1、熒光分光光度計(jì)自學(xué),專業(yè)：生態(tài)學(xué) 姓名：熊世威 學(xué)號：201111002005,儀器分析作業(yè)（二）,熒光分光光度計(jì)的百科解釋,熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定, 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化, 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長掃描范圍一般是190650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200800nm。可用于液體、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。,熒光分光光度計(jì)

2、基本原理,由高壓汞燈或氙燈發(fā)出的紫外光和藍(lán)紫光經(jīng)濾光片照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質(zhì)發(fā)出熒光，熒光經(jīng)過濾過和反射后，被光電倍增管所接受，然后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。 物質(zhì)熒光的產(chǎn)生是由在通常狀況下處于基態(tài)的物質(zhì)分子吸收激發(fā)光后變?yōu)榧ぐl(fā)態(tài), 這些處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,在返回基態(tài)的過程中將一部分的能量又以光的形式放出，從而產(chǎn)生熒光,不同物質(zhì)由于分子結(jié)構(gòu)的不同,其激發(fā)態(tài)能級的分布具有各自不同的特征，這種特征反映在熒光上表現(xiàn)為各種物質(zhì)都有其特征熒光激發(fā)和發(fā)射光譜；，因此可以用熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的不同來定性地進(jìn)行物質(zhì)的鑒定。 在溶液中，當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時(shí),其熒光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度通常有

3、良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,與紫外-可見分光光度法類似，熒光分析通常也采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行。,熒光分光光度計(jì)結(jié)構(gòu),（1）光源 為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈，后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜，且在300nm400nm 范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等，故較常用。 （2）激發(fā)單色器 置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。,（3）發(fā)射單色器 置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。 （4）樣品室 通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時(shí)，光源與檢測器成直角安排；測量固

4、體時(shí)，光源與檢測器成銳角安排。,（5）檢測器 一般用光電管或光電倍增管作檢測器?？蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D(zhuǎn)為電信號。 （6）顯示裝置 以前，顯示裝置有數(shù)字電壓表，記錄儀和陰極示波器等，現(xiàn)在，人們可以通過計(jì)算機(jī)軟硬件技術(shù)根據(jù)不同要求，來選擇不同的直觀的視頻讀出方式。,熒光分光光度計(jì)的發(fā)展歷程,熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì)，自動記錄式熒光分光光度計(jì)，計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì)三個(gè)階段；熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列。其他的還有低溫激光Shpolskill熒光分光光度計(jì)，配有壽命和相分辯測定的熒光分光光度計(jì)等。,熒光分光光度計(jì)的特點(diǎn),1、具有熒

5、光測試光門自動啟動功能 2、具有測試數(shù)據(jù)，自動打印功能。 3、檢測靈敏度高，測量范圍寬。 4、可連接微機(jī)工作站，擴(kuò)展分析測試功能。 5、自動曲線回歸。,熒光分光光度計(jì)的功能,1、波長掃描 波長掃描功能主要包括熒光強(qiáng)度和發(fā)光強(qiáng)度兩種數(shù)據(jù)模式。通過熒光強(qiáng)度數(shù)據(jù)模式可以得到樣品的激發(fā)光譜和熒光光譜，是一種比較常用的方法。 2、時(shí)間掃描 時(shí)間掃描是在規(guī)定的時(shí)間間隔內(nèi)采集被測樣品的熒光強(qiáng)度隨時(shí)間變化曲線?？梢杂脕肀O(jiān)測被測樣品的物理化學(xué)變化，動力學(xué)法可被執(zhí)行。,3、光度值法 使用波長法進(jìn)行定量，高達(dá)20個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品能被測量，通過標(biāo)準(zhǔn)濃度的每個(gè)點(diǎn)來繪制多邊形標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備可使用一次、二次、三次方

6、的曲線或折線，同時(shí)可獲得其相關(guān)系數(shù)R及R2。 4、三維掃描 可以得到三維圖、等高線圖，快速進(jìn)行未知樣品熒光峰位的測定。 5、強(qiáng)大的圖譜處理功能 兩個(gè)譜圖可進(jìn)行加、減、乘、除運(yùn)算，也可以計(jì)算譜圖面積；具有光譜校正和快門控制等。,熒光分光光度計(jì)的技術(shù)參數(shù),1.光源: 150W 氙燈 2.波長范圍:200nm-900nm 3.靈敏度：S/N500(峰對峰) 4.光柵: 1200grooves/250nm blazing 5.波長掃描速度: 最大5000nm/min 6.波長驅(qū)動器速度:10,000 nm/min 7.波長精確度:+ 2 nm 8.波長重復(fù)性:+ 2 nm 9.狹縫寬度: 1，2，5，10，20 nm 10.尺寸: 518mm(W)604mm(D)272mm(H) 11.重量: 43.7kg 12.電源: 100132V 50/60 Hz或者180240V 50/60 Hz（可選）,1.醫(yī)學(xué)和臨床檢驗(yàn)生物體試料的臨床分析 2.藥學(xué)和藥理學(xué)天然藥物分析，藥品質(zhì)量控制和藥物代謝的研究 3.