1、a,1,臨床PCR實(shí)驗(yàn)室的分區(qū)設(shè)計(jì)及工作流程,衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心 李金明,TelEmail: ljm63hn 2010.1.12-13福州,a,2,臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì),依據(jù)：衛(wèi)生部頒發(fā)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)200210號(hào)）,a,3,臨床標(biāo)本的接收,通常的工作流程：標(biāo)本采集 血清分離 編號(hào) 保存或檢測(cè) 應(yīng)在四個(gè)測(cè)定區(qū)域之外的地方或區(qū)域內(nèi)接收 接收的標(biāo)本應(yīng)收集在原始容器中 在核酸提取時(shí)帶入至標(biāo)本制備區(qū),a,4,標(biāo)本的接收區(qū)的儀器設(shè)備要求,如果在標(biāo)本接收區(qū)分離血清（漿）標(biāo)本，有1臺(tái)分離血清（漿）用離心機(jī)、1臺(tái)生物安全柜、1臺(tái)冰箱、加樣器及相

2、應(yīng)一次性經(jīng)高壓處理的消耗品如帶濾芯吸頭、標(biāo)本接收編號(hào)記錄本以及記號(hào)筆等即可。 如果不在標(biāo)本接收區(qū)分離血清（漿）標(biāo)本，只是簡(jiǎn)單的接收，則就不需要分離血清（漿）用離心機(jī)、生物安全柜、加樣器及其消耗品。,a,5,理想的PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)設(shè)計(jì)模式A,a,6,理想的PCR實(shí)驗(yàn)室分區(qū)設(shè)計(jì)模式B,a,7,A,B,a,8,a,9,a,10,a,11,臨床PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的一般原則,各區(qū)獨(dú)立 注意風(fēng)向 因地制宜 方便工作,“十六字口訣”,a,12,傳遞窗,傳遞窗,傳遞窗,a,13,符合基本要求的臨床PCR實(shí)驗(yàn)室的條件,（1）試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)和擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)等三個(gè)或四個(gè)區(qū)域在物理空間上，必須是完全相互獨(dú)立的

3、，各區(qū)域無(wú)論是在空間還是在使用中，應(yīng)始終處于完全的分隔狀態(tài)，不能有空氣的直接相通。 （2）各區(qū)的可移動(dòng)的儀器設(shè)備及各種物品包括實(shí)驗(yàn)記錄本、記號(hào)筆、試管架及清潔用具等必須專用。 （3）應(yīng)在標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)等相對(duì)有可能出現(xiàn)“污染物”的區(qū)域安裝排風(fēng)扇或其它排風(fēng)和有效的裝置，以使空氣按試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增（及產(chǎn)物分析）區(qū)方向流動(dòng)。,a,14,臨床PCR實(shí)驗(yàn)室的工作流程,試劑準(zhǔn)備區(qū),標(biāo)本制備區(qū),擴(kuò)增區(qū),產(chǎn)物分析區(qū),a,15,試劑準(zhǔn)備區(qū),PCR實(shí)驗(yàn)室中最為“潔凈”的區(qū)域，不應(yīng)有任何核酸的存在，包括試劑中所帶的標(biāo)準(zhǔn)品和陽(yáng)性對(duì)照。 所有實(shí)驗(yàn)用潔凈物品如離心管、吸頭等的存放和準(zhǔn)備處。 商品試劑盒

4、： 75%乙醇、焦碳酸二乙酯（DEPC）處理水、NaOH等可能需要自配 自制試劑：一次較大量配制，然后分裝成小瓶保存，每次檢測(cè)時(shí)，取出一小瓶使用，未用完的即棄掉，不再使用。 儀器設(shè)備主要有加樣器、天平、離心機(jī)和冰箱等，最好配備超凈工作臺(tái)。,a,16,標(biāo)本制備區(qū),儀器設(shè)備主要有生物安全柜、超凈臺(tái)、加樣器、高速臺(tái)式（冷凍）離心機(jī)、加熱模塊或水浴箱、冰箱等。生物安全柜不應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)室門(mén)口等易受人員走動(dòng)影響的地方，也不應(yīng)直對(duì)分體式空調(diào)。 主要是用于核酸樣本的提取，標(biāo)本的制備應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，可防止標(biāo)本氣溶膠的擴(kuò)散。 加樣器吸頭必須帶濾芯。 使用加熱模塊時(shí)，如在模塊孔中填入二氧化硅細(xì)砂，然后將標(biāo)本管置

5、于細(xì)砂中溫育，可得到較為一致的溫育溫度。,a,17,標(biāo)本制備區(qū),經(jīng)高溫溫育后的標(biāo)本，應(yīng)冷至室溫后再離心。 標(biāo)本制備的全過(guò)程中都應(yīng)戴一次性手套，并經(jīng)常更換（感覺(jué)有污染時(shí)）。 設(shè)備都應(yīng)定期或在有明顯已知污染后，使用中性消毒劑如異丙醇、戊二醇等或10%次氯酸鈉溶液消毒，使用10%次氯酸鈉溶液消毒后，應(yīng)再用70%乙醇洗滌去除殘留的次氯酸鈉。 生物安全：洗眼器，并配備一個(gè)急救箱，箱內(nèi)可放置75%酒精、絡(luò)合碘、棉簽、創(chuàng)可貼等必要的急用藥具。,a,18,擴(kuò)增區(qū),擴(kuò)增反應(yīng)體系的配制和提取核酸的加入，可在標(biāo)本制備區(qū)也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行，關(guān)鍵是要防止產(chǎn)物的污染。如果空間允許的話，也可在一個(gè)獨(dú)立的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。 采用“巢

6、式”P(pán)CR方法的第二輪擴(kuò)增的加樣，必須在本區(qū)進(jìn)行。 加樣時(shí)，先加提取的核酸模板樣本，每加完一個(gè)即蓋好蓋子，然后加陽(yáng)性質(zhì)控核酸模板，再就是標(biāo)本制備陰性質(zhì)控和僅含按樣本一樣稀釋的主反應(yīng)混合液的擴(kuò)增陰性質(zhì)控，這樣做的目的是，最大可能地測(cè)出以前擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。,a,19,擴(kuò)增區(qū),熱循環(huán)儀的電源應(yīng)專用，并配備一個(gè)不間斷電源（UPS）或穩(wěn)壓電源。 每次擴(kuò)增后，可使用可移動(dòng)紫外燈對(duì)擴(kuò)增熱循環(huán)儀進(jìn)行照射。 擴(kuò)增儀應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn)。,a,20,產(chǎn)物分析區(qū),產(chǎn)物分析區(qū)是臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的最后一個(gè)工作區(qū)域，也是需要打開(kāi)擴(kuò)增后反應(yīng)管進(jìn)行擴(kuò)增產(chǎn)物分析檢測(cè)的地方。是PCR實(shí)驗(yàn)室“最不潔凈”的區(qū)域。 儀器設(shè)備可有：電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)、測(cè)序儀、（酶標(biāo)儀和洗