1、.,1,色譜定性定量方法,.,2,一、色譜定性方法,定性依據(jù) 主要依據(jù)是每個(gè)組份的保留值 一般需要標(biāo)準(zhǔn)樣品，離開已知純物質(zhì)的對(duì)照，就無法識(shí)別各色譜峰代表何種組份 對(duì)某一未知試樣，單獨(dú)用色譜法定性十分困難，因此常需與化學(xué)分析及其它儀器分析方法相結(jié)合,.,3,1.利用色譜保留參數(shù)定性,保留值定性 在一定的固定相和恒定的操作條件（如柱溫、流動(dòng)相流速、固定液含量、柱長和柱徑等）下，每種物質(zhì)都有一定的保留值（tR或VR），一般不受其它組份的影響，表現(xiàn)為每一組份的特征值 因此可利用已知物的保留值和未知物的保留值對(duì)照進(jìn)行定性 利用絕對(duì)保留值定性時(shí)，要求嚴(yán)格控制色譜操作條件，否則重現(xiàn)性較差 若采用相對(duì)保留值r

2、2,1作定性分析，它僅與柱溫有關(guān)，則可消除某些操作條件差異所帶來的影響 常用標(biāo)準(zhǔn)物：苯、正丁烷、對(duì)二甲苯、環(huán)己烷、2,3,4-三甲基戊烷 對(duì)于組份比較簡單的已知范圍的混合物試樣，可采用此法進(jìn)行定性。也可利用文獻(xiàn)上的r2,1值或色譜手冊(cè)中的r2,1值對(duì)照定性。,.,4,.,5,1.利用色譜保留參數(shù)定性,加入已知物增加峰高法 首先用被測試樣作色譜圖，然后將已知純物質(zhì)加到試樣中去，在相同的條件下作色譜圖，對(duì)比這兩個(gè)色譜圖 若后一色譜圖中某一色譜峰相對(duì)增高時(shí)，則該色譜峰的組份原則上與加入已知純物質(zhì)是同一種化合物 當(dāng)試樣組份比較復(fù)雜，峰間距離太近，或操作條件不易控制穩(wěn)定，很難準(zhǔn)確地測定其保留值時(shí)，可采用

3、此法進(jìn)行定性,.,6,1.利用色譜保留參數(shù)定性,雙柱法定性 將試樣和標(biāo)準(zhǔn)物的混合物分別在兩根極性相差較大的色譜柱上進(jìn)行色譜分離 觀察標(biāo)準(zhǔn)物和未知物色譜峰在這兩根柱子上是否始終重合，如兩色譜峰始終重合，可判斷為同一組份，否則不是同一組份。 可以避免不同組份由于保留值的偶然一致性，可能發(fā)生的定性錯(cuò)誤。,.,7,2.與其它方法結(jié)合定性,與化學(xué)方法結(jié)合進(jìn)行定性 將試樣經(jīng)過一些特殊試劑處理，發(fā)生物理變化或化學(xué)反應(yīng)后，其色譜峰將會(huì)提前、移后或完全消失 比較處理前后色譜圖的差異，以及在柱后用化學(xué)試劑鑒定流出物，就可初步定性鑒別試樣中含有哪些官能團(tuán),.,8,2.與其它方法結(jié)合定性,與光譜、質(zhì)譜聯(lián)合定性 色譜儀

4、與光譜或質(zhì)譜儀等聯(lián)用，實(shí)際上是光譜儀和質(zhì)譜儀等起著檢測器的作用，將復(fù)雜組份的混合物經(jīng)色譜柱分離為單組份，再利用紅外光譜、質(zhì)譜或核磁共振譜等進(jìn)行定性分析 既充分利用光譜、質(zhì)譜等適于分析分子結(jié)構(gòu)、官能團(tuán)或物質(zhì)的摩爾質(zhì)量等特點(diǎn)，克服了它們不易檢定復(fù)雜物質(zhì)的困難，又充分利用了色譜的高效分離能力 聯(lián)用方法是解決復(fù)雜未知物定性問題最有效的方法之一，其中特別是色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，是當(dāng)今分離和鑒定未知物最好的手段,.,9,二、色譜定量方法,1.定量依據(jù)和校正因子 在一定的操作條件下，被測組份的質(zhì)量mi與檢測器產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)（色譜圖上表現(xiàn)為峰面積）Ai成正比，比例系數(shù)稱為峰面積絕對(duì)校正因子fi，即 mi=fiA

5、i 這就是色譜定量分析的依據(jù) 絕對(duì)校正因子主要由儀器的靈敏度所決定，并與分析的操作條件有密切關(guān)系,.,10,2.峰面積的測量,準(zhǔn)確測量法 用計(jì)算機(jī)測量 通常高級(jí)色譜儀配有計(jì)算機(jī)，能自動(dòng)計(jì)算峰面積 用自動(dòng)積分儀測量 它能自動(dòng)測出曲線所包圍的面積，測量精度達(dá)0.22 上述兩種方法分析速度快，線性范圍廣，對(duì)小峰或不規(guī)則的峰也能得出較準(zhǔn)確的測定結(jié)果,.,11,2.峰面積的測量,近似測量法 對(duì)稱峰可用峰高乘半高峰寬法： 在相對(duì)計(jì)算時(shí)可省略系數(shù)，狹窄峰還可將半高峰寬視為常數(shù)以峰高計(jì)算 不對(duì)稱峰可用峰高乘平均峰寬法： 平均峰寬是指在峰高0.15和0.85處分別測量的峰寬的平均值,.,12,3.常用定量方法,

6、歸一法,若試樣中各組份都能流出色譜柱并在所用的檢測器上都能產(chǎn)生信號(hào)顯示出色譜峰，則可測量所有組份色譜峰的峰面積，由下列公式計(jì)算各組份的含量,Ai為任一組份的峰面積，fi為任一組份的質(zhì)量校正因子,歸一法的優(yōu)點(diǎn)是無需標(biāo)樣，結(jié)果準(zhǔn)確，操作簡便，操作條件（如進(jìn)樣量、流速等）變化對(duì)測定結(jié)果影響較小，宜于分析多組份試樣中各組份的含量。,.,13,外標(biāo)法 A標(biāo)準(zhǔn)曲線法 用標(biāo)樣配成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定操作條件下，分別定量進(jìn)樣測量，繪制峰面積對(duì)標(biāo)液濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。并在相同條件下，注入相同體積的被測試樣測出峰面積，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出被測組份的含量 B外標(biāo)一點(diǎn)法（單點(diǎn)校正） C外標(biāo)兩點(diǎn)法（兩點(diǎn)校正） 外標(biāo)

7、法簡便，不需用校正因子，但需要標(biāo)樣并且進(jìn)樣量要求十分準(zhǔn)確，操作條件也需嚴(yán)格控制,.,14,A,Cs,Ax,Cx,.,15,ms和mi分別為內(nèi)標(biāo)物和被測組份的質(zhì)量 As和Ai分別為內(nèi)標(biāo)物和被測組份的峰面積 fis為組份i相對(duì)于內(nèi)標(biāo)物s的相對(duì)校正因子,內(nèi)標(biāo)法 用一定量的純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物，加入到準(zhǔn)確稱量的試樣中，根據(jù)被測試樣和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比及相應(yīng)的色譜峰面積之比，計(jì)算被測組分的含量,.,16,選擇內(nèi)標(biāo)物有四個(gè)要求： （a）內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是該試樣中不存在的純物質(zhì)； （b）它必須完全溶于試樣中，并與試樣中各組份的色譜峰能完全分離； （c）加入內(nèi)標(biāo)物的量應(yīng)接近于被測組份； （d）色譜峰的位置應(yīng)與被測組份的色譜峰的

8、位置相近，或在幾個(gè)被測組份色譜峰中間。 內(nèi)標(biāo)法的優(yōu)點(diǎn)： 測定的結(jié)果較為準(zhǔn)確,由于通過測量內(nèi)標(biāo)物及被測組份的峰面積的相對(duì)值來進(jìn)行計(jì)算，因而在一定程度上消除了操作條件等的變化所引起的誤差, 在樣品前處理前加入內(nèi)標(biāo)，再進(jìn)行處理，可部分補(bǔ)償待測組分在樣品前處理中的損失。 內(nèi)標(biāo)法的缺點(diǎn)： A.操作程序較為麻煩，每次分析時(shí)內(nèi)標(biāo)物和試樣都要準(zhǔn)確稱量 B.有時(shí)尋找合適的內(nèi)標(biāo)物也有困難 也可用內(nèi)標(biāo)校正曲線法進(jìn)行定量測定,.,17,標(biāo)準(zhǔn)加入法,是一種特殊的內(nèi)標(biāo)法。設(shè)樣品中待測組分含量為Wi 首先在一定色譜條件下測定樣品的色譜圖，得待測組分的峰面積Ai 然后在該樣品中加入已知量為Wi的待測組分，并在相同色譜條件下測得加入后的待測組分峰面積Ai。 計(jì)算公式：,.,18,標(biāo)準(zhǔn)加入法,優(yōu)點(diǎn)：不需要另外的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)，只需要待測組分的純物質(zhì)，進(jìn)樣量不必十分準(zhǔn)確，若在陽平前處理之前就加入已知準(zhǔn)確量的的測組分，則完全可以補(bǔ)償待測組分在前處理過程中的損失。對(duì)樣品中的其他組分可作為內(nèi)標(biāo)。 要求：待測組分加入前后的色譜條件要完全一致。,.,19,4影響定量分析結(jié)果準(zhǔn)確度的因素,樣品制備 前處理方法，轉(zhuǎn)化率，溶劑，供試液儲(chǔ)存， 進(jìn)樣技術(shù) 與外標(biāo)法關(guān)系密切，手動(dòng)進(jìn)樣，閥進(jìn)樣 色譜條件 流動(dòng)相流速，流動(dòng)相組成，溫度，柱效，色譜峰的對(duì)稱性 檢測器性能 線性關(guān)系，濃度型檢測器，質(zhì)量