ICS67.050

X04

DB22

吉林省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB22/T1230—2011

人參中異菌脲殘留量的測定-高效液相色譜

法

Determinationofiprodioneresiduesinginseng-methodofhighperformanceliquid

chromatograghy

2011-12-01發(fā)布2011-12-15實(shí)施

吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB22/T1230—2011

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由吉林省農(nóng)業(yè)委員會(huì)提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)（農(nóng)業(yè)部參茸產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心）。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李月茹、陳穎、陳丹、許煊煒、張敏、孟欣欣、陳曉林。

I

DB22/T1230—2011

人參中異菌脲殘留量的測定-高效液相色譜法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用高效液相色譜法測定人參(PanaxginsengC.A.Mey.)異菌脲殘留量的方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于鮮人參、生曬參和紅參中異菌脲殘留量的測定。

本標(biāo)準(zhǔn)方法的定量限為0.18mg/kg。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

《中華人民共和國藥典》2010年版。

3原理

試樣中異菌脲經(jīng)有機(jī)溶劑提取、氨基固相萃取小柱凈化、濃縮、定容，微孔濾膜過濾后進(jìn)樣，用反

相高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

4試劑與材料

除非另有說明，所用試劑均為分析純試劑，實(shí)驗(yàn)用水為GB/T6682-2008中規(guī)定的一級(jí)水。

4.1二氯甲烷（CH2Cl2）：優(yōu)級(jí)純。取二氯甲烷300mL置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，濃縮至5mL，在本實(shí)驗(yàn)色

譜條件下進(jìn)樣5μL測定，至高效液相色譜檢測無干擾物。

4.2甲醇（CH4O）。

4.3甲醇-二氯甲烷溶液[（CH4O+CH2Cl2）=5+95]。

4.4石油醚（60-90℃）。

4.5丙酮（C3H6O）。

4.6石油醚-丙酮溶液（4+1）。

4.7乙腈（CH3CN）：色譜純（HPLC）。

4.8無水硫酸鈉（Na2SO4）：350℃灼燒2h，冷卻后置干燥器備用（0℃-4℃密封保存三個(gè)月）。

4.92%硫酸鈉溶液：稱取20g無水硫酸鈉（見4.8），加水溶解定容至1000mL。

4.10異菌脲標(biāo)準(zhǔn)品：C13H13Cl2N3O3，CES號(hào)：36734-19-7，含量為99.5%。

1

DB22/T1230—2011

4.11異菌脲標(biāo)準(zhǔn)貯備液：準(zhǔn)確稱取0.0500g異菌脲標(biāo)準(zhǔn)品（見4.10），用乙腈（見4.7）溶解并轉(zhuǎn)入50

mL容量瓶，用乙腈（見4.7）定容，得到1000mg/L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，貯存在-4℃以下冰箱中，保質(zhì)

期6個(gè)月。

4.12異菌脲標(biāo)準(zhǔn)工作液：使用時(shí)根據(jù)異菌脲在紫外檢測器上的響應(yīng)值，準(zhǔn)確吸取適量的異菌脲標(biāo)準(zhǔn)貯

備液（見4.11），逐級(jí)稀釋，用乙腈（見4.7）稀釋配制成所需的標(biāo)準(zhǔn)工作液。并分別配制成質(zhì)量濃度

為0.1、0.5、0.1、0.2、0.5mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，作標(biāo)準(zhǔn)工作液的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4.13固相萃取小柱：氨基固相萃?。⊿PE）小柱。容積6mL,填充物1000mg，市售。

4.14微孔濾膜：針孔式濾膜，濾膜孔徑為0.22μm，尼龍膜。

5儀器設(shè)備

5.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。

5.2旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

5.3超聲波發(fā)生器。

5.4分析天平：感量0.1mg和0.0001g。

6試樣的制備

取不少于100g人參干樣（鮮樣用組織搗碎機(jī)搗碎后60℃烘干），用粉碎機(jī)粉碎，過60目篩，

充分混勻后裝瓶密封，置于冷凍室內(nèi)-18℃保存，待測。

7分析步驟

7.1提取

稱取人參試樣1g（精確至0.0001g），置于50mL具塞錐形瓶中，用石油醚-丙酮溶液（見4.6）

作為提取液，先用10mL提取液浸泡2h，然后在超聲波發(fā)生器中提取三次，其中加提取液均為10mL，

每次30min，濾紙過濾。用15mL丙酮（見4.5）分三次洗滌錐形瓶與殘?jiān)^濾。合并濾液置分液漏

斗中，加入2％硫酸鈉溶液（見4.9）20mL，振搖，靜置分層后，棄去水層，有機(jī)層過無水硫酸鈉（見

4.8）層析柱轉(zhuǎn)至平底燒瓶中，并用15mL石油醚（見4.4）分三次洗滌硫酸鈉層析柱合并洗液至100mL

平底燒瓶中。

7.2凈化

7.2.1濃縮

將盛有淋洗液的100mL平底燒瓶用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在40℃水浴、40rpm和低于0.06Mpa條件下，

濃縮至試樣少于1mL，取下用氮?dú)獯抵两?，立即加?.0mL甲醇-二氯甲烷（見4.3）洗脫液，搖勻

后待凈化。

7.2.2凈化

2

DB22/T1230—2011

先用5mL甲醇-二氯甲烷溶液（見4.3）洗脫液活化SPE柱（見4.12）。然后將提取溶液上樣,

開始收集,再用5mL甲醇-二氯甲烷溶液（見4.3）洗脫液進(jìn)行洗脫，并重復(fù)1次。收集洗脫液于100mL

平底燒瓶中，40℃下減壓旋轉(zhuǎn)濃縮近干后用2mL乙腈定容，過0.2μm濾膜（見4.13），然后轉(zhuǎn)移至

2mL螺口玻璃樣品瓶中，密封，待測。以試劑作空白，按照樣品溶液的測定條件進(jìn)行測定。

7.3測定

7.3.1色譜參考條件

7.3.1.1色譜柱：EclipseXDB-C18，250mm×4.6mm×5μm，或相當(dāng)者。

7.3.1.2流動(dòng)相：乙腈＋水（46＋54）；流速1.0mL/min。

7.3.1.3柱溫：30℃。

7.3.1.4紫外檢測波長：225nm。

7.3.2測定

將儀器調(diào)至最佳狀態(tài)后，分別吸取10μL標(biāo)準(zhǔn)工作液(見4.12)、試樣凈化液（見7.2.2）和空白

溶液（見7.2.2），注入液相色譜儀，以保留時(shí)間定性，用外標(biāo)法定量，異菌脲標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖參見附錄A。

8分析結(jié)果計(jì)算

8.1定性分析

測得的試樣凈化液（見7.2.2）中保留時(shí)間分別與異菌脲標(biāo)準(zhǔn)工作液（見4.12）的保留時(shí)間相比較，如

果試樣凈化液中保留時(shí)間與異菌脲標(biāo)準(zhǔn)工作液的保留時(shí)間相差在±5%內(nèi)，均可認(rèn)定為異菌脲。對(duì)于

有檢出的樣品建議用LC-MS定性，避免產(chǎn)生假陽性。

8.2定量結(jié)果計(jì)算

樣品以原樣計(jì)，異菌脲的殘留量按式(1)計(jì)算：

c′A1′V

X=..........................(1)

m′A2

式中：

X——樣品中異菌脲的殘留量（mg/kg）；

c——標(biāo)準(zhǔn)溶液中異菌脲的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；

A1——樣品測定液中異菌脲的峰面積；

A2——標(biāo)準(zhǔn)溶液中異菌脲的峰面積；

V——樣品上機(jī)前定容體積，單位為毫升（mL）；

m——試料的質(zhì)量，單位為克（g）。

9精密度

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算數(shù)平均值的15%。

3

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AA

附錄A

（資料性附錄）

異菌脲農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

A.1異菌脲農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖