(19)國家知識產(chǎn)權(quán)局(12)發(fā)明專利地址311200浙江省杭州市蕭山區(qū)蕭山經(jīng)濟技術(shù)開發(fā)區(qū)啟迪路198號杭州灣信合伙)33213CO7K14/705(2006.01)FuraRed-FuraRed-Cr黃光值copGFP焚光值CB1.copGFP/293細胞copGFP293陰性對照細胞本發(fā)明公開了一種大麻素類活性物質(zhì)的通熒光探針試劑FuraRed,對照組試劑包括空白對照單克隆細胞系copGFP/293和細胞內(nèi)游離鈣離得到空白對照單克隆細胞系copGFP/293.本發(fā)明的熒光值(Ca2+F)與copGFP的熒光值(PF)的比值21.一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于包括以下步驟：1)將大麻素受體基因CB1克隆到一個含有EF1啟動表達熒光蛋白的載體的CMV啟動子下，構(gòu)建表達質(zhì)粒；所述大麻素受體基因CB1為人源大麻素受體CB1基因，熒光蛋白為2)將步驟1)構(gòu)建的帶熒光蛋白基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到真核永生化細胞，并建立EF1-熒光蛋白基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，進行培養(yǎng)擴增得到檢測組培養(yǎng)液；同樣建立轉(zhuǎn)染空白對照質(zhì)粒，建立空白對照EF1-熒光蛋白基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，進行培養(yǎng)擴增得到對照組培養(yǎng)液；所述空白對照質(zhì)粒為pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP質(zhì)粒，建立空白對照EF1-熒光蛋白基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系的過程備得到EF1-copGFP慢病毒，將EF1-copGFP慢病毒感染人胚腎細胞293,得到空白對照單克隆細胞系copGFP/293;3)步驟2)檢測組培養(yǎng)液中加入四氫大麻酚，配制一系列不同四氫大麻酚濃度的檢測組標準液；檢測組標準液中分別加入細胞內(nèi)游離鈣離子探針試劑，充分反應(yīng)后，進行檢測胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值PF和熒光鈣離子的熒光值Ca2+F,以測得的熒光值Ca2+F/熒光值PF比值作為縱坐標，以四氫大麻酚的濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算擬合回歸方程；4)步驟2)檢測組培養(yǎng)液和對照組培養(yǎng)液中分別加入待測樣本，分別配制得到樣本液和對照液，樣本液中的待測樣本濃度與對照液中的待測樣本濃度相同；樣本液和對照液中分別加入細胞內(nèi)游離鈣離子探針試劑，充分反應(yīng)后，對反應(yīng)后的樣本液進行檢測胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值PF?和熒光鈣離子的熒光值Ca2+F?,對反應(yīng)后的對照液進行檢測胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值PF?和熒光鈣離子的熒光值Ca2+F?,計算得到熒光值Ca2+F?/熒光值PF?比值與熒光值Ca2+F?/熒光值PF?比值之差，并代入步驟3)回歸方程，即可計算出檢測樣本中的大麻素類活性物質(zhì)含量；步驟1)構(gòu)建的質(zhì)粒為pCMV-CB1·EF1-copGFP質(zhì)粒，其制備過程為：將人源大麻素受體CB1基因克隆到慢病毒表達載體pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP的CMV啟動子下，連接酶切位點步驟2)中，所述真核永生化細胞為慢病毒包裝細胞293V,建立EF1-熒光蛋白基因穩(wěn)轉(zhuǎn)胞293V,制備得到CMV-CB1·EF1-copGFP慢病毒，將CMV-CB1·EF1-copGFP慢病毒感染人胚腎細胞293;并在熒光顯微鏡下通過挑取克隆的方法獲得穩(wěn)定表達人源大麻素受體CB1的單克隆細胞系CB1·copGFP/293;步驟3)和步驟4)中的細胞內(nèi)游離鈣離子探針試劑均為FuraRed。2.如權(quán)利要求1所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟3)中，向檢測組培養(yǎng)液加入四氫大麻酚，配制四氫大麻酚濃度分別為0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/3.如權(quán)利要求1所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟3)中，進行檢測胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值PF和熒光鈣離子的熒光值Ca2+F的方法為：用熒光酶標儀進光蛋白的熒光值PF,640nm波長下檢測熒光鈣離子的熒光值Ca2+F。4.如權(quán)利要求1所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟4)中，35.一種大麻素類活性物質(zhì)的檢測試劑盒，其特征在于所述檢測試劑盒分為檢測組試劑和對照組試劑兩種成分，所述檢測組試劑包括穩(wěn)定表達人源大麻素受體CB1的單克隆細胞系CB1·copGFP/293和細胞內(nèi)游離鈣離子檢測熒光探針試劑FuraRed,所述對照組試劑包括空白對照單克隆細胞系copGFP/293和細胞內(nèi)游離鈣離子檢測熒光探針試劑FuraRed;所述空白對照單克隆細胞系copGFP/293的制備方法為：將pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP質(zhì)粒、pH1質(zhì)粒、pH2質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至慢病毒包裝細胞293V,制備得到EF1-copGFP慢病毒，將EF1-copGFP慢病毒感染人胚腎細胞293,得到所述空白對照單克隆細胞系copGFP/293;穩(wěn)定表達人源大麻素受體CB1的單克隆細胞系CB1·copGFP/293的制備方法為：將pCMV-CB1·EF1-copGFP質(zhì)粒、pH1質(zhì)粒、pH2質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至慢病毒包裝細胞293V,制備得到CMV-CB1·EF1-copGFP慢病毒，將CMV-CB1·EF1-copGFP慢病毒感染人胚腎細胞293;并在熒光顯微鏡下通過挑取克隆的方法獲得穩(wěn)定表達人源大麻素受體CB1的單克隆細胞系CB1·4一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法及其檢測試劑盒技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法及其檢測試劑盒。背景技術(shù)[0002]對于吸毒人員吸食大麻類精神物質(zhì)的檢測和監(jiān)管一直是各國監(jiān)管部門的難題。因為目前的檢測手段主要依賴于抗體(如抗四氫大麻抗體)的免疫法，包括層析法、ELISA法等；以及氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用等大型儀器分析。但大麻類在人體內(nèi)代謝較快，造成檢測樣本中目標檢測成分含量極低，無法檢測到。另一方面，新型合成大麻素層出不窮，且分子結(jié)構(gòu)發(fā)明內(nèi)容[0003]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法及其檢測試劑盒。[0004]本發(fā)明構(gòu)思為：無論是天然大麻素，還是各種各樣的合成大麻素，其在機體內(nèi)都會作用到大麻素受體這個靶點，從而產(chǎn)生其生物學(xué)效應(yīng)。大麻素受體至少包括CB1、CB2兩種類作用后信號通路激活，即通過IP3-DAG信號通路使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)儲存的Ca2+迅速釋放到的細胞質(zhì)，胞質(zhì)內(nèi)游離鈣離子濃度升高，從而產(chǎn)生細胞應(yīng)答。由于有非常多的鈣離子指示劑可用于胞質(zhì)內(nèi)游離鈣離子濃度的測定，因而我們通過建立同時表達綠色熒光蛋白copGFP穩(wěn)轉(zhuǎn)CB1以熒光鈣與copGFP的熒光比值為測定參數(shù)，建立一種新型的快速簡便、高效精準、高通量通用的大麻素類活性物質(zhì)檢測方法。[0005]所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于包括以下步驟：[0006]1)將大麻素受體基因CB1克隆到一個含有EF1啟動表達熒光蛋白的載體的CMV啟動[0007]2)將步驟1)構(gòu)建的帶熒光蛋白基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到真核永生化細胞，并建立EF1-熒光蛋白基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，進行培養(yǎng)擴增得到檢測組培養(yǎng)液；同樣建立轉(zhuǎn)染空白對照質(zhì)粒，建立空白對照EF1-熒光蛋白基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，進行培養(yǎng)擴增得到對照組培養(yǎng)液；[0008]3)步驟2)檢測組培養(yǎng)液中加入四氫大麻酚，配制一系列不同四氫大麻酚濃度的檢測組標準液；檢測組標準液中分別加入細胞內(nèi)游離鈣離子探針試劑，充分反應(yīng)后，進行檢測胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值PF和熒光鈣離子的熒光值Ca2+F,以測得的熒光值Ca2+F/熒光值PF比值作為縱坐標，以四氫大麻酚的濃度為橫坐標繪制標準曲線，計算擬合回歸方程；[0009]4)步驟2)檢測組培養(yǎng)液和對照組培養(yǎng)液中分別加入待測樣本，分別配制得到樣本液和對照液，樣本液中的待測樣本濃度與對照液中的待測樣本濃度相同；樣本液和對照液中分別加入細胞內(nèi)游離鈣離子探針試劑，充分反應(yīng)后，對反應(yīng)后的樣本液進行檢測胞內(nèi)熒5光蛋白的熒光值PF?和熒光鈣離子的熒光值Ca2F?,對反應(yīng)后的對照液進行檢測胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值PF?和熒光鈣離子的熒光值Ca2F?,計算得到熒光值Ca2F?/熒光值PF?比值與熒光值Ca2F?/熒光值PF?比值之差，并代入步驟3)回歸方程，即可計算出檢測樣本中的大麻素類活性物質(zhì)含量。[0010]所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟1)中，所述大麻素受體基因CB1為人源大麻素受體CB1基因，熒光蛋白為copGFP。[0011]所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟1)構(gòu)建的質(zhì)粒為pCMV-CB1·EF1-copGFP質(zhì)粒，其制備過程為：將人源大麻素受體CB1基因克隆到慢病毒表達[0012]所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟2)中，所述真核永生化細胞為慢病毒包裝細胞293V,建立EF1-熒光蛋白基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系的過程為：將pCMV-CB1·EF1-copGFP質(zhì)粒、pH1質(zhì)粒、pH2質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至慢病毒包裝細胞293V,制備得到CMV-CB1·EF1-copGFP慢病毒，將CMV-CB1·EF1-copGFP慢病毒感染人胚腎細胞293;并在熒光顯微鏡下通過挑取克隆的方法獲得穩(wěn)定表達人源大麻素受體CB1的單克隆細胞系CB1·[0013]所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟2)中，所述空白對照質(zhì)粒為pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP質(zhì)粒，建立空白對照EF1-熒光蛋白基因穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系293V,制備得到EF1-copGFP慢病毒，將EF1-copGFP慢病毒感染人胚腎細胞293,得到空白對照單克隆細胞系copGFP/293。[0014]所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟3)中，向檢測組培養(yǎng)液加入四氫大麻酚，配制四氫大麻酚濃度分別為0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL、0.8ng/mL和1.6ng/mL的5種檢測組標準液。[0015]所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟3)和步驟4)中的細胞內(nèi)游離鈣離子探針試劑均為FuraRed;步驟3)中，進行檢測胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值PF和熒光鈣離子的熒光值Ca2+F的方法為：用熒光酶標儀進行測試，選擇482nm單波長激發(fā)，以507nm和640nm雙波長檢測，其中507nm波長下檢測胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值PF,640nm波長下檢測熒光鈣離子的熒光值Ca2+F。[0016]所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的通用檢測方法，其特征在于步驟4)中，所述待測[0017]所述的一種大麻素類活性物質(zhì)的檢測試劑盒，其特征在于所述檢測試劑盒分為檢測組試劑和對照組試劑兩種成分，所述檢測組試劑包括穩(wěn)定表達人源大麻素受體CB1的單克隆細胞系CB1·copGFP/293和細胞內(nèi)游離鈣離子檢測熒光探針試劑FuraRed,所述對照組試劑包括空白對照單克隆細胞系copGFP/293和細胞內(nèi)游離鈣離子檢測熒光探針試劑FuraRed;所述空白對照單克隆細胞系copGFP/293的制備方法為：將pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP質(zhì)粒、pH1質(zhì)粒、pH2質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至慢病毒包裝細胞293V,制備得到EF1-copGFP慢病毒，將EF1-copGFP慢病毒感染人胚腎細胞293,得到所述空白對照單克隆細胞系copGFP/6[0019](1)避免了免疫檢測法依賴于抗體的局限，可直接對所有大麻素類活性物質(zhì)進行通用檢測，沒有非特異性結(jié)合問題，無需昂貴人力物力和繁復(fù)長周期的抗體研發(fā)過程；同時也避免了氣質(zhì)聯(lián)用、液質(zhì)聯(lián)用法依賴于對照品的局限、有限的檢測限、以及復(fù)雜的樣品前處理工作。本發(fā)明的技術(shù)方案可實現(xiàn)所有大麻素類活性物質(zhì)的精確、高靈敏的快速檢測，無論是天然大麻素、還是合成大麻素，包括層出不窮的新型合成大麻素活性物質(zhì)，可解決大麻類精神活性物質(zhì)監(jiān)管難的問題。[0020](2)用現(xiàn)有成熟的胞質(zhì)內(nèi)游離鈣離子指示劑，以穩(wěn)轉(zhuǎn)表達的綠色熒光蛋白為內(nèi)參質(zhì)控，可對痕量大麻類精神活性物質(zhì)進行定性定量檢測分析。[0021](3)用通用熒光酶標儀、流式細胞儀等儀器測定，可在絕大多數(shù)普通實驗室實現(xiàn)[0022](4)由于是基于受體信號通路的生物學(xué)效應(yīng)的檢測，結(jié)果不僅可正確判斷是否是大麻素類活性物質(zhì)，而且可以對其活性進行定量評估，為監(jiān)管、和醫(yī)學(xué)干預(yù)提供可靠的實驗[0023](5)本發(fā)明提供一種穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，其能夠通過CB1的IP3-DAG信號通路對包括天然大麻素和合成大麻素在內(nèi)的所有大麻素類活性物質(zhì)產(chǎn)生應(yīng)答，從而可應(yīng)用于大麻素類活性物質(zhì)的高靈敏的通用檢測。該穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系中包含一個由CMV啟動高表達基因CB1;當大麻素胞質(zhì)，胞質(zhì)內(nèi)游離Ca2+可瞬間提高百倍，通過在穩(wěn)轉(zhuǎn)CB1的細胞中同時表達綠色熒光蛋白copGFP,以copGFP為內(nèi)參質(zhì)控，F(xiàn)uraRed為鈣離子熒光指示劑；用熒光酶標儀進行胞內(nèi)熒光與copGFP的熒光值(PF)的比值Ca2F/PF作為檢測對象的定性定量判定依據(jù)，建立一種新型的快速簡便、高效精準、高通量通用的大麻素類活性物質(zhì)定性定量檢測方法，另一方面本發(fā)試劑盒，該檢測試劑盒基于CB1受體的IP3-DAG信號通路，通過檢測胞質(zhì)內(nèi)游離鈣離子濃度變化，以熒光鈣的熒光值(Ca2+F)與copGFP的熒光值(PF)的比值Ca2+F/PF參數(shù)作為判定依附圖說明[0024]圖1為pCMV-CB1·EF1-copGFP質(zhì)粒圖譜；值(507nm檢測)比值為縱坐標繪制的標準曲線；[0026]圖3為采用本發(fā)明的大麻素類活性物質(zhì)的檢測試劑盒對毛發(fā)樣本的檢測結(jié)果。[0027]圖4為競爭ELISA法對0-12.8ng/mL濃度THC的檢測結(jié)果，結(jié)果表明對THC的檢測極限>0.4ng/mL;[0028]圖5為競爭ELISA法對0.4-12.8ng/mL濃度THC的檢測標準曲線；[0029]圖6為競爭ELISA法對毛發(fā)樣本的檢測結(jié)果。7具體實施方式[0030]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明的保護范圍并不限于此。[0031]以下實施例中，慢病毒包裝細胞293V購自于北京英茂盛業(yè)生物科技有限公司。[0032]實施例1pCMV-CB1·EF1-copGFP質(zhì)粒構(gòu)建[0033]通過連接酶切位點EcoRI和NotI,將人源大麻素受體CB1基因克隆到慢病毒表達[0034]實施例2建立CB1·copGFP/293穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系和copGFP/293穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系[0035]將pCMV-CB1·EF1-copGFP質(zhì)粒、pH1質(zhì)粒、pH2質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染到慢病毒包裝系細胞霉素、100μg/mL鏈霉素雙抗)將慢病毒包裝系細胞293V配成1×10?個/mL濃度，并接種于一[0037]2)轉(zhuǎn)染：待培養(yǎng)皿中細胞長至70%-80%的融合度時，用PEI轉(zhuǎn)染試劑(參照其標準的共轉(zhuǎn)染培養(yǎng)皿中的細胞293V。[0038]3)收集病毒：步驟2)培養(yǎng)70-72小時后收集上清液；于4℃溫度且8000g相對離心力條件下進行離心分離15分鐘，去沉淀，取上清病毒液過0.45μm濾膜，得到濾過的上清病毒[0039]4)病毒濃縮：取步驟3)濾過的上清病毒液(約30mL),于4℃溫度且90000g相對離心[0040]5)HEK293細胞準備：預(yù)先將1×10?個/mL濃度的HEK293細胞接種12孔細胞培養(yǎng)板1[0041]6)HEK293細胞轉(zhuǎn)染：將步驟5)的12孔板中的培養(yǎng)HEK293細胞的培養(yǎng)液吸掉，加入DMEM-H完全培養(yǎng)液。[0042]7)CB1·copGFP/293單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系建立：將步驟6)轉(zhuǎn)染細胞培養(yǎng)一周以上后，配成1×103個/mL濃度接種于6孔細胞培養(yǎng)板，2mL/孔；培養(yǎng)10天后在熒光顯微鏡下用50μl的移液槍挑取不同熒光強度的單個克隆細胞團，移至新的6孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，1個克隆/copGFP/293細胞克隆系，用于不同活性效應(yīng)程度的大麻素類活性物質(zhì)檢測。[0043]copGFP/293單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系建立：依上述1)-7)的步驟，建立copGFP/293單克隆穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系，不同之處在于：步驟2)中的pCMV-CB1·EF1-copGFP質(zhì)粒用同等質(zhì)量的pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP質(zhì)粒替換，最后得到copGFP/293單克隆穩(wěn)[0044]實施例3大麻素類活性物質(zhì)通用檢測試劑盒的應(yīng)用[0045]基于本發(fā)明技術(shù)方案研發(fā)的大麻素類活性物質(zhì)通用檢測試劑盒可應(yīng)用于含大麻素類活性物質(zhì)的各種樣本檢測。本實施例中我們以吸食大麻人員的毛發(fā)為例。具體步驟如8[0046]1)毛發(fā)樣本處理：取6份大麻吸食人員的毛發(fā)樣本和8份無吸食史的正常人的毛發(fā)[0047]剪取發(fā)根3cm以內(nèi)的毛發(fā)樣本20mg/份，剪碎后放入5mL的EP管，加2mL含1%角蛋白酶的HBSS緩沖液(pH7.4),加入少量鋯珠和石英砂，粉碎儀上振蕩粉碎1分鐘，分別得到相應(yīng)的樣本液。表1毛發(fā)樣本編號樣本大麻吸食人員的毛發(fā)樣本無吸食史的正常人的毛發(fā)樣本編號[0049]2)細胞準備：提前一天將5×10?個/mL濃度的單克隆CB1·copGFP/293細胞和空白[0051]標準品組：CB1·copGFP/293細胞共5孔，各孔含THC標準品終濃度分別為0.1ng/驟處理。[0052]樣本組：CB1·copGFP/293細胞共42孔(每樣3個重復(fù)孔),加入步驟1)所得樣本液，細胞同樣步驟處理。[0053]4)檢測：對步驟3)處理的標準品組和樣本組，分別進行胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值檢測和熒光鈣離子的熒光值檢測，標準品組和樣本組的檢測方法步驟相同。標準品組的檢測過程為：將FuraRed工作液加入步驟3)處理的標準品組中，37℃培養(yǎng)20分鐘，加入3倍體積離心細胞，以防細胞丟失；37℃培養(yǎng)10分鐘，然后用熒光酶標儀進行細胞內(nèi)熒光鈣離子檢(標記為FuraRed-Ca2+熒光值),507nm下檢測細胞內(nèi)熒光蛋白的熒光值(標記為copGFP熒光值)。[0054]5)結(jié)果：對步驟3)標準品組的檢測結(jié)果繪制標準曲線，標準曲線的橫坐標為THC標準品濃度，標準曲線的縱坐標為FuraRed-Ca2+熒光值/copGFP熒光值比值，回歸方程為y=0.7627x+0.8093,R2=0.9885,繪制的標準曲線如圖2所示。步驟3)樣本組對CB1·copGFP/293細胞和copGFP/293陰性對照細胞的檢測應(yīng)答結(jié)果如圖3,從圖3可以看出，可明顯區(qū)分出陽性樣本和陰性樣本，有極顯著差異。根據(jù)回歸方程為y=0.7627x+0.8093計算，陰性樣本均檢測不到大麻素成分，陽性樣本中大麻素相對含量分別為(ng/mg):C1:[0055]對比例1:競爭ELISA法檢測大麻吸食人員的毛發(fā)樣本[0056]目前大麻類檢測主要依賴于免疫法檢測，包括膠體金免疫層析法和競爭ELISA法。膠體金法適合快檢，但在靈敏度上ELISA法要比膠體金法高1個數(shù)量級。本對比例即以ELISA9法檢測大麻吸食人員的毛發(fā)樣本為例。具體步驟如下：[0057]1)毛發(fā)樣本處理：用實施例3中步驟1)的方法處理樣本，分別得到相應(yīng)的樣本液(毛發(fā)樣本編號與表1相同)。[0058]2)包被抗原：用0.05mol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.6)將THC-BSA抗原蛋白配制成1μg/異性結(jié)合。[0060]標準曲線組：將THC標準品用PBS緩沖液(pH7.4)配成終濃度分別為0、0.1、0.2、[0062]4)競爭結(jié)合