1、 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;解放軍總醫(yī)院博士學(xué)位論文Chitosan/PB-MSCs可注射組織工程骨用于骨質(zhì)疏松種植修復(fù)的初步研究姓名：劉世森申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：劉洪臣20090501 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博上學(xué)位論文骨質(zhì)疏松是以骨量減少、骨組織顯微結(jié)構(gòu)退化為特征的一種系統(tǒng)性骨代謝疾病。頜骨作為全身骨骼的一部分，與全身其他骨骼一樣會(huì)受到骨質(zhì)疏松的影響，導(dǎo)致頜骨內(nèi)骨組織的數(shù)量乖質(zhì)量下降，使種植體植入后愈合時(shí)間延目的：研究外周血是否可以與骨髓一樣作為骨組織工程種子細(xì)胞來(lái)源。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文結(jié)果：鹽酸濃度越低，消毒造成的殼聚糖溶液粘度損失越小，所獲得的實(shí)驗(yàn)三去勢(shì)法骨質(zhì)疏松兔模型的建立

2、及下頜牙槽骨的改變?nèi)?shì)法建立兔骨質(zhì)疏松模型并觀察下頜牙槽骨的改變。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文察頦孔附近骨形態(tài)，光鏡下測(cè)量下頜中切牙內(nèi)側(cè)骨層厚度，拍片后使用疞；疞，；術(shù)后哂詡偈質(zhì)踝值：明顯低于假手術(shù)組，。實(shí)驗(yàn)四可注射組織工程骨用于骨質(zhì)疏松種植修復(fù)的初步探索目的：將可注射組織工程骨安全有效的應(yīng)用于種植體研究，初步觀察其在骨質(zhì)疏松狀態(tài)下修復(fù)種植體周圍骨量不足的效果。方法：只正常新西蘭兔分為?？撰l 結(jié)果：可注射組織工程骨；骨質(zhì)疏松；骨整合；種植部位骨量不足 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博上學(xué)位論文 瓵猺 猧， 一籫 瓵 瓵 甌，瓸琍痗 甌 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博十學(xué)位論文 甌 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博十學(xué)位論文， ； 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士

3、學(xué)位論文胰島素樣生長(zhǎng)因子抗酒石酸酸性磷酸酶間充質(zhì)干細(xì)胞甲基噻唑基四唑骨鈣素 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不含為獲得我院或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位及證書而使用過(guò)的材料，對(duì)本文的研究作出貢獻(xiàn)的個(gè)人或集體，均已在文中做了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。忙、軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院 如骨質(zhì)疏松，影響牙槽骨的質(zhì)與量，進(jìn)一步影響種植體的愈合過(guò)程，因而被認(rèn)為是種植牙治療的禁忌癥或者相對(duì)禁忌型引。特殊設(shè)計(jì)的種植體在植入這些患者體內(nèi)后，面臨著雙重不

4、利因素：種植體特殊的結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)性疾病引起的病理微環(huán)境，這種復(fù)雜情況有可能導(dǎo)致種植體愈合不良。為了保證種植體順利愈合并達(dá)到良好的骨整合狀態(tài)，需要采取一些特殊的處理措施。種植牙長(zhǎng)期穩(wěn)定的發(fā)揮功能構(gòu)成了威脅。此外，骨質(zhì)疏松加快剩余牙槽嵴吸 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文注射、擠壓、抽吸等操作的影響。這些研究提示，構(gòu)建一種可注射組織工程骨，注射到萎縮的牙槽骨表面，或在能夠獲得初期穩(wěn)定性的同時(shí)，將可注射組織工程骨應(yīng)用到種植體骨外懸空部分周圍，代替自體骨進(jìn)行牙槽骨增高術(shù)，有可能收到比較好的治療效果。此外，將其應(yīng)用到種植體骨內(nèi)部分周圍，在局部提供更多的成骨細(xì)胞和或生長(zhǎng)因子，有可能會(huì)更快的形成更多的骨組一，統(tǒng)性疾病

5、的不利影響，降低特殊種植體愈合不良的風(fēng)險(xiǎn)。：甀瓹 甌琂琕琍： 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博十學(xué)位論文實(shí)驗(yàn)一兔骨髓與外周血間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞的體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)材料速眠新長(zhǎng)春軍需大學(xué)獸醫(yī)研究所肝素鈉長(zhǎng)沙湘儀離心平衡機(jī)制造公司美國(guó)公司美國(guó)公司美國(guó)公司美國(guó)公司 鬮路蹕涿攔鶷公司試劑盒北京天根生物技術(shù)有限公司型電泳儀北京六一儀器廠鐵蘇木素：簂漳舅厝苡旌希偌觢蒸餾水。河隑液現(xiàn)用現(xiàn)混。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博十學(xué)位論文離心占煜赴廈嫻陌紫赴患悖砑擁矯芏任，培養(yǎng)液轉(zhuǎn)逑次。空氣、的孵箱中。后全量換液：骨髓的培養(yǎng)液直接棄去不再重復(fù)培養(yǎng)；外周血的培養(yǎng)液 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博十學(xué)位論文量換液。傳代培養(yǎng)原代培養(yǎng)過(guò)程中大部分細(xì)胞集落達(dá)到融合后，表面分子標(biāo)志鑒

6、定 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文離心分鐘，將最上層轉(zhuǎn)移到新管中。街鵆湃收集管中，離心秒，倒掉那碇牽繆古種蛹觳釸的完整性。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博十學(xué)位論文罬荊瑅綾所示配制擴(kuò)增體系使用量 畉觥從跫#嬖湫湫，退火溫度復(fù)性延伸鲅罰婧嬤昭由。成脂誘導(dǎo)成骨誘導(dǎo)取代細(xì)胞，用成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)，每半量換液。進(jìn)行型膠 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博學(xué)位論文形成情況。首次換液時(shí)，瓶底可見成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞形成的細(xì)胞集落，細(xì)胞之間緊圖淄霉撬柙嘌峁菏狀位灰菏鋇南赴洹赴鎪笮巍切危一個(gè)細(xì)胞突起。在細(xì)胞中央有 繼續(xù)擴(kuò)大達(dá)到融合。達(dá)到融合時(shí)，中心部分梭形細(xì)胞與圓形細(xì)胞混雜在起梭形細(xì)胞可在小范罔內(nèi)可形成平行的舟狀捧列。鑒于這種細(xì)胞集落 。鑒于這種細(xì)胞集落能夠

7、達(dá)到融合且在 犁醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博學(xué)位論文骨髓傳代牛長(zhǎng)鋪滿時(shí)細(xì)胞呈梭形，排列為漩渦狀。多角形細(xì)胞排列成鋪路石樣 軍醫(yī)進(jìn)佳學(xué)院博士學(xué)位論文圖撬櫨臚庵躮來(lái)源細(xì)胞表面分子標(biāo)志物表達(dá)情況疉觳庀允玖階檠鴇局首躌量基本相同。 外周血米源細(xì)胞形成的復(fù)層生長(zhǎng)有序性差細(xì)胞雜亂的排，在一起，投有明顯順序 軍醫(yī)進(jìn)恬學(xué)院瞎學(xué)位論文。外周血來(lái)源細(xì)胞誘導(dǎo)后皺縮仍不明顯，在部分皺汗撬杳自吹南赴曬怯盞?，I型膠原表達(dá)陽(yáng)性。和庵苧叢吹南赴曬怯盞肌昂螅型肢原表選陽(yáng)性。骨髓來(lái)源細(xì)胞誘導(dǎo)后礦化結(jié)節(jié)形成廣泛，部分礦化結(jié)節(jié)肉眼即可分 圖幼兔外周血與骨髓來(lái)源細(xì)胞成骨誘導(dǎo)時(shí)礦化結(jié)節(jié)形成情況雖然成骨誘導(dǎo)液中沒(méi)有血管內(nèi)皮細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑，在鋪路石樣區(qū)域有

8、散 軍進(jìn)恬學(xué)院博十學(xué)位論文圄囊逐漸萎縮、數(shù)目減少。與周圍致密的細(xì)胞排列對(duì)比明顯。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文狹更為適宜。性貼壁阻止了細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)，導(dǎo)致部分細(xì)胞不能貼壁，這也是再次培養(yǎng)自分泌的、自身繁殖所需的細(xì)胞因子的濃度快速升高。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文結(jié)合這些研究，使用外周血作為骨組織工程種子細(xì)胞的來(lái)源具有以下優(yōu)可能同時(shí)提供成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等多類種子細(xì)胞用于血管化組織工程骨的構(gòu)建。但是由于外周血中間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量極少，在血液樣本量不大的情況下培養(yǎng)成功比較困難。創(chuàng)傷【】、集落刺激因子動(dòng)員等情況下雖然能夠提高培養(yǎng)成功率，但是應(yīng)用于臨床的可能性不大，如何提高正常狀態(tài)下的培養(yǎng)成功率有待

9、于進(jìn)一步研究。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文篐甂；： 珼琇：一 ： 主要實(shí)驗(yàn)材料與儀器測(cè)量?jī)x上海精密儀器廠鹽酸北京化工廠磁力攪拌器上海司樂(lè)儀器有限公司電熱恒溫水浴鍋精確稱量殼聚糖，置于烤箱中烘烤，再次稱重后測(cè)算本批次殼聚糖樣品，溶于疞定游離鹽酸。當(dāng)溶液顏色由紫紅變?yōu)樗{(lán)綠時(shí)，記錄耗用氫氧化鈉體積，按照 ，溶于雙蒸水至終體積為中，制成疞。高溫溶解的為椋篛 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文取三組作為包囊種子細(xì)胞的殼聚糖凝膠。在包囊種殼聚糖含水量與脫乙酰度殼聚糖溶液性狀 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博十學(xué)位論文消毒前各紐殼聚糖鹽酸溶液外觀。欏組澄清欏組有少量殼聚糖粉末未能溶解過(guò)程中殼聚糖溶液的粘度變化差異較大。欏組在殼聚糖完全

10、左削：殼聚糖凝腔配制完畢時(shí)尚未凝州，此時(shí)依然是溶液形式。澄清有一定流動(dòng)性右幽：殼幕糖凝膠凝瑚后變?yōu)閮?nèi)色，無(wú)流動(dòng)性。 河朐詼矯媾嘌輩煌怪孟暈礔細(xì)胞在殼聚糖凝膠內(nèi)主要里圓形。蛇結(jié)晶，絕大部分細(xì)胞投有著色。不能攝取的死細(xì)胞只占少數(shù)。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文殼聚糖簡(jiǎn)介的一種線性聚糖。在體內(nèi)，殼聚糖通過(guò)溶菌酶的水解作用降解，先是降解為分子量較小的殼寡糖，最終生成可被機(jī)體直接吸收氨基葡萄糖。殼聚糖結(jié)構(gòu)中含有可衍?；牧u基和氨基，能進(jìn)行衍?；磻?yīng)加入不同的基團(tuán)，賦予殼聚糖特殊的生物活性，調(diào)節(jié)殼聚糖的理化性質(zhì)。目前殼聚糖在食品業(yè)、紡織業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)學(xué)等各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)都有廣泛的應(yīng)用。殼聚糖的豐要醫(yī)學(xué)功效有：抗心肌缺

11、血和心率失常、降血脂防止動(dòng)脈粥樣硬化、促進(jìn)凝血舊與抗凝血腔、免疫調(diào)節(jié)和免疫佐劑效應(yīng)、抗腫瘤作用、抑菌作用。在口腔殼聚糖支架材料在組織工程中的應(yīng)用細(xì)胞支架材料必須有足夠大的表面積以便于細(xì)胞粘附，因此疏松多孔材料比普通固體材料表面更有利于細(xì)胞培養(yǎng)。支架材料的孔徑和孔隙率直接影響細(xì)胞的牛長(zhǎng)速率和繁殖速率，殼聚糖可通過(guò)冷凍干燥法制備成多孔結(jié)構(gòu)材料，且其孔徑和孔隙率都易于控制，可通過(guò)改變冷凍溫度和殼聚糖溶液濃度來(lái)實(shí)現(xiàn)，孔的取向則通過(guò)改變冷凍速度來(lái)控制。但是，殼聚糖支架柔軟、延展性好，其力學(xué)強(qiáng)度不夠，一般較多的用于皮膚組織工程。在加入一定量的粉末狀無(wú)機(jī)基質(zhì)后，殼聚糖支架的力學(xué)性能得到很大改善，可望用于骨組

12、織選擇殼聚糖凝膠作為支架材料的原因復(fù)方面具有廣泛適用性和優(yōu)點(diǎn)【 間降解產(chǎn)物，殼寡糖，對(duì)去勢(shì)后大鼠的骨質(zhì)疏松有一定治療作用，可以改善 殼聚糖凝膠中細(xì)胞的活力保持大部分研究中一的濃度都在笥遙踔糧嘰】。高滲透壓對(duì)細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生損害，也會(huì)在注入人體后導(dǎo)致人體組織的損傷。【】曾嘗試在殼聚糖溶液中加入羥乙基纖維素來(lái)達(dá)到降低用量的目的，但是仔細(xì)的研究對(duì)比后發(fā)現(xiàn)，在羥乙基纖維素商品化生產(chǎn)過(guò)程中作為反應(yīng)催化劑之一的戊二醛才是導(dǎo)致用量減少的根本原因。甋的制備特性初步研究中國(guó)修復(fù)重建外科雜志； 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博上學(xué)位論文；甂； 甌琒：琈 ，甖甋 甊狦甀琂曹強(qiáng)，毛天球，顧曉明，等氯化鈣對(duì)成骨細(xì)胞增殖和分化的影響中國(guó)甁 主要

13、實(shí)驗(yàn)試劑與儀器長(zhǎng)春軍需大學(xué)獸醫(yī)研究所戊巴比妥鈉檢測(cè)試劑盒南京建成生物 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博學(xué)位論文自腹部中央開腹尋找卵巢，手術(shù)幽中白箭頭所指的耪色組織即為卵巢骨代謝指標(biāo)檢測(cè)集血清，采用放射免疫法測(cè)量表達(dá)水平，使用檢測(cè)試劑盒按照使術(shù)后處死所有實(shí)驗(yàn)用兔，取下頜骨固定于中性甲醛，快速脫礦然中脫礦。脫礦至符合石蠟切片要求后，庋躉浦瀉?，Y全自動(dòng)生物組織脫水機(jī)上脫水至根下方內(nèi)側(cè)部分骨質(zhì)的面積比。 軍進(jìn)佳學(xué)院博學(xué)位論文圖鹺月下頜骨頦孔附近骨組織微結(jié)構(gòu)變化 伴有錯(cuò)位愈合不良，礏過(guò)低而未能在本實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)出，表明發(fā)生了嚴(yán)重的骨質(zhì)疏松，新西蘭兔骨質(zhì)疏松模型成功建立。 瓾：甀口腔頜面修復(fù)學(xué)雜志；：國(guó)骨質(zhì)疏松雜志；猺， ：

14、 可注射組織工程骨用于骨質(zhì)疏松種植修復(fù)的初步探索骨質(zhì)疏松是臨床上常見的骨代謝疾病，它影響頜骨的質(zhì)量和數(shù)量，對(duì)種主要實(shí)驗(yàn)試劑與儀器可注射凝膠的應(yīng)用方式研究 種子細(xì)胞為自體。外周血取自耳中動(dòng)脈，每只兔取血左四撕冰箱保存?zhèn)溆?。可注射組織工程骨的構(gòu)建手術(shù)過(guò)程為的種植窩。去除近心端部分黃骨髓，盡量止血。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院怫十學(xué)位論女罕鈣盡恕骸紫咚晃J質(zhì)跚鋅諉謾：切開皮膚、肌肉層暴露骨膜。 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文可注射材料應(yīng)用方式組實(shí)驗(yàn)用兔無(wú)死亡。培養(yǎng)結(jié)果 軍醫(yī)進(jìn)恬學(xué)院博十學(xué)位論文篋囤的兩個(gè)細(xì)胞集落選到融合時(shí)相互接觸。 軍醫(yī)進(jìn)售學(xué)院博士學(xué)位論文空白對(duì)照組種植體懸空部分周圍無(wú)骨組織，與皮質(zhì)骨交界處有輕度的骨。

15、實(shí)驗(yàn)組種植體懸空部分周圍有不?？諆?nèi)對(duì)照組種植體骨外懸空部分無(wú)新生骨蟛成。；對(duì)照組種植體骨外懸空部分無(wú)新生骨形成。 軍暖進(jìn)恪學(xué)院博十學(xué)位論文圖勺渥櫓坦歉納浦種蔡騫欽系男鄄 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文可注射材料應(yīng)用方式 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博士學(xué)位論文針對(duì)垂直型種植體周圍骨缺損，修復(fù)的方式有兩種，一種是在種植體植入前首先進(jìn)行牙槽骨擴(kuò)增，確認(rèn)擴(kuò)增成功后再植入種植體；一種是在種植體植入的同時(shí)，將修復(fù)材料應(yīng)用到種植體懸空部分周圍，一起完成牙槽骨擴(kuò)增術(shù)。骨組織工程作為一項(xiàng)新技術(shù)，在解決這一問(wèn)題方面取得了一定進(jìn)展。大部分臨床報(bào)道采用了后一種方式，在種植體取得良好初期穩(wěn)定性的前提下，將修復(fù)材料堆積在種植體懸空部分周圍，

16、可以收到滿意的療效，縮短了治療周期。本研究在手術(shù)過(guò)程中，種植體未全部植入股骨內(nèi)，在皮質(zhì)骨表面露出高構(gòu)建的可注射組織工程骨修復(fù)垂直型種植體周圍骨缺損的效果。以前研究顯示，在利用自體骨進(jìn)行牙槽骨擴(kuò)增術(shù)時(shí)，骨質(zhì)疏松可以導(dǎo)致 指標(biāo)下降。種植體植入后，通過(guò)該可注射組織工程骨，可以在種植體周圍提供大量成骨細(xì)胞，無(wú)需等待體內(nèi)間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移、分化過(guò)程，成骨活動(dòng)等各項(xiàng)指標(biāo)。 甋琓， ：瓻 甊：；： 甁：，琣，籰 文 、，兩者沒(méi)有 骨質(zhì)疏松患者行種植牙治療時(shí)采取的處理措施大改善種植體的骨整合，但是在臨床上卻面臨著更為復(fù)雜的情況。激素替代未給患者帶來(lái)更高的成功率。雙膦酸鹽的應(yīng)用雖然能大大減輕骨質(zhì)疏松的癥狀，在動(dòng)

17、物實(shí)驗(yàn)中也能有效地提高種植體的骨整合，但是存在著導(dǎo)致頜骨壞死的危斛踔劣斜欄笤謨盟嵫魏螅涸睪個(gè)月內(nèi)功能一直正常的種植體發(fā)生失敗，這使雙膦酸鹽的應(yīng)用價(jià)值大大折扣。目前尚無(wú)其他抗骨質(zhì)疏松藥物用于骨質(zhì)疏松狀態(tài)下種植牙治療的臨床報(bào)道。 到了瓶頸：表面涂層技術(shù)的進(jìn)步使很多促進(jìn)骨形成的生長(zhǎng)因子和抗骨質(zhì)疏松藥物能夠與涂層材料一起包被到種植體表面，理論上這些生長(zhǎng)因子或藥物在 篴甌琄鄭瑤，周秀青口腔骨丟失與骨質(zhì)疏松癥關(guān)系的研究進(jìn)展現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)瓻 瓸，：甀陳守平，周正炎，陸衛(wèi)青骨質(zhì)疏松癥對(duì)骨內(nèi)種植體影響的實(shí)驗(yàn)研究口， 。刪甅 瓹，籰李亞男，劉洪臣，倪紫硯骨質(zhì)疏松狀態(tài)下牙種植體骨整合及生長(zhǎng)改變的：。 ：，猟琓 ，：籰 瓻 珺： 琍赾琧甴；： ； ：琋 ： 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博：卜學(xué)位論文 篽；陳寧主編口腔種植技術(shù)江蘇科學(xué)技術(shù)出版社南京：珿 組織工程骨修復(fù)種植部位骨量不足的臨床進(jìn)展胞來(lái)源，提供成骨細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞以構(gòu)建血管化組織工程骨【。 另一個(gè)好處是隨著可注射凝膠的降解，生長(zhǎng)因子慢慢釋放出來(lái)。可以持續(xù)的發(fā)揮作用。人源性凝血酶是這些研究中的共同選擇，凝血酶與纖維蛋白原 組織工程骨在上頜竇底提升術(shù)中的