1、醫(yī)療器械微生物檢查、醫(yī)療器械微生物限度檢查、醫(yī)療器械微生物限度檢查、概述、微生物限度檢查法系統(tǒng)是未規(guī)定的滅菌制劑及其原料、輔料的微生物污染程度的檢查方法。微生物限度檢查，細菌，真菌種群，控制細菌，醫(yī)療器械微生物檢查，概述，微生物：小型身體，簡單結構，通常通過光學顯微鏡和電子顯微鏡可以看到明確的生物學特性：1，單細胞，簡單多細胞，非細胞3，進化狀態(tài)低分類：原核生物a) 醫(yī)療品：接觸人體完整皮膚的醫(yī)療品b) 醫(yī)療品：接觸人體完整皮膚的醫(yī)療用品c) 醫(yī)療用品：接觸人體無菌組織、器官和血液、受損皮膚和粘膜的醫(yī)療用品，醫(yī)療器械微生物檢查，常用檢查標準，2010年版附錄XIJ，“” 微生物學基本微生物實踐

2、基礎無菌操作識別，醫(yī)療器械微生物檢驗，實驗環(huán)境，清潔度10000級的本地清潔度100級的單向流動空氣區(qū)或隔離系統(tǒng)； 根據當前國家標準GB/t 16292-16294: 2010 中華人民共和國藥典驗證清潔度：在實驗過程中監(jiān)測：在實驗臺上打開試驗時準備的營養(yǎng)瓊脂板，在30 35下培養(yǎng)48h，殖民地平均值必須低于1cfu/90mm，直到實驗結束。醫(yī)療器械微生物檢驗、實驗儀器、儀器超凈工作臺、光學顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、壓力蒸汽滅菌器、薄膜過濾裝置、濁度儀等。儀器試管、注射器、三角瓶、刻度吸管、吸管、精密PH試紙、過濾杯、剪刀、鑷子、滅菌服、牛皮紙等。醫(yī)療器械微生物檢查、實驗準備、實驗環(huán)境保證實驗測試培

3、養(yǎng)基殺菌方法、醫(yī)療器械微生物檢查、實驗環(huán)境保證、環(huán)境清潔、表面消毒(75%(V/V)乙醇、尼日爾消化(13360000)溶液或其他合適的消毒溶液)空氣表面活性劑，中和劑或滅活劑確認用試劑1。靛藍基質試驗溶液2.1%二鹽酸試驗(氧化酶試驗)3。鹽酸三氯甲烷4.1mol/l測試，醫(yī)療器械微生物檢查，培養(yǎng)基，標準菌種處理和增菌劑培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基識別培養(yǎng)基，醫(yī)療器械微生物檢查，培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的ph值必須滿足細菌生長要求。應根據各種培養(yǎng)基的要求準確測量pH值。適合大多數(shù)細菌生長的pH值為7.2 7.6。酵母真菌(6.0 6.5)。可用于調整的1NHCl或NaOH。培養(yǎng)基的殺菌時間和溫度應按照各種培養(yǎng)基的

4、規(guī)定進行，以免失去滅菌效果及其培養(yǎng)基必需的營養(yǎng)成分。為了觀察細菌的生長特性和其他代謝活動引起的變化，制造的培養(yǎng)基必須透明。醫(yī)療器械微生物檢查，滅菌方法，濕熱：115 121，15 30分鐘物品立即清除，以備冷藏，滅菌物品內蒸汽冷凝引起的負壓，不要發(fā)生感染菌。干熱：160 170，2h適用于高溫玻璃、陶瓷或金屬產品的殺菌。滅菌程序需要驗證。應檢查醫(yī)療器械微生物檢驗、計數(shù)培養(yǎng)基適宜性檢驗、細菌、真菌和酵母系數(shù)用培養(yǎng)基的適宜性檢驗、成品培養(yǎng)基、脫水培養(yǎng)基或處方用培養(yǎng)基等。醫(yī)療器械微生物檢驗，系數(shù)徽章一致性檢驗，菌株Escherichia coliCMCC(b)44102staphy lococcus

5、 aureusCMCC(b)260003Bacillus，醫(yī)療器械微生物檢查，系數(shù)培養(yǎng)基適宜性檢查，細菌新鮮培養(yǎng)物準備(一般18h24h，白色閱讀24h48h，曲霉57天)，0.9%無菌氯化鈉溶液，每菌50cfu 100cfu細菌懸浮液應在室溫下保存2小時內，在2 8保存，24小時內即可使用。黑曲霉孢子懸浮液可保存在2 8下，在經過驗證的保管期間使用。醫(yī)療器械微生物檢查、計數(shù)培養(yǎng)基適宜性檢查、兩碟營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基大腸桿菌兩碟桿菌兩碟狀玫瑰鈉一千培養(yǎng)基candida兩碟型酵母浸出粉胯部葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：candida，醫(yī)療器械微生物檢查、樣品準備、試驗產品進入滅菌實驗室前，應進行表面消毒，并用適當

6、的消毒藥徹底消毒試驗容器表面。檢驗數(shù)量：試驗產品必須至少提取2個包裝單位，膠卷還不能超過4個。通常，應隨機抽取3倍以上的檢驗量(至少2個包裝單位)，用作試驗。醫(yī)療器械微生物檢驗，樣品準備，檢驗量：除非另有規(guī)定，一般用于試驗的檢驗量為10g或10ml；化學膜劑100cm2；可以酌情減少貴重物品、微量包裝藥品的檢驗量。如果要求對沙門氏菌進行檢查，則必須增加20g或20ml(其中10g或10ml用于陽性對照組測試)。用于測試準備的醫(yī)療器械微生物檢驗，用于測試的液體，固體、半固體或粘性液體10毫升或10g的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋為100毫升，混合為1: 10的試驗液體。油可以添加適量的

7、無菌吐溫80，使試驗產品均勻分散。水溶性液體也可以混合成試驗溶液。非水溶性試驗產品：乳化或萃取；試驗用膠片：100cm2用于試驗，切割，pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液100毫升浸泡，振動奶昔1: 10用作試驗用溶液；腸溶劑及結腸用制劑：試驗制劑10g，pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液(腸溶劑)PH7.6無菌磷酸鹽緩沖液(結腸藥)至100ml，放入45水浴中搖晃溶解，用作1: 10的試驗溶液。氣溶膠、試驗用噴霧、處理后第一次試驗準備；試驗準備抗菌活性試驗準備產品：培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法、中和法；醫(yī)療器械微生物檢驗、細菌、真菌和酵母計數(shù)、實驗方法皿膜過濾器培養(yǎng)基中的細菌總數(shù)：營養(yǎng)瓊脂培

8、養(yǎng)基真菌和酵母計數(shù)：玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基、酵母浸出粉末瓊脂培養(yǎng)基、醫(yī)療器械微生物檢驗、細菌、真菌和酵母計數(shù)、培養(yǎng)和計數(shù)不同規(guī)定、細菌培養(yǎng)3天、日菌落計數(shù)霉菌、日菌落計數(shù)如果需要，一天內菌落數(shù)增加菌落計數(shù)最多7天后，計算每個稀釋等級測試溶液的平均菌落數(shù)，細菌數(shù)，醫(yī)療器械微生物檢查，細菌，真菌和酵母數(shù)，方法驗證(1)測試組碟法：測試溶液1毫升1毫升測試細菌懸浮液，并行2碟，準備菌落數(shù)； 薄膜過濾法：試驗液，過濾，洗滌，最后沖洗液中加入1毫升試驗菌進行過濾，集落數(shù)；(2)細菌液體組測定添加的測試菌數(shù)。(3)試驗對照組供應試驗用溶液，并按照集落計數(shù)法測定試驗用背景細菌的數(shù)量。(4)稀釋劑對照組在試驗準備過

9、程中需要進行分散、乳化、中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時，應增加稀釋劑對照組，調查試驗準備過程中微生物受影響的程度。稀釋劑試驗細菌懸浮液；醫(yī)療器械微生物檢驗、細菌、真菌和酵母的數(shù)量，驗證測試必須分別計算至少3個獨立的并行測試和每個測試細菌每個測試的回收率。結果在3次單獨并行試驗中，判斷稀釋劑對照組的細菌回收率應低于70%。如果測試組的細菌回收率不低于70%，可以根據測試準備方法和計數(shù)法測定測試對象細菌、真菌和酵母的數(shù)量。測試中，如果測試組的細菌回收率低于70%，則應使用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法、中和法等或其組合，去除試驗產品的抗菌活性，并重新驗證。醫(yī)療器械微生物檢查，細菌，真菌和酵

10、母的數(shù)量，1。盤法應服用適合細菌數(shù)測定的連續(xù)23稀釋水平測試液。試驗溶液1ml，直徑90mm的滅菌盤，1520ml的溫度不超過45的融化營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胯部葡萄瓊脂培養(yǎng)基，混合，凝固，反培養(yǎng)。每個稀釋等級每個徽章至少制造兩個板。取1毫升陰性對照組檢查用稀釋液，放入滅菌盤內，注入培養(yǎng)基凝固，反過來培養(yǎng)。每個計數(shù)的培養(yǎng)基各制造兩個板塊，任何一個都不能帶來細菌的生長。醫(yī)療器械微生物檢查，細菌、真菌和酵母數(shù)，營養(yǎng)瓊脂-細菌玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基-真菌，醫(yī)療器械微生物檢查，細菌、真菌和酵母數(shù)，1。盤法細菌數(shù)報告規(guī)則：細菌，酵母選擇平均菌落數(shù)不到300個，真菌平均菌落數(shù)不到100個的

11、稀釋水平選擇，以細菌數(shù)報告(使用兩個有效數(shù)字)為基準；報告測試過程中包括的細菌數(shù)，即最大平均殖民地數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即1g、1ml或10cm2。如果每個稀釋級別的平板沒有集落生長，或者只有最低稀釋級別的平板有集落生長，但是平均集落數(shù)小于1，則細菌數(shù)報告為1乘以最小稀釋倍數(shù)。，醫(yī)療器械微生物檢查，細菌，真菌和酵母的數(shù)量，2。薄膜過濾器包含每個過濾膜1g或1ml的試驗溶液，并添加到適量稀釋劑中，相當于混合、過濾。如果每1g或1ml有更多的細菌用于測試，則適合1ml的稀釋等級，過濾。PH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或其他合適的清洗液沖洗過濾膜，清洗后去除。細菌是通過將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰鈉培養(yǎng)基或酵

12、母浸出粉胯部附著在葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基板上培養(yǎng)出來的。每個培養(yǎng)基至少制造一個濾膜。取1毫升陰性對照檢查用稀釋液，按照上述薄膜過濾法用作陰性對照。語音對照組不應有細菌生長。醫(yī)療器械微生物檢查，細菌，真菌和酵母的數(shù)量，2。膠片過濾細菌數(shù)報告規(guī)則：與1g或1ml的被測試菌落數(shù)相對應的細菌數(shù)；如果在濾膜上無菌，則細菌數(shù)報告為1(1g或1ml的濾膜，用于測試)或1乘以稀釋倍數(shù)的值。醫(yī)療器械微生物檢查，細菌，真菌和酵母的數(shù)量，在特殊情況下，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中有真菌和酵母，玫瑰紅色鈉瓊脂培養(yǎng)基中有細菌的話，就要分別計算真菌和酵母，細菌菌落的數(shù)量。然后將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的真菌和酵母數(shù)量或玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基中的細菌數(shù)量

13、與玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基中的真菌和酵母數(shù)量或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中的細菌數(shù)量進行了比較，比較了菌落數(shù)量高的培養(yǎng)基中的細菌數(shù)量。醫(yī)療器械微生物檢查，醫(yī)療器械微生物檢查，控制細菌檢查驗證，菌種(與細菌準備相同之前)大腸桿菌CMCC (b) 44102金黃色葡萄球菌CMCC(CMCC)使用薄膜過濾法時，將試驗液、過濾、洗滌、試驗菌放入最后沖洗液中過濾后，注入增液培養(yǎng)基或去除過濾膜。(2)音響菌對照組為驗證這種控制細菌檢查方法的特殊特性而培養(yǎng)。方法確認大腸埃希菌、大腸埃希菌、沙門氏菌檢測過程中陰性對照組細菌使用金黃色葡萄球菌。在銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌檢查過程中，驗證陰性對照組細菌是否使用大腸桿菌。語音

14、對照組未檢測到。結果陰性細菌對照組判斷不能檢測陰性調節(jié)細菌。如果檢測組檢測出了試驗菌，則按照試驗準備方法和檢查用控制細菌檢查法進行檢查。如果在試驗組中未檢測到試驗細菌，則應使用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法、中和法等，或結合這些方法，去除試驗產品的抗菌活性，并再次進行方法驗證。醫(yī)療器械微生物檢查，大腸桿菌檢查，測試1g，1ml，10cm2等10ml的檢查，直接或治療后在適量(100ml以上)的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，必要時延長到48小時。取上述培養(yǎng)物0.2毫升，接種于含有5毫克培養(yǎng)基的試管，并在5小時、24小時366nm紫外線下觀察，使用未接種的毫克培養(yǎng)基作為基準對照組。管內培養(yǎng)菌為熒光、

15、MUG陽性、無熒光、MUG陰性。觀察后，沿體外培養(yǎng)管壁添加幾滴靛玉紅基質試驗液，液體水平為靛藍色基質陽性的玫瑰紅色；顯示試劑的本色，靛藍氣質為陰性。背景控制必須是MUG語音和indi矩陣語音。、醫(yī)療器械微生物檢驗、大腸桿菌檢驗、MUG indigio矩陣檢驗、醫(yī)療器械微生物檢驗、MUG陽性、indigio矩陣陽性等大腸桿菌檢驗、受檢驗的大腸桿菌檢測；MUG陰性，靛氣質陰性，檢查結果未檢測到大腸桿菌；如果MUG陽性、indigo氣質陰性或MUG陰性、indigo氣質陽性，則應將膽鹽乳糖培養(yǎng)基的培養(yǎng)物涂在eosin亞甲基藍瓊脂培養(yǎng)基或mekang kai瓊脂培養(yǎng)基的板上，并培養(yǎng)18至24小時。如果板塊上不生長或不生長種群的群落與下表中顯示的種群的形態(tài)特征不匹配，則在試驗檢測中未檢測到大腸桿菌。在板塊上生長的種群與下表所示種群的形態(tài)