中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB5009.83—2016

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

食品中胡蘿卜素的測(cè)定

2016-12-23發(fā)布2017-06-23實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局

發(fā)布

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Ⅰ

前言

本標(biāo)準(zhǔn)代替GB5413.35—2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中β-胡蘿卜素的測(cè)定》、

GB/T5009.83—2003《食品中胡蘿卜素的測(cè)定》和NY/T82.15—1988《果汁測(cè)定方法β-胡蘿卜素的

測(cè)定》。

本標(biāo)準(zhǔn)與GB5413.

35—2010相比,主要變化如下:

———標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)修改為“食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中胡蘿卜素的測(cè)定”;

———增加了普通食品的前處理方法;

———增加了需要區(qū)分α-胡蘿卜素、

β-胡蘿卜素的色譜條件;

———修改了胡蘿卜素的結(jié)果表達(dá)。

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1

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

食品中胡蘿卜素的測(cè)定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中胡蘿卜素的測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)色譜條件一適用于食品中α-胡蘿卜素、

β-胡蘿卜素及總胡蘿卜素的測(cè)定,色譜條件二適用于

食品中β-胡蘿卜素的測(cè)定。

2原理

試樣經(jīng)皂化使胡蘿卜素釋放為游離態(tài),用石油醚萃取二氯甲烷定容后,采用反相色譜法分離,外標(biāo)

法定量。

3試劑和材料

除非另有說(shuō)明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1試劑

3.1.1α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/

mg

。

3.1.2木瓜蛋白酶:酶活力≥5U/

mg

。

3.1.3氫氧化鉀(KOH)。

3.1.4無(wú)水硫酸鈉(Na2SO4)。

3.1.5抗壞血酸(C6H8O6)。

3.1.6石油醚:沸程30℃~60℃。

3.1.7甲醇(CH4O):色譜純。

3.1.8乙腈(C2H3N):色譜純。

3.1.9三氯甲烷(CHCl3):色譜純。

3.1.10甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3]:色譜純。

3.1.11二氯甲烷(CH2Cl2):色譜純。

3.1.12無(wú)水乙醇(C2H6O):優(yōu)級(jí)純。

3.1.13正己烷(C6H14):色譜純。

3.1.142,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(C15H24O,BHT)。

3.2試劑配制

氫氧化鉀溶液:稱(chēng)固體氫氧化鉀500g,加入500mL水溶解。臨用前配制。

3.3標(biāo)準(zhǔn)品

3.3.1α-胡蘿卜素(C40H56,CAS號(hào):7488-99-5):純度≥95%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)

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2

準(zhǔn)物質(zhì)。

3.3.2β-胡蘿卜素(C40H56,CAS號(hào):7235-40-7):純度≥95%,或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)

準(zhǔn)物質(zhì)。

3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.4.1α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(500μg/mL):準(zhǔn)確稱(chēng)取α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品50mg(精確到0.1mg),加入

0.25gBHT,用二氯甲烷溶解,轉(zhuǎn)移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度。于-20℃以下避光儲(chǔ)存,使

用期限不超過(guò)3個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用前需進(jìn)行標(biāo)定,具體操作見(jiàn)附錄A。

3.4.2α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)中間液(100μg/mL):由α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中準(zhǔn)確移取10.0mL溶液于

50mL棕色容量瓶中,用二氯甲烷定容至刻度。

3.4.3β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(500μg/mL):準(zhǔn)確稱(chēng)取β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品50mg(精確到0.1mg),加入

0.25gBHT,用二氯甲烷溶解,轉(zhuǎn)移至100mL棕色容量瓶中定容至刻度。于-20℃以下避光儲(chǔ)存,使

用期限不超過(guò)3個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用前需進(jìn)行標(biāo)定,具體操作見(jiàn)附錄A。

注:β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品主要為全反式(all-E)

β-胡蘿卜素,在儲(chǔ)存過(guò)程中受到溫度、氧化等因素的影響,會(huì)出現(xiàn)部分

全反式β-胡蘿卜素異構(gòu)化為順式β-胡蘿卜素的現(xiàn)象,如9-順式(9Z)-

β-胡蘿卜素、

13-順式(13Z)-

β-胡蘿卜素、

15-順式(15Z)-

β-胡蘿卜素等。如果采用色譜條件一進(jìn)行β-胡蘿卜素的測(cè)定,應(yīng)按照附錄B確認(rèn)β-胡蘿卜素異

構(gòu)體保留時(shí)間,并計(jì)算全反式β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜純度。

3.4.4β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)中間液(100μg/mL):從β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中準(zhǔn)確移取10.0mL溶液于

50mL棕色容量瓶中,用二氯甲烷定容至刻度。

3.4.5α-胡蘿卜素、

β-胡蘿卜素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液(色譜條件一用):準(zhǔn)確移取α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)中間液

0.50mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6個(gè)100mL棕色容量瓶,分別加入

3.00mLβ-胡蘿卜素中間液,用二氯甲烷定容至刻度,得到α-胡蘿卜素濃度分別為0.5μg/mL、

1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10.00μg/mL,

β-胡蘿卜素濃度均為3.

0μg/mL的系列

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

3.4.6β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)工作液(色譜條件二用):從β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)中間液中分別準(zhǔn)確移取0.50mL、

1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、10.00mL溶液至6個(gè)100mL棕色容量瓶。用二氯甲烷定容至

刻度,得到濃度為0.

5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、3.0μg/mL、4.0μg/mL、10μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)

工作液。

4儀器和設(shè)備

4.1勻漿機(jī)。

4.2高速粉碎機(jī)。

4.3恒溫振蕩水浴箱:控溫精度±1℃。

4.4旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器。

4.5氮吹儀。

4.6紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)。

4.7高效液相色譜儀(HPLC儀):帶紫外檢測(cè)器。

5分析步驟

注:整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)注意避光。

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5.1試樣制備

谷物、豆類(lèi)、堅(jiān)果等試樣需粉碎、研磨、過(guò)篩(篩板孔徑0.

3mm~0.5mm);蔬菜、水果、蛋、藻類(lèi)等試

樣用勻質(zhì)器混勻;固體粉末狀試樣和液體試樣用前振搖或攪拌混勻。4℃冰箱可保存1周。

5.2試樣處理

5.2.1普通食品試樣

5.2.1.1預(yù)處理

蔬菜、水果、菌藻類(lèi)、谷物、豆類(lèi)、蛋類(lèi)等普通食品試樣準(zhǔn)確稱(chēng)取混合均勻的試樣1g~5g(精確至

0.001g),油類(lèi)準(zhǔn)確稱(chēng)取0.2g~2g(精確至0.001g),轉(zhuǎn)至250mL錐形瓶中,加入1g抗壞血酸、75mL

無(wú)水乙醇,于60℃±1℃水浴振蕩30min。

如果試樣中蛋白質(zhì)、淀粉含量較高(>10%),先加入

1g

抗壞血酸、

15mL45℃~50℃溫水、0.5g

木瓜蛋白酶和0.

5gα-淀粉酶,蓋上瓶塞混勻后,置55℃±1℃恒溫水浴箱內(nèi)振蕩或超聲處理

30min

后,再加入75mL無(wú)水乙醇,于60℃±1℃水浴振蕩30min。

5.2.1.2皂化

加入25mL氫氧化鉀溶液,蓋上瓶塞。置于已預(yù)熱至53℃±2℃恒溫振蕩水浴箱中,皂化30min。

取出,靜置,冷卻到室溫。

5.2.2添加β-胡蘿卜素的食品試樣

5.2.2.1預(yù)處理

固體試樣:準(zhǔn)確稱(chēng)取1g~5g(精確至0.

001g),置于250mL錐形瓶中,加入1g抗壞血酸,加

50mL45℃~50℃溫水混勻。加入0.5g木瓜蛋白酶和0.5gα-淀粉酶(無(wú)淀粉試樣可以不加α-淀粉

酶),蓋上瓶塞,置55℃±1℃恒溫水浴箱內(nèi)振蕩或超聲處理30min。

液體試樣:準(zhǔn)確稱(chēng)取5g~10g(精確至0.

001g),置于250mL錐形瓶中,加入1g抗壞血酸。

5.2.2.2皂化

取預(yù)處理后試樣,加入75mL無(wú)水乙醇,搖勻,再加入25mL氫氧化鉀溶液,蓋上瓶塞。置于已預(yù)

熱至53℃±2℃恒溫振蕩水浴箱中,皂化30min。取出,靜置,冷卻到室溫。

注:如皂化不完全可適當(dāng)延長(zhǎng)皂化時(shí)間至1h。

5.3試樣萃取

將皂化液轉(zhuǎn)入500mL分液漏斗中,加入100mL石油醚,輕輕搖動(dòng),排氣,蓋好瓶塞,室溫下振蕩

10min后靜置分層,將水相轉(zhuǎn)入另一分液漏斗中按上述方法進(jìn)行第二次提取。合并有機(jī)相,用水洗至

近中性。棄水相,有機(jī)相通過(guò)無(wú)水硫酸鈉過(guò)濾脫水。濾液收入500mL蒸發(fā)瓶中,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上

40℃±2℃減壓濃縮,近干。用氮?dú)獯蹈?用移液管準(zhǔn)確加入5.0mL二氯甲烷,蓋上瓶塞,充分溶解提

取物。經(jīng)0.

45μm膜過(guò)濾后,棄出初始約1mL濾液后收集至進(jìn)樣瓶中,備用。

注:必要時(shí)可根據(jù)待測(cè)樣液中胡蘿卜素含量水平進(jìn)行濃縮或稀釋,使待測(cè)樣液中α-胡蘿卜素和/或β-胡蘿卜素濃度

在0.

5μg/mL~10μg/mL范圍內(nèi)。

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5.4色譜測(cè)定

5.4.1色譜條件一(適用于食品中α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素及總胡蘿卜素的測(cè)定)

5.4.1.1參考色譜條件

參考色譜條件列出如下:

a)色譜柱:C30柱,柱長(zhǎng)150mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5μm,或等效柱;

b)流動(dòng)相:A相:甲醇∶乙腈∶水=73.5∶24.5∶2;

B相:甲基叔丁基醚;

表1梯度程序

時(shí)間/min

01518192022

A%1005920200100

B%04180801000

c)流速:1.0mL/min;

d)檢測(cè)波長(zhǎng):450nm;

e)柱溫:30℃±1℃;

f)進(jìn)樣體積:20μL。

5.4.1.2繪制α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)曲線、計(jì)算全反式β-胡蘿卜素響應(yīng)因子

將α-胡蘿卜素、

β-胡蘿卜素混合標(biāo)準(zhǔn)工作液注入HPLC儀中(色譜圖見(jiàn)圖C.

1),根據(jù)保留時(shí)間定

性,測(cè)定α-胡蘿卜素、

β-胡蘿卜素各異構(gòu)體峰面積。

α-胡蘿卜素根據(jù)系列標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度及峰面積,以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,

計(jì)算回歸方程。

β-胡蘿卜素根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作液標(biāo)定濃度、全反式β-胡蘿卜素6次測(cè)定峰面積平均值、全反式β-胡蘿卜

素色譜純度(

CP,計(jì)算方法見(jiàn)附錄B),按式(1)計(jì)算全反式β-胡蘿卜素響應(yīng)因子。

RF=

Aall-E

ρ×CP

…………(1)

式中:

RF

———全反式β-胡蘿卜素響應(yīng)因子,單位為峰面積毫升每微克(AU·mL/μg);

Aall-E———全反式β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)工作液色譜峰峰面積平均值,單位為峰面積(AU);

ρ

———

β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)工作液標(biāo)定濃度,單位為微克每毫升(μg

/mL);

CP

———全反式β-胡蘿卜素的色譜純度,%。

5.4.1.3試樣測(cè)定

在相同色譜條件下,將待測(cè)液注入液相色譜儀中,以保留時(shí)間定性,根據(jù)峰面積采用外標(biāo)法定量。

α-胡蘿卜素根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算待測(cè)液中α-胡蘿卜素濃度,

β-胡蘿卜素根據(jù)全反式β-胡蘿卜素

響應(yīng)因子進(jìn)行計(jì)算。

5.4.2色譜條件二(適用食品中β-胡蘿卜素的測(cè)定)

5.4.2.1參考色譜條件

參考色譜條件列出如下:

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5

a)色譜柱:C18柱,柱長(zhǎng)250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5μm,或等效柱;

b)流動(dòng)相:三氯甲烷∶乙腈∶甲醇=3∶12∶85,含抗壞血酸0.4g/L,經(jīng)0.45μm膜過(guò)濾后備用;

c)流速:2.0mL/min;

d)檢測(cè)波長(zhǎng):450nm;

e)柱溫:35℃±1℃;

f)進(jìn)樣體積:20μL。

5.4.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)工作液注入HPLC儀中(色譜圖見(jiàn)圖C.

2),以保留時(shí)間定性,測(cè)定峰面積。以標(biāo)

準(zhǔn)系列工作液濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程。

5.4.2.3試樣測(cè)定

在相同色譜條件下,將待測(cè)試樣液分別注入液相色譜儀中,進(jìn)行HPLC分析,以保留時(shí)間定性,根

據(jù)峰面積外標(biāo)法定量,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算待測(cè)液中β-胡蘿卜素的濃度。

注:本色譜條件適用于α-胡蘿卜素含量較低(小于總胡蘿卜素10%)的食品試樣中β-胡蘿卜素的測(cè)定。

6分析結(jié)果的表述

6.1色譜條件一

試樣中α-胡蘿卜素含量按式(2)計(jì)算:

Xα=

ρα×V×100

m

…………(2)

式中:

Xα———試樣中α-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(

μg

/100g);

ρα

———從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的待測(cè)液中α-胡蘿卜素濃度,單位為微克每毫升(

μg

/mL);

V

———試樣液定容體積,單位為毫升(mL);

100———將結(jié)果表示為微克每百克(

μg

/100g)的系數(shù);

m

———試樣質(zhì)量,單位為克(

g)。

試樣中β-胡蘿卜素含量按式(3)計(jì)算:

Xβ=

(

Aall-E+A9Z+A13Z×1.2+A15Z×1.4+AxZ)×V×100

RF×m

………………(3)

式中:

Xβ

———試樣中β-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(

μg

/100g);

Aall-E

———試樣待測(cè)液中全反式β-胡蘿卜素峰面積,單位為峰面積(AU);

A9Z

———試樣待測(cè)液中9-順式-

β-胡蘿卜素的峰面積,單位為峰面積(

AU);

A13Z

———試樣待測(cè)液中13-順式-

β-胡蘿卜素的峰面積,單位為峰面積(

AU);

1.2

———13-順式-

β-胡蘿卜素的相對(duì)校正因子;

A15Z

———試樣待測(cè)液中15-順式-

β-胡蘿卜素的峰面積,單位為峰面積(

AU);

1.4

———15-順式-

β-胡蘿卜素的相對(duì)校正因子;

AxZ

———試樣待測(cè)液中其他順式β-胡蘿卜素的峰面積,單位為峰面積(AU);

V

———試樣液定容體積,單位為毫升(mL);

100

———將結(jié)果表示為微克每百克(

μg

/100g)的系數(shù);

RF

———全反式β-胡蘿卜素響應(yīng)因子,單位為峰面積毫升每微克(AU·mL/μg);

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m

———試樣質(zhì)量,單位為克(

g)。

注1:由于β-胡蘿卜素各異構(gòu)體百分吸光系數(shù)不同(見(jiàn)附錄D),所以在β-胡蘿卜素計(jì)算過(guò)程中,需采用相對(duì)校正因

子對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正。

注2:如果試樣中其他順式β-胡蘿卜素含量較低,可不進(jìn)行計(jì)算。

試樣中總胡蘿卜素含量按式(

4)計(jì)算:

X總=Xα+Xβ

…………(4)

式中:

X總———試樣中總胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(

μg

/100g);

Xα———試樣中α-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(

μg

/100g);

Xβ———試樣中β-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(

μg

/100g)。

注:必要時(shí),

α-胡蘿卜素,

β-胡蘿卜素可轉(zhuǎn)化為微克視黃醇當(dāng)量(μgRE)進(jìn)行表示。

計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

6.2色譜條件二

試樣中β-胡蘿卜素含量按式(5)計(jì)算:

Xβ=

ρβ×V×100

m

…………(5)

式中:

Xβ———試樣中β-胡蘿卜素的含量,單位為微克每百克(

μg

/100g);

ρβ

———從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的待測(cè)液中β-胡蘿卜素濃度,單位為微克每毫升(

μg

/mL);

V

———試樣液定容體積,單位為毫升(mL);

100———將結(jié)果表示為微克每百克(

μg

/100g)的系數(shù);

m

———試樣質(zhì)量,單位為克(

g)。

注:結(jié)果中包含全反式β-胡蘿卜素、9-順式-

β-胡蘿卜素、

13-順式-

β-胡蘿卜素、

15-順式-

β-胡蘿卜素、其他順式異構(gòu)

體;不排除可能有部分α-胡蘿卜素。

計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

8其他

試樣稱(chēng)樣量為5g時(shí),

α-胡蘿卜素、

β-胡蘿卜素檢出限均為0.

5μg/100g,定量限均為1.5μg/100g。

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附錄A

標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度標(biāo)定方法

A.1α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的標(biāo)定

α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(濃度約為500μg/mL)10μL,注入含3.0mL正己烷的比色皿中,混勻。比

色杯厚度為1cm,以正己烷為空白,入射光波長(zhǎng)為444nm,測(cè)定其吸光度值,平行測(cè)定3次,取均值。

溶液濃度按式(A.

1)計(jì)算:

X=A

E

×3.

01

0.01

…………(A.

1)

式中:

X

———α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度,單位為微克每毫升(

μg

/mL);

A

———α-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的紫外吸光值;

E

———α-胡蘿卜素在正己烷中的比吸光系數(shù)為0.

2725;

3.01

0.01

———測(cè)定過(guò)程中稀釋倍數(shù)的換算系數(shù)。

A.2β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的標(biāo)定

取β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(濃度約為500μg/mL)10μL,注入含3.

0mL正己烷的比色皿中,混勻。

比色杯厚度為1cm,以正己烷為空白,入射光波長(zhǎng)為450nm,測(cè)定其吸光度值,平行測(cè)定3次,取均值。

溶液濃度按式(A.

2)計(jì)算:

X=A

E

×3.

01

0.01

…………(A.

2)

式中:

X

———

β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度,單位為微克每毫升(μg

/mL);

A

———

β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的紫外吸光值;

E

———

β-胡蘿卜素在正己烷中的比吸光系數(shù)為0.

2620;

3.01

0.01

———測(cè)定過(guò)程中稀釋倍數(shù)的換算系數(shù)。

GB5009.83—2016

8

附錄B

β-胡蘿卜素異構(gòu)體保留時(shí)間的確認(rèn)及全反式β-胡蘿卜素色譜純度的計(jì)算

注:采用色譜條件一進(jìn)行β-胡蘿卜素的測(cè)定,需要確定β-胡蘿卜素異構(gòu)體保留時(shí)間,并對(duì)β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜

純度進(jìn)行校正。

B.1試劑

碘溶液(

I2):0.5mol

/L。

B.2試劑配制

B.2.1碘乙醇溶液(0.05mol

/L):吸取5mL碘溶液,用乙醇稀釋至50mL,混勻。

B.2.2異構(gòu)化β-胡蘿卜素溶液:取10mLβ-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于燒杯中,加入20μL碘乙醇溶液,搖

勻后于日光下或距離40W日光燈30cm處照射15min,用二氯甲烷稀釋至50mL。搖勻后過(guò)0.

45μm

濾膜,備HPLC色譜分析用。

B.3β-胡蘿卜素異構(gòu)體保留時(shí)間的確認(rèn)

分別取β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)中間液(100μg/mL)和異構(gòu)化β-胡蘿卜素溶液,按照色譜條件一注入

HPLC儀進(jìn)行色譜分析。根據(jù)β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)中間液的色譜圖確認(rèn)全反式β-胡蘿卜素的保留時(shí)間;對(duì)

比β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)中間液和異構(gòu)化β-胡蘿卜素溶液色譜圖中各峰面積變化,以及與全反式β-胡蘿卜素

的位置關(guān)系確認(rèn)順式β-胡蘿卜素異構(gòu)體的保留時(shí)間:全反式β-胡蘿卜素前較大的色譜峰為13-順式-

β-

胡蘿卜素,緊鄰全反式β-胡蘿卜素后較大的色譜峰為9-順式-

β-胡蘿卜素,

13-順