1、a,1,對(duì)流免疫電泳,a,2,一、基本原理 在pH值8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白只帶有微弱的負(fù)電荷，而且它分子又較大，所以泳動(dòng)慢，受電滲作用的影響也大，往往不能抵抗電滲作用，故在電泳時(shí)，反而向負(fù)極倒退。而一般抗原蛋白質(zhì)常帶較強(qiáng)的負(fù)電荷，分子又較小，所以泳動(dòng)快，雖然由于電滲作用泳動(dòng)速度減慢，但仍能向正極泳動(dòng)。如將抗原置陰極，抗體置陽極，電泳時(shí)，兩種成分相對(duì)泳動(dòng)，一定時(shí)間后抗原和抗體將在兩孔之間相遇，并在比例適當(dāng)?shù)牡胤叫纬扇庋劭梢姷某恋砭€。這樣由于電泳的作用，不僅幫助抗體定向移動(dòng)，因而加速了反應(yīng)的出現(xiàn)，而且也限制了瓊脂擴(kuò)散時(shí)，抗原抗體向四周自由擴(kuò)散的傾向，因而也提高了敏感性，本法比瓊脂擴(kuò)散法的靈

2、敏度要高1016倍，而且反應(yīng)時(shí)間短，可用于各種蛋白的定性和半定量測(cè)定。,a,3,二、對(duì)流免疫電泳 即雙擴(kuò)+電泳技術(shù) 用途：同雙擴(kuò) 優(yōu)點(diǎn)：快、敏感性高 缺點(diǎn)：分辨力低,a,4,三、操作方法 1制瓊脂板 以pH8.6離子強(qiáng)度0.05巴比妥緩沖液配成1%1.5%瓊脂凝膠板，厚度2mm3mm。 2打孔 瓊脂冷卻后，按圖打孔，打成對(duì)的小孔數(shù)列，孔徑0.3cm0.6cm，孔距0.4cm1.0cm。挑去孔內(nèi)瓊脂，封底。 3加樣 一對(duì)孔中，一孔加抗原，另一孔加抗體。 4電泳 將抗原孔置于負(fù)極端。電流強(qiáng)度3mA/cm6mA/cm，電泳時(shí)間30min90min。,a,5,a,6,四、結(jié)果觀察 斷電后，將玻板置于燈光下，襯以黑色背景觀察。陽性者則在抗原抗體孔之間形成一條清楚致密的白色沉淀線。如沉淀線不清晰，可把瓊脂板放在濕盒中37數(shù)小時(shí)或置電泳槽過夜再觀察。,a,7,a,8,五、注意事項(xiàng) 1抗原抗體濃度的比例 當(dāng)抗原抗體比例不適合時(shí)，均不能出現(xiàn)明顯可見的沉淀線。 2適當(dāng)?shù)碾姖B作用在對(duì)流免疫電泳中是必要的。當(dāng)瓊脂質(zhì)量差時(shí)，電滲作用太大，而使血清中的其它蛋白成分也泳向負(fù)極，造成非特異性反應(yīng)。在某些情況，瓊脂糖由于缺乏電滲作用而不能用于對(duì)流免疫電泳。 4當(dāng)抗原抗體在同一介質(zhì)