核酸實驗室培訓(xùn)課件課程目錄01實驗室分區(qū)與設(shè)計PCR實驗室四大功能區(qū)規(guī)劃與環(huán)境控制要求02生物安全管理三級防護(hù)體系建設(shè)與人員行為規(guī)范03核酸提取與純化樣本處理關(guān)鍵步驟與設(shè)備應(yīng)用04PCR擴(kuò)增技術(shù)擴(kuò)增原理、流程設(shè)計與質(zhì)量控制05質(zhì)量控制與風(fēng)險防范全流程質(zhì)量管理與污染預(yù)防策略06設(shè)備操作與維護(hù)自動化設(shè)備應(yīng)用與日常維護(hù)規(guī)范案例分享與實操演示第一章核酸實驗室分區(qū)設(shè)計科學(xué)合理的實驗室分區(qū)是保證核酸檢測準(zhǔn)確性和防止交叉污染的基礎(chǔ)。本章將詳細(xì)介紹PCR實驗室的標(biāo)準(zhǔn)化分區(qū)設(shè)計原則、各功能區(qū)的環(huán)境控制要求，以及如何通過物理隔離和單向流動確保檢測結(jié)果的可靠性。PCR實驗室四大分區(qū)試劑儲存與準(zhǔn)備區(qū)試劑配制、分裝及主反應(yīng)混合液制備的專用區(qū)域標(biāo)本制備區(qū)樣本處理、核酸提取與模板加樣操作區(qū)擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)DNA擴(kuò)增與實時熒光檢測的核心區(qū)域擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)電泳分析、結(jié)果判讀與數(shù)據(jù)處理區(qū)域關(guān)鍵原則：各區(qū)域必須嚴(yán)格遵守單向流動原則，人員、物品和樣本只能按照試劑準(zhǔn)備→標(biāo)本制備→擴(kuò)增反應(yīng)→產(chǎn)物分析的方向流動，絕不允許逆向流動，以防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染造成假陽性結(jié)果。實驗室分區(qū)流程示意物理隔離要求各區(qū)域采用獨立房間或有效物理隔斷設(shè)置緩沖間與傳遞窗口配備獨立的通風(fēng)系統(tǒng)安裝壓力監(jiān)控與報警裝置人員流動管理更衣室分區(qū)設(shè)置，工作服專區(qū)使用進(jìn)入各區(qū)前必須更換對應(yīng)防護(hù)裝備建立人員進(jìn)出登記制度定期進(jìn)行分區(qū)規(guī)范培訓(xùn)分區(qū)環(huán)境控制要求試劑準(zhǔn)備區(qū)潔凈度：萬級凈化標(biāo)準(zhǔn)溫度控制：18-25℃恒溫設(shè)備配置：超凈工作臺、4℃冰箱、-20℃冰箱壓力要求：微正壓（5-10Pa）標(biāo)本制備區(qū)生物安全：必須配備ⅡB2型生物安全柜氣溶膠防護(hù)：負(fù)壓環(huán)境（-5至-10Pa）消毒設(shè)施：紫外燈照射系統(tǒng)，每日消毒60分鐘廢棄物處理：設(shè)置醫(yī)療廢物專用收集點擴(kuò)增反應(yīng)區(qū)環(huán)境要求：正壓設(shè)計（10-15Pa）溫度濕度：20-25℃，相對濕度40-60%設(shè)備專用：PCR儀、實時熒光定量PCR儀污染防控：嚴(yán)禁擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)入此區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)壓力控制：負(fù)壓環(huán)境（-10至-15Pa）隔離要求：與其他區(qū)域物理隔離最遠(yuǎn)設(shè)備配置：電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)防污染措施：產(chǎn)物不得帶出本區(qū)域第二章實驗室生物安全管理生物安全是核酸實驗室運(yùn)行的生命線。本章將系統(tǒng)講解生物安全三級防護(hù)體系的構(gòu)建方法、個人防護(hù)裝備的正確使用規(guī)范，以及實驗室人員必須遵守的行為準(zhǔn)則，確保檢測人員安全和樣本處理規(guī)范。生物安全三級防護(hù)體系設(shè)施防護(hù)設(shè)備防護(hù)個人防護(hù)設(shè)施層面負(fù)壓實驗室設(shè)計HEPA高效過濾系統(tǒng)獨立排風(fēng)與凈化系統(tǒng)應(yīng)急淋浴與洗眼裝置設(shè)備層面生物安全柜（BSC）高壓滅菌器紫外線消毒燈密閉離心機(jī)個人層面N95/KN95口罩防護(hù)服或隔離衣雙層手套護(hù)目鏡或面屏專用工作鞋個人防護(hù)裝備規(guī)范操作穿戴順序（進(jìn)入實驗室）洗手消毒，戴第一層醫(yī)用手套穿防護(hù)服或隔離衣，拉好拉鏈戴N95口罩，進(jìn)行密合性檢查戴護(hù)目鏡或面屏戴第二層丁腈手套，覆蓋袖口穿防護(hù)鞋套脫卸順序（離開實驗室）手套外表面噴灑消毒劑脫外層手套，丟入醫(yī)療廢物桶脫防護(hù)服，內(nèi)面朝外卷起丟棄脫護(hù)目鏡，放入消毒液浸泡脫內(nèi)層手套，洗手消毒最后摘除口罩，再次洗手重要提示：整個穿脫過程應(yīng)避免防護(hù)裝備污染面接觸皮膚或衣物，每個步驟后都需進(jìn)行手部消毒。護(hù)目鏡使用后必須浸泡消毒，不可直接重復(fù)使用。實驗室人員行為規(guī)范單向流動原則人員和物品嚴(yán)格按照試劑區(qū)→標(biāo)本區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→產(chǎn)物區(qū)的方向流動，禁止逆向移動或跨區(qū)攜帶物品出入權(quán)限管理非實驗室工作人員嚴(yán)禁進(jìn)入核心檢測區(qū)域，參觀訪問需經(jīng)主管批準(zhǔn)并由專人陪同，全程佩戴防護(hù)裝備專區(qū)專用原則各功能區(qū)的移液器、離心機(jī)、試劑、耗材等必須專區(qū)專用，絕不允許混用或交叉使用，防止交叉污染操作記錄要求每日填寫實驗記錄、設(shè)備使用登記和消毒記錄，建立完整的可追溯體系，記錄保存至少2年禁止行為清單禁止在實驗區(qū)域飲食、吸煙或使用化妝品禁止將實驗室物品帶出實驗區(qū)域禁止用實驗手套接觸門把手、電話等公共物品禁止在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行非必要的快速動作禁止將個人物品（手機(jī)、鑰匙等）帶入實驗核心區(qū)第三章核酸提取與純化技術(shù)核酸提取是分子診斷的第一步，直接影響后續(xù)檢測的靈敏度和特異性。本章將介紹標(biāo)本采集保存要點、核酸提取的關(guān)鍵操作步驟、常見提取方法的優(yōu)缺點對比，以及如何避免提取過程中的污染風(fēng)險。核酸提取關(guān)鍵步驟樣本采集與保存采集要求：使用一次性無菌拭子采集咽拭子或鼻拭子樣本保存條件：2-8℃可保存48小時，-20℃保存1周，-80℃長期保存轉(zhuǎn)運(yùn)規(guī)范：使用三層包裝，冷鏈運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融樣本裂解裂解液作用：破壞細(xì)胞膜和病毒包膜，釋放核酸操作要點：在生物安全柜內(nèi)加入裂解液，避免氣溶膠產(chǎn)生孵育條件：56℃水浴10-30分鐘，確保充分裂解核酸結(jié)合與洗滌磁珠法：核酸吸附到磁珠表面，磁力分離純化柱法：核酸結(jié)合到硅膠膜上，洗滌去除雜質(zhì)洗滌步驟：使用含乙醇的洗滌液2-3次，去除蛋白質(zhì)和鹽離子核酸洗脫洗脫液：使用低鹽緩沖液或無核酸酶水洗脫體積：通常50-100μL，根據(jù)下游應(yīng)用調(diào)整質(zhì)量檢測：使用分光光度計測定A260/280比值（1.8-2.0為純）安全警示：核酸提取過程中使用的苯酚、氯仿等有機(jī)試劑具有強(qiáng)毒性和腐蝕性，必須在生物安全柜內(nèi)操作，佩戴雙層手套，避免皮膚接觸。廢液按照危險化學(xué)品處理規(guī)范收集處置。核酸純化設(shè)備與方法主要設(shè)備類型超聲波水浴儀用于樣本裂解前的預(yù)處理，通過超聲波震蕩促進(jìn)細(xì)胞破碎，提高裂解效率高速離心機(jī)轉(zhuǎn)速可達(dá)12000-15000rpm，用于沉淀細(xì)胞碎片、分離核酸，配備冷凍功能保護(hù)核酸自動核酸提取儀基于磁珠法的全自動化系統(tǒng)，可同時處理8-96個樣本，減少人工操作誤差和污染風(fēng)險手工法vs自動化提取對比比較維度手工提取自動化提取處理通量1-24個樣本/批次8-96個樣本/批次提取時間60-90分鐘30-45分鐘人工成本需要熟練操作員全程參與僅需樣本加載和結(jié)果收取重復(fù)性受操作者技術(shù)影響較大批間CV<5%，重復(fù)性好污染風(fēng)險氣溶膠和交叉污染風(fēng)險較高密閉系統(tǒng)，污染風(fēng)險低適用場景小批量樣本、科研實驗大批量篩查、臨床檢測第四章PCR擴(kuò)增技術(shù)與質(zhì)量控制聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是核酸檢測的核心技術(shù)，通過體外酶促反應(yīng)實現(xiàn)目標(biāo)DNA的指數(shù)級擴(kuò)增。本章將深入講解PCR的反應(yīng)原理、引物設(shè)計要點、實時熒光定量PCR技術(shù)的應(yīng)用，以及全流程質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。PCR擴(kuò)增原理與反應(yīng)體系PCR三步循環(huán)反應(yīng)變性94-95℃，DNA雙鏈解鏈退火50-65℃，引物結(jié)合模板延伸72℃，DNA聚合酶合成新鏈經(jīng)過25-40個循環(huán)后，目標(biāo)DNA片段呈指數(shù)級擴(kuò)增，擴(kuò)增量=2^n（n為循環(huán)數(shù)）標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系配置成分用量（25μL體系）2×PCRMix12.5μL上游引物（10μM）1μL下游引物（10μM）1μL探針（10μM）0.5μL模板DNA2μL無核酸酶水8μL實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)優(yōu)勢實時監(jiān)測：通過熒光信號實時監(jiān)測擴(kuò)增過程，繪制擴(kuò)增曲線定量分析：根據(jù)Ct值（熒光信號達(dá)到閾值的循環(huán)數(shù)）實現(xiàn)絕對或相對定量高靈敏度：可檢測低至10拷貝/反應(yīng)的模板寬動態(tài)范圍：線性檢測范圍跨越7-8個數(shù)量級無需后續(xù)處理：避免電泳步驟，減少污染風(fēng)險PCR質(zhì)量控制要點對照品設(shè)置陽性對照（PC）：已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，驗證試劑和儀器正常工作陰性對照（NC）：用無核酸酶水替代模板，監(jiān)測試劑污染空白對照（Blank）：不加任何樣本，檢測環(huán)境污染內(nèi)參對照：檢測樣本中的內(nèi)源性基因，驗證提取和擴(kuò)增有效性反應(yīng)體系配制規(guī)范冰上操作：所有試劑在冰上融化和混勻，避免酶活性下降MasterMix配制：先配制公共混合液，減少移液次數(shù)和誤差加樣順序：最后加入模板DNA，防止污染混勻方式：輕柔顛倒混勻或短暫離心，避免產(chǎn)生氣泡污染預(yù)防措施分區(qū)操作：嚴(yán)格在試劑準(zhǔn)備區(qū)配制反應(yīng)體系專用耗材：使用帶濾芯的移液器吸頭，防止氣溶膠污染單向流動：擴(kuò)增產(chǎn)物和陽性對照不得進(jìn)入試劑準(zhǔn)備區(qū)定期監(jiān)測：每周進(jìn)行環(huán)境表面和空氣采樣，檢測污染情況儀器校準(zhǔn)維護(hù)溫度校準(zhǔn)：每季度使用標(biāo)準(zhǔn)溫度計校準(zhǔn)各模塊溫度熒光校準(zhǔn)：定期使用熒光標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn)檢測器清潔保養(yǎng)：每次使用后清潔樣品倉，每月深度清潔一次性能驗證：每月使用標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行性能驗證，記錄Ct值和擴(kuò)增效率實時熒光PCR儀操作界面擴(kuò)增曲線解讀基線期（Baseline）：熒光信號低于檢測閾值，無明顯擴(kuò)增指數(shù)期（ExponentialPhase）：擴(kuò)增效率最高，Ct值在此階段確定平臺期（Plateau）：反應(yīng)底物耗盡，擴(kuò)增停滯Ct值判讀：Ct<35為陽性，Ct35-40為可疑需復(fù)檢，Ct>40或無Ct為陰性結(jié)果有效性判定陽性對照Ct值在質(zhì)控范圍內(nèi)陰性對照和空白對照無擴(kuò)增內(nèi)參基因Ct值在預(yù)期范圍重復(fù)樣本Ct值差異<0.5擴(kuò)增曲線呈標(biāo)準(zhǔn)S型熔解曲線單峰，無非特異性擴(kuò)增第五章實驗室內(nèi)務(wù)管理與清潔消毒規(guī)范的內(nèi)務(wù)管理和徹底的清潔消毒是防止實驗室污染、保證檢測質(zhì)量的重要保障。本章將詳細(xì)介紹實驗室日常清潔的標(biāo)準(zhǔn)操作程序、紫外線消毒的正確使用方法，以及醫(yī)療廢棄物的分類收集與處理規(guī)范。實驗室清潔消毒程序1每日清潔時間：實驗結(jié)束后順序：產(chǎn)物區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→標(biāo)本區(qū)→試劑區(qū)（逆流程方向）方法：用75%乙醇或0.5%含氯消毒液擦拭工作臺面、設(shè)備外表面2每周清潔內(nèi)容：地面拖洗、墻面擦拭、傳遞窗消毒工具：專用拖把、抹布分區(qū)使用，用后消毒晾干檢查：清點耗材庫存，檢查設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)3每月清潔深度清潔：清理通風(fēng)管道、更換過濾器設(shè)備保養(yǎng)：離心機(jī)、PCR儀內(nèi)部清潔和校準(zhǔn)環(huán)境監(jiān)測：表面采樣培養(yǎng)，檢測微生物污染4季度清潔全面消毒：使用過氧化氫氣溶膠或甲醛熏蒸系統(tǒng)維護(hù)：空調(diào)系統(tǒng)清洗、壓力梯度校準(zhǔn)驗證測試：潔凈度檢測、壓力監(jiān)測、照度測量紫外線消毒使用規(guī)范消毒參數(shù)設(shè)置紫外燈功率：≥30W/10m2照射時間：每日60分鐘以上照射距離：1-1.5米范圍內(nèi)有效使用時間：無人狀態(tài)下開啟更換周期：累計使用1000小時后更換燈管注意事項紫外線對皮膚和眼睛有害，人員必須離開保持照射表面清潔，灰塵會降低消毒效果每次使用后記錄照射時間和燈管累計時長定期用紫外線強(qiáng)度計檢測燈管輻照強(qiáng)度強(qiáng)度低于70μW/cm2時必須更換燈管醫(yī)療廢棄物處理規(guī)范感染性廢物包括：使用后的拭子、離心管、槍頭、手套、口罩等收集容器：黃色醫(yī)療廢物袋或利器盒預(yù)處理：噴灑消毒液后密封，貼上生物危害標(biāo)識暫存要求：專用暫存間，溫度≤20℃，不超過48小時化學(xué)性廢物包括：廢棄的有機(jī)試劑（苯酚、氯仿）、染料、消毒劑收集容器：棕色玻璃瓶或?qū)Ｓ没瘜W(xué)廢液桶分類原則：酸堿分開、有機(jī)無機(jī)分開、氧化還原劑分開處置方式：委托有資質(zhì)的危廢處置單位處理銳器廢物包括：注射針頭、破碎玻璃、手術(shù)刀片收集容器：專用防刺穿利器盒（黃色，硬質(zhì)）填充限制：不得超過容器容量的3/4封口要求：封口后不可再打開，貼危險警告標(biāo)簽法規(guī)要求：醫(yī)療廢物處理須遵循《醫(yī)療廢物管理條例》和《醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》，建立廢物登記臺賬，記錄廢物種類、重量、交接時間和去向，保存記錄至少3年。未經(jīng)處理的醫(yī)療廢物嚴(yán)禁混入生活垃圾。第六章先進(jìn)設(shè)備與自動化應(yīng)用隨著分子診斷技術(shù)的快速發(fā)展，自動化、智能化設(shè)備正在革新核酸檢測的工作模式。本章將重點介紹最新的分子POCT（即時檢測）技術(shù)、全自動核酸檢測系統(tǒng)的應(yīng)用場景，以及設(shè)備日常維護(hù)和故障排查的實用技巧。分子POCT創(chuàng)新解決方案閃測精靈Flash10核酸檢測機(jī)器人20分鐘快速檢測從樣本加入到結(jié)果輸出僅需20分鐘，突破傳統(tǒng)檢測時間瓶頸100高靈敏度檢測下限達(dá)100拷貝/毫升，媲美大型實驗室檢測水平99.5%準(zhǔn)確性特異性和靈敏度均>99.5%，減少假陽性和假陰性技術(shù)特點與應(yīng)用場景基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)無需專業(yè)實驗室，社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心、鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院即可開展核酸檢測，縮短患者等待時間口岸與交通樞紐機(jī)場、火車站、口岸等人流密集場所，實現(xiàn)快速篩查和應(yīng)急響應(yīng)應(yīng)急救援現(xiàn)場設(shè)備便攜，可用于突發(fā)公共衛(wèi)生事件的現(xiàn)場快速檢測和流行病學(xué)調(diào)查Flash10全自動檢測系統(tǒng)操作01樣本加載將采集的拭子樣本直接放入專用試劑管，無需預(yù)處理，旋緊管帽防止泄漏02儀器設(shè)置在觸摸屏上選擇檢測項目（新冠、流感等），掃描樣本條形碼，確認(rèn)患者信息03自動檢測系統(tǒng)自動完成樣本裂解、核酸提取、PCR擴(kuò)增和熒光檢測，全程無需人工干預(yù)04結(jié)果輸出20分鐘后屏幕顯示檢測結(jié)果（陽性/陰性），可導(dǎo)出PDF報告或上傳至LIS系統(tǒng)05廢物處理取出反應(yīng)卡和試劑管，放入醫(yī)療廢物袋密封處理，清潔樣本艙系統(tǒng)優(yōu)勢一體化設(shè)計，占地面積小于0.5m2即插即用，無需專業(yè)培訓(xùn)內(nèi)置質(zhì)控程序，自動判讀結(jié)果試劑常溫保存，無需冷鏈可遠(yuǎn)程監(jiān)控，支持?jǐn)?shù)據(jù)追溯操作注意事項首次使用前需進(jìn)行系統(tǒng)性能驗證每日開機(jī)前檢查試劑有效期樣本管必須密封良好，防止交叉污染定期清空廢液收集瓶遇到錯誤代碼及時查看說明書設(shè)備維護(hù)與故障排查日常清潔與消毒外部清潔：每日用75%乙醇擦拭設(shè)備外殼和觸摸屏樣本艙清潔：每10個樣本后用無塵布擦拭，每日用消毒濕巾深度清潔光路清潔：每周用專用鏡頭紙擦拭光學(xué)窗口，避免熒光信號衰減定期保養(yǎng)維護(hù)每月維護(hù)：檢查管路有否堵塞或泄漏，更換廢液收集瓶每季度維護(hù)：校準(zhǔn)溫度模塊，清洗進(jìn)樣針和分配針每年維護(hù)：聯(lián)系廠家進(jìn)行全面檢修，更換易損件，升級軟件系統(tǒng)數(shù)據(jù)備份管理自動備份：系統(tǒng)每日自動備份檢測數(shù)據(jù)到內(nèi)置存儲手動導(dǎo)出：每周將數(shù)據(jù)導(dǎo)出至外部硬盤或云端，保存至少2年隱私保護(hù)：患者信息加密存儲,設(shè)置訪問權(quán)限，防止數(shù)據(jù)泄露常見故障處理無法開機(jī)：檢查電源連接，查看保險絲是否燒斷檢測失?。簷z查試劑是否過期，樣本量是否足夠，重新運(yùn)行質(zhì)控?zé)晒庑盘柸酰呵鍧嵐鈱W(xué)窗口，檢查激光器狀態(tài)，必要時更換光源結(jié)果異常：用標(biāo)準(zhǔn)品重復(fù)檢測，排除試劑或儀器問題，聯(lián)系技術(shù)支持維護(hù)記錄：建立設(shè)備維護(hù)檔案，記錄每次保養(yǎng)、校準(zhǔn)、維修的時間、內(nèi)容和操作人，并妥善保存所有維護(hù)記錄和配件更換憑證，以便追溯和質(zhì)量審計。第七章典型案例分享與實操演示理論學(xué)習(xí)需要結(jié)合實踐操作才能真正掌握核酸檢測技術(shù)。本章將分享山東省基層核酸檢測能力提升培訓(xùn)班的成功經(jīng)驗，展示標(biāo)準(zhǔn)化操作流程的實際演示，幫助學(xué)員將所學(xué)知識轉(zhuǎn)化為實際操作技能。山東基層核酸檢測培訓(xùn)項目培訓(xùn)項目概況50+現(xiàn)場學(xué)員來自基層醫(yī)療機(jī)構(gòu)的檢驗技術(shù)人員10000+線上觀眾通過直播平臺同步學(xué)習(xí)的全國各地醫(yī)務(wù)人員3天培訓(xùn)周期理論授課、實操演示與考核評估培訓(xùn)內(nèi)容模塊質(zhì)量管理體系建設(shè)-ISO15189實驗室認(rèn)可要求生物安全操作規(guī)范-個人防護(hù)與實驗室分區(qū)管理樣本采集與運(yùn)輸-規(guī)范化采樣技術(shù)和冷鏈管理核酸提取實操-手工法和自動化設(shè)備操作對比PCR檢測技術(shù)-反應(yīng)體系配制和結(jié)果判讀質(zhì)量控制與數(shù)據(jù)分析-室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評培訓(xùn)特色與創(chuàng)新專家團(tuán)隊授課邀請省疾控中心、三甲醫(yī)院檢驗科主任和行業(yè)專家，結(jié)合臨床實際案例進(jìn)行深入講解，分享疫情防控一線經(jīng)驗小組實操訓(xùn)練5-6人一組進(jìn)行實際操作，每組配備1名帶教老師全程指導(dǎo)，手把手糾正操作錯誤，確保每位學(xué)員都能熟練掌握線上直播互動通過騰訊會議、釘釘?shù)绕脚_全程直播，設(shè)置實時答疑環(huán)節(jié)，線上觀眾可提問交流,擴(kuò)大培訓(xùn)覆蓋面考核認(rèn)證機(jī)制培訓(xùn)結(jié)束后進(jìn)行理論和實操考核,合格者頒發(fā)培訓(xùn)合格證書，作為崗位能力證明，納入繼續(xù)教育學(xué)分標(biāo)準(zhǔn)操作流程實操演示樣本采集與保存采集部位：鼻咽拭子（一側(cè)鼻孔深入10-15cm至鼻咽后壁）或口咽拭子（雙側(cè)扁桃體及咽后壁）采集技巧：輕柔旋轉(zhuǎn)拭子5-10秒，充分吸附分泌物，避免觸碰舌面樣本處理：立即將拭子浸入含3ml病毒保存液的采集管，在液面以上折斷拭子桿，旋緊管帽標(biāo)簽信息：貼上條形碼或填寫姓名、采集時間等信息核酸提取步驟樣本前處理：56℃滅活30分鐘（可選），離心去除粘液加入裂解液：吸取200μL樣本至EP管，加入裂解液混勻磁珠結(jié)合：加入磁珠懸液，震蕩混勻5分鐘，磁力架分離洗滌純化：用洗滌液A、B各洗滌2次，去除殘留雜質(zhì)洗脫核酸：加入50μL洗脫液，56℃孵育5分鐘，磁力分離收集上清PCR擴(kuò)增與檢測體系配制：按照試劑說明書配制PCR反應(yīng)液，在冰上操作加樣操作：先加反應(yīng)液再加模板，每個樣本設(shè)置雙孔復(fù)檢設(shè)置程序：選擇對應(yīng)檢測程序（如新冠：50℃15min，95℃3min，然后40個循環(huán)）上機(jī)檢測：蓋好光學(xué)蓋板，放入PCR儀,啟動運(yùn)行結(jié)果判讀與報告查看曲線：確認(rèn)陽性對照、陰性對照和內(nèi)參符合要求判讀標(biāo)準(zhǔn)：ORF1ab和N基因Ct<37為陽性，單基因陽性需復(fù)檢報告審核：雙人復(fù)核結(jié)果，檢查患者信息，簽字確認(rèn)結(jié)果上報：通過傳染病直報系統(tǒng)上報陽性結(jié)果（2小時內(nèi)）培訓(xùn)現(xiàn)場精彩瞬間學(xué)員反饋"通過這次培訓(xùn)，我系統(tǒng)學(xué)習(xí)了核酸檢測的全流程操作，尤其是生物安