yīng)保持清潔、干燥。試管塞為棉塞（梳

棉或化纖棉）或硅膠塞。

3

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7.3.2培養(yǎng)基配方

馬鈴薯200g/L（煮汁），麥麩20g/L（煮汁），葡萄糖20g/L，酵母浸粉3g/L，磷酸二氫鉀1g/L，

硫酸鎂0.5g/L，瓊脂20g/L，純凈水1000mL。

7.3.3培養(yǎng)基配制

以配制1000mL培養(yǎng)基為例。選無青皮、未發(fā)芽的新鮮馬鈴薯洗凈、去皮、去芽眼，切成薄片，

加水1000mL左右，麥麩用紗布包裹，與馬鈴薯共同煮20min～30min，用預(yù)濕的4層紗布過濾。取濾

液加入20g瓊脂，邊煮邊攪拌至瓊脂全部融化。加入其它配料攪拌溶化，加水定容至1000mL。趁熱

分裝，裝量為試管長度的1/5～1/4，管口不能粘上培養(yǎng)基。

7.3.4培養(yǎng)基滅菌

將分裝好的試管直立放入滅菌鍋內(nèi)，用牛皮紙包住試管塞，鍋內(nèi)留有一定的空隙。檢查鍋內(nèi)水位，

及時滅菌。壓力升到0.05MPa時，打開放氣閥排除冷空氣，如此重復(fù)一次。壓力升至0.1MPa～0.12MPa，

恒壓35min～40min。

7.3.5擺斜面

滅菌結(jié)束，自然降壓至零。打開鍋蓋，利用余熱烘干試管塞，將試管的一端斜放在1cm厚的木條

上擺出斜面，斜面頂端距試管口不少于50mm。

7.3.6接種培養(yǎng)

檢查、核對菌種。于消毒后的接種箱或超凈工作臺上，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接種針切?。?～5）

mm×（3～5）mm的一塊母種迅速轉(zhuǎn)接于待接種試管斜面中央，接完種及時貼好標(biāo)簽，置于18℃～

20℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。接種后2d～3d，觀察發(fā)菌情況，及時檢出雜菌污染、長勢不良的試管。

一般培養(yǎng)10d～14d、菌絲長滿斜面后，及時使用或置于0℃～4℃冰箱中保存。

7.3.7母種質(zhì)量要求

菌絲白色、整齊、均勻、無角變、粉孢子少、無雜菌，生活力強(qiáng)，培養(yǎng)基不萎縮。應(yīng)符合NY/T1846

要求。

7.4搖瓶液體菌種生產(chǎn)

7.4.1容器

使用1000mL無色或近無色專用玻璃菌種瓶，瓶塞為棉塞（梳棉或化纖棉）或硅膠塞或?qū)Ｓ梅饪?/p>

透氣膜。

7.4.2培養(yǎng)基配方

蟹味菇配方：馬鈴薯200g/L（煮汁），葡萄糖20g/L，玉米粉20g/L，酵母浸粉3g/L，磷酸二氫

鉀1g/L，硫酸鎂0.5g/L，純凈水1000mL。

海鮮菇配方：馬鈴薯200g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨4g/L，硫酸鎂1g/L，磷酸二氫鉀2g/L，

純凈水1000mL。

白玉菇配方：蔗糖20g/L，豆粕粉3g/L，硫酸鎂0.6g/L，磷酸氫二鉀0.25g/L，磷酸二氫鉀0.5g/L，

純凈水1000mL。

7.4.3培養(yǎng)基配制

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以配制1000mL培養(yǎng)基為例。蟹味菇、海鮮菇：選無青皮、未發(fā)芽的新鮮馬鈴薯洗凈、去皮、去

芽眼，切成薄片，加水1000mL左右，煮20min～30min，用預(yù)濕的4層紗布過濾、定容至1000mL。

玉米粉提前用溫水?dāng)嚢杈鶆?，不能有結(jié)塊，加入濾液中煮沸，再加入其余的原料至溶解。培養(yǎng)基分裝入

搖瓶中，裝液量為搖瓶容量的2/5～3/5，將瓶口用棉塞或硅膠塞或?qū)Ｓ猛笟夥饪谀し饪?，并用牛皮紙?/p>

扎。白玉菇：按配方比例稱取原料加水?dāng)嚢杈鶆?，分裝入搖瓶中，裝液量為搖甁容量的2/5～3/5，將瓶

口用棉塞或硅膠塞或?qū)Ｓ猛笟夥饪谀し饪?，并用牛皮紙包扎?/p>

7.4.4滅菌

按7.3.4要求執(zhí)行。

7.4.5接種培養(yǎng)

檢查、核對菌種。待培養(yǎng)基冷卻后于消毒過的接種箱或超凈工作臺上，用經(jīng)火焰消毒并冷卻后的接

種針切取（3～5）mm×（3～5）mm的一塊母種迅速轉(zhuǎn)接于待接種搖瓶培養(yǎng)基內(nèi)，每瓶接種5～6塊。

接種結(jié)束后封口，置搖床上震蕩培養(yǎng)，搖床溫度控制在21℃～22℃，震蕩頻率為150rpm～180rpm，

培養(yǎng)時間6d～7d。

7.4.6搖瓶液體菌種檢驗

每日檢查菌液顏色、菌球形態(tài)和氣味，及時檢出渾濁、異味、泡沫異常的不合格菌種。

7.4.7搖瓶菌種質(zhì)量要求

菌液澄清，不渾濁，無雜菌、無異味；鏡檢無雜菌、菌絲形態(tài)光滑、豐滿；菌絲球、菌絲片段密集，

靜置10min～15min，菌絲球體積占比不低于整個菌液的80%，可結(jié)束培養(yǎng)。

7.5發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)

7.5.1容器

氣升式不銹鋼發(fā)酵罐，體積根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模自定。

7.5.2發(fā)酵罐清洗

發(fā)酵罐在每次使用后或再次使用前應(yīng)徹底清洗后才能投料使用。

7.5.3發(fā)酵罐空消

發(fā)酵罐初次使用、出現(xiàn)雜菌、長期放置、更換品種等情況出現(xiàn)其一時，應(yīng)進(jìn)行空消滅菌。發(fā)酵罐內(nèi)

層及夾層加水至視鏡中線，啟動加熱器加熱。首先排完夾層和內(nèi)層的冷空氣，然后關(guān)閉所有的閥門升溫

升壓，在溫度升至100℃、0.05MPa壓力下，打開接種口放氣，排放罐內(nèi)冷空氣。當(dāng)溫度達(dá)到121℃～

126℃、壓力在0.12MPa～0.15MPa時，維持40min。

7.5.4空氣過濾系統(tǒng)檢查

使用前，檢查空氣過濾系統(tǒng)工作是否正常，檢查空氣濾芯，要求濾芯無油污、無料污、無破損，外

殼無污物、無破損。

7.5.5培養(yǎng)基配方

蔗糖20g/L，豆粕粉4g/L，硫酸鎂0.5g/L，磷酸氫二鉀1g/L，消泡劑20uL/L~30uL/L。

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7.5.6培養(yǎng)基配制與投料、定容

按配方稱取原料。用溫水把豆粕粉攪拌均勻，不能有結(jié)塊，再加入其它配料，攪拌均勻，通過吸管

或漏斗加入罐體，加水定容至所需體積。培養(yǎng)基投料量為罐體總?cè)莘e的70%～80%，最后擰緊上料口

蓋。

7.5.7發(fā)酵罐實消與培養(yǎng)基滅菌

開啟加熱器對發(fā)酵罐夾層及內(nèi)層加熱，當(dāng)壓力達(dá)到0.05MPa時，打開接種口放冷氣至接種口蒸汽

變直時關(guān)閉接種口，待培養(yǎng)液溫度升至95℃時，打開氣泵對發(fā)酵液攪拌2min，氣泵停止通氣。當(dāng)壓

力達(dá)到0.12MPa～0.15MPa、溫度為121℃開始計時，維持40min。

7.5.8降溫

培養(yǎng)基滅菌完畢，迅速通水降溫。降溫過程中發(fā)酵罐要適當(dāng)通氣。一方面攪拌降溫，另一方面加壓，

使發(fā)酵罐維持正壓，盡快使培養(yǎng)液溫度降至30℃以下。

7.5.9接種

接入搖瓶種子，接種量為0.1%～0.3%。將搖瓶接種管和發(fā)酵罐接種口用75%酒精消毒，用95%

酒精的火焰圈套在接種口上，輕微打開呼吸器閥門，使發(fā)酵罐壓力為0。點燃火焰圈，搖瓶接種管放在

火焰上方。用鑷子去掉接種管上的牛皮紙和棉塞，將膠管插入接種口，打開接種口閥門，將搖瓶菌種注

入發(fā)酵罐。關(guān)閉接種閥門，然后拔出接種膠管，去掉火焰圈，打開氣泵。

7.5.10培養(yǎng)

培養(yǎng)溫度18℃～20℃。根據(jù)菌絲生長情況，通入適量無菌空氣，通氣量為1:0.8～1:1，使內(nèi)罐壓

力穩(wěn)定在0.01MPa～0.03MPa，培養(yǎng)周期為6d～7d。

7.5.11發(fā)酵罐液體菌種檢測

接種后第4天進(jìn)行檢測。先用酒精火焰球灼燒取樣閥30s～40s后，棄掉最初流出的50mL～100mL

液體菌種，然后用酒精火焰封口直接放入經(jīng)滅菌的三角瓶中，塞緊棉塞，取樣后用酒精火焰把取樣閥燒

干，以免雜菌進(jìn)入造成污染。

將樣品帶入接種箱或超凈工作臺經(jīng)無菌操作分別劃線接于試管斜面或培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基上，放入

28℃恒溫培養(yǎng)1d～3d，采用顯微鏡和感官觀察菌絲生長狀況和有無雜菌污染。若無細(xì)菌、酵母菌、

霉菌等雜菌菌落生長，則表明該樣品無雜菌污染。

7.5.12發(fā)酵罐液體菌種質(zhì)量要求

按7.4.7要求執(zhí)行。

8菌種保存

8.1母種

置于2℃～4℃冰箱中保存，每隔3～5個月轉(zhuǎn)管移接一次。

8.2搖甁液體菌種

置于2℃～4℃冰箱中可保存5d～7d。

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8.3發(fā)酵罐液體菌種

發(fā)酵罐液體菌種生