1、開題報(bào)告蜂王漿中氟喹諾酮類抗生素脫除工藝的研究,姓名:湯曉娟 專業(yè)：生物工程 指導(dǎo)教師：何榮軍 時(shí)間:2008.12.10,一.課題研究背景和意義,1.1 課題研究背景： 蜂王漿有增強(qiáng)免疫力、防癌抗癌、抗衰防老、健腦益智、促進(jìn)生長發(fā)育、抗菌消炎、抗輻射、促進(jìn)組織再生、增強(qiáng)造血功能、調(diào)節(jié)血壓、防止動(dòng)脈硬化、保護(hù)肝臟、催眠、強(qiáng)化性功能以及美容潤膚等多方面作用。 其中，尤其值得一提的是在抗衰防老、延年益壽方面的良好作用。,吸收好 組織濃度高 氟喹諾酮類 抗生素的特點(diǎn) 抗菌譜廣 與其他抗菌藥物無交叉 耐藥性,1.2 課題研究的意義：,蜂王漿里含有氟喹諾酮類抗生素，氟喹諾酮類殘留除了其副作用直接危害人類

2、外, 更嚴(yán)重的問題是食品中殘留低濃度的藥物可能使人的致病菌產(chǎn)生耐藥性, 從而使氟喹諾酮類藥物對人類疾病的療效降低甚至失效,同時(shí)使新開發(fā)的氟喹諾酮類藥品的市場周期大大縮短。 據(jù)相關(guān)報(bào)道所知，我國某些蜂王漿產(chǎn)品抗生素含量有超標(biāo)現(xiàn)象,從而導(dǎo)致產(chǎn)品頻遭退貨，嚴(yán)重影響了蜂王漿的出口。因此, 脫除氟喹諾酮類抗生素是非常重要的！,二.研究內(nèi)容 分別采用溶劑法和離子交換法脫除蜂王漿中氟喹諾酮類抗生素（主要指諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星和恩諾沙星）； 評價(jià)兩種方法對蜂王漿有效成分含量的影響； 研究脫除部分中有效成分的回收利用。,三.研究材料、方法和手段： 3.1 研究材料 3.1.1原料:蜂王漿 3.1.2試劑

3、: 乙酸乙酯、氫氧化鈉溶液(0.1 mol/L)、乙醇、鹽酸、羥基苯甲酸甲酯、考馬斯亮蘭溶液、磷酸鹽緩沖溶液 3.1.3儀器： 臺式離心機(jī)、離心機(jī)、紫外可見分光光度計(jì)、 液相色譜儀、減壓干燥箱分、析天平、酸度計(jì)(pH值精度為0.1)、滴定管10ml、坩堝、干燥器、液相色譜儀,3.2 研究方法和手段：,抗生素的脫除的方法：溶劑法、離子交換法 抗生素測定方法：液相色譜法 有效成分含量的測定：脂肪和癸烯酸 脂肪的測定方法：凱氏定氮法（測絕對值） 考馬斯亮藍(lán)法（測相對值） 癸烯酸的測定方法：液相色譜法,3.3.2 抗生素的脫除,溶劑法（乙酸乙酯） 加萃取劑,蜂王漿,混勻充分震蕩提取,萃余液,回收有效成

4、分,萃取液,合并,冷凍干燥得產(chǎn)品,離子交換法 用陰陽離子交換雙柱脫除氟喹諾酮類抗生素 洗脫,蜂王漿加水稀釋,依次用陰陽離子雙柱 （擬采用膨脹床層析法）吸附,收集未吸附組分,冷凍干燥得產(chǎn)品,分級洗脫,分部收集,收集已吸附組分,3.4氟喹諾酮類抗生素含量的測定,液相色譜法測定氟喹諾酮類抗生素的含量 取樣（調(diào)PH到2） 凈化 (陽離子交換柱凈化 , HLB固相萃取柱凈化 ) 進(jìn)樣 空白實(shí)驗(yàn),3.5 蛋白質(zhì)的相對值的檢測,考馬斯亮蘭法檢測蛋白質(zhì)的相對值 1.作標(biāo)準(zhǔn)曲線 取試管6支，編號16，按表順序加入各試劑， 并于595nm處測定A值。 2.冰箱取出考馬斯亮蘭溶液，平衡至室溫并混勻； 預(yù)熱分光光度計(jì)

5、20分鐘,3.備九支管，分別編號，按下列順序加樣。,3.6 癸烯酸含量測定,液相色譜法測10-羥基-癸烯酸的含量 樣品配制 試樣解凍至室溫，用玻璃棒充分?jǐn)噭颍Q取0.5g樣品，準(zhǔn)確至0.0002g，加2mol/L鹽酸溶液，攪勻，加7ml乙醇攪勻，移入50ml容量瓶中，加25ml乙醇，加10.0ml內(nèi)標(biāo)溶液（羥基苯甲酸甲酯溶液）用乙醇定容，立即在超聲波浴上混合15min或在漩渦混勻器上混合15min，取出，在3000r/min離心10min或放置冰箱中過夜等測定。,條件 a）檢測波長：210nm b）柱箱溫度：40 c）流動(dòng)相流速：1ml/min 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精確移取0.5，1.0，2.0，3

6、.0，4.0和5.0ml 10-HAD標(biāo)準(zhǔn)溶液至10ml容量瓶中，加2.0ml內(nèi)標(biāo)溶液，用無水乙醇溶液定容，分別進(jìn)樣2l，用峰面積比值計(jì)算，應(yīng)呈線性，求出校正因子F。 樣品測定 每個(gè)樣品進(jìn)樣2L4L,結(jié)果計(jì)算 X=F（AiAs）(msmi)100 式中：X-10-羥基-癸烯酸含量，%； F-校正因子 As-試樣中內(nèi)標(biāo)峰面積； Ai-試樣中被測組分峰面積； ms-內(nèi)標(biāo)質(zhì)量，g； mi-試樣質(zhì)量，g。,3.7其他含量測定,水分含量測定 水分干燥法測定 酸度測定 用酸堿滴定法測定酸度 灰分測定 用灼燒重量法測定,四.研究進(jìn)度安排 08年11月25日-09年3月1日: 查閱各種文獻(xiàn)資料，完成題錄、摘文翻譯、 文獻(xiàn)綜述及 開題報(bào)告。 3月2日-5月1日 完成對蜂王漿中氟喹諾酮類抗生素