1、實(shí)驗(yàn)一 蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng)及等電點(diǎn)的測定,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1、了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)。 2、初步學(xué)會(huì)測定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的方法。 3、學(xué)會(huì)正確使用吸量管吸量試液。,二、實(shí)驗(yàn)原理,蛋白質(zhì)分子除含有一定的自由氨基和羧基外，還含有酚基、巰基、胍基、唑基等，因此，蛋白質(zhì)和氨基酸一樣也有兩性電離的性質(zhì)。在溶液中，蛋白質(zhì)的解離狀態(tài)受溶液酸堿度影響，酸性溶液中蛋白質(zhì)解離成陽離子，堿性溶液中則解離成陰離子。等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)分子所攜帶的正負(fù)電荷相等，以兼性離子存在，在電場中不向正負(fù)電極移動(dòng)，在溶液中溶解度最小，容易沉淀析出。,不同的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)不同，可利用溶解度來測定其等電點(diǎn)。向各種不同pH值的緩沖溶液中加入酪蛋白，

2、以沉淀出現(xiàn)最多的緩沖液的pH值為酪蛋白的等電點(diǎn)。,等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)以兼性離子存在，容易沉淀析出。,三、試劑和器材 1、試劑 （1）0.5%酪蛋白溶液 （2）酪蛋白乙酸鈉溶液：稱取純酪蛋白0.25克，加蒸餾水20毫升及1.00 mol/L氫氧化鈉溶液5毫升(必須準(zhǔn)確)，搖蕩使酪蛋白溶解。然后加1.00 mol/L醋酸5毫升(必須準(zhǔn)確)，倒人50毫升容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，混勻，結(jié)果是酪蛋白溶于0.10 mol/L乙酸鈉溶液中，酪蛋白的濃度為0.5%。 （3）0.01溴甲酚綠指示劑。（4）0.02 mol/L鹽酸溶液。 （5）0.10 mol/L醋酸溶液。 （6）0.01 mol/L醋酸溶液

3、。 （7）1.00 mol/L的醋酸溶液 （8）0.02 mol/L氫氧化鈉溶液。,劑i,2、儀器 （1）恒溫水浴箱 （2）溫度計(jì) （3）100 mL容量瓶 （4）50 mL容量瓶 （5）吸量管 （6）試管 （7）試管架等,四、操作方法 （一）蛋白質(zhì)的兩性反應(yīng) 1、取1支試管，加0.5酪蛋白溶液20滴和0.01%溴甲酚綠指示劑57滴，混勻。觀察溶液呈現(xiàn)的顏色，并說明原因。 2、用細(xì)滴管緩慢加入0.02 mol/L鹽酸溶液，隨滴隨搖，直至有明顯的大量沉淀發(fā)生，此時(shí)溶液的pH按近于酪蛋白的等電點(diǎn)。觀察溶液顏色的變化。 3、繼續(xù)滴入0.02 mol/L鹽酸溶液，觀察沉淀和溶液顏色的變化并說明原因。 4、再滴入0.02 mol/L氫氧化鈉溶液進(jìn)行中和，觀察是否出現(xiàn)沉淀，解釋其原因。繼續(xù)滴入0.02 mol/L氫氧化鈉溶液，為什么沉淀又會(huì)溶解？溶液的顏色如何變化? 說明了什么問題？,劑i,劑i,（二）酪蛋白等電點(diǎn)的測定 1、取7支粗細(xì)相近的干燥試管，編號(hào)后按下表的順序準(zhǔn)確地加入各種試劑。加入每種試劑后應(yīng)混合均勻。,劑i,劑i,2、靜置約20分鐘，觀察每支試管中溶液的混濁度，以一，十，十十，十十十，十十十十符號(hào)表示沉淀的多少。根據(jù)觀察結(jié)果指出哪一個(gè)pH是酪蛋白的等電點(diǎn)？ 該實(shí)驗(yàn)要求各種試劑的濃度和加入量必須相當(dāng)準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)中應(yīng)嚴(yán)格按照定量分析的操作進(jìn)行。,