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1、恢復(fù)試驗(yàn),第一,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模谝?,掌握恢?fù)試驗(yàn)的原理和方法。熟悉本實(shí)驗(yàn)的操作過程,掌握數(shù)據(jù)處理方法。2.實(shí)驗(yàn)原理1。葡萄糖氧化酶法測(cè)血糖原理:葡萄糖氧化酶能將葡萄糖氧化成葡萄糖酸并釋放出過氧化氫。在過氧化物酶(POD)的作用下,后者與生色氧受體4-氨基安替比林偶聯(lián)合成紅色醌,即Trinder反應(yīng)。紅色醌化合物的產(chǎn)率與葡萄糖含量成正比?;厥諏?shí)驗(yàn)的原理,這種分析方法正確地確定了添加到常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力,并且用于確定測(cè)試方法的比例系統(tǒng)誤差,該誤差隨著分析物濃度(指添加劑的濃度)的增加而增加,這是由普通樣品中的其它物質(zhì)與分析物競(jìng)爭(zhēng)并與它們反應(yīng)引起的。通過測(cè)量GOD-POD法測(cè)得的血糖回收率,
2、可以反映該方法的比例系統(tǒng)誤差的存在或大小。3。設(shè)備、微量吸管、計(jì)算器、三用水浴、722可見分光光度計(jì)、4。試劑,1。含2.2摩爾/升血糖的血清樣品(用于恢復(fù)實(shí)驗(yàn)),2。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(80毫摩爾/升),3。葡萄糖測(cè)定的God-Pod法,5。操作步驟。樣品回收制備基礎(chǔ)樣品:血清0.9毫升0.1毫升蒸餾水回收樣品:血清0.9毫升0.01毫升80毫升/升葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.09毫升蒸餾水回收樣品:血清0.06毫升80毫升/升葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.04毫升蒸餾水回收樣品:血清0.9毫升0.09毫升80毫升/升葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01毫升蒸餾水,按下表操作,混合均勻,放入水浴中37分鐘15分鐘,調(diào)整空白6.回收
3、實(shí)驗(yàn)1的結(jié)果計(jì)算、數(shù)據(jù)處理。添加濃度計(jì)算:添加濃度(毫摩爾/升)=2?;厥諠舛扔?jì)算:通過回收樣品3測(cè)量的濃度?;厥章视?jì)算:回收率=100%,4。請(qǐng)?zhí)顚懹?jì)算結(jié)果表:7。注意事項(xiàng):在本實(shí)驗(yàn)中,準(zhǔn)確添加樣品尤為重要,因?yàn)橐治龅睦碚撝凳歉鶕?jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液和原始樣品的體積獲得的。添加樣品溶液后,總濃度必須在該方法的分析范圍內(nèi)。通常,需要添加高、中、低濃度進(jìn)行回收實(shí)驗(yàn),并計(jì)算平均回收率。加入標(biāo)準(zhǔn)溶液后,最好使實(shí)驗(yàn)樣品的測(cè)量濃度達(dá)到醫(yī)學(xué)確定的水平。加入的標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積優(yōu)選在整個(gè)反應(yīng)溶液體積的10%以內(nèi)。如果稀釋度太大,誤差會(huì)改變。方法學(xué)評(píng)價(jià)和回收率試驗(yàn):一般檢驗(yàn)方法要求回收率在95.5%之間,最理想的回收率應(yīng)為100%?;厥章式咏?00%,表明分析方法對(duì)純?nèi)芤夯驈?fù)雜基質(zhì)環(huán)境中的分析物具有相同的反應(yīng)能力,且
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