1、實(shí)驗(yàn)8。巨噬細(xì)胞酸性磷酸酶顯示，組織化學(xué)和細(xì)胞化學(xué)是將某些試劑添加到待檢查的組織切片或材料中，使它們與組織或細(xì)胞中的待檢查物質(zhì)反應(yīng)，形成有色沉淀，可用光學(xué)顯微鏡觀察。如果是重金屬沉淀，可以用電子顯微鏡觀察，稱為電子顯微鏡組織化學(xué)。該方法可用于檢測細(xì)胞中的酶、糖、脂類、核酸和一些金屬元素。如果用微型分光光度計(jì)進(jìn)一步測定樣品中沉積物的強(qiáng)度，就可以準(zhǔn)確地進(jìn)行定量研究。1.碳水化合物顯示法，最常用的顯示方法是周期酸希夫反應(yīng)。基本原理是糖被高碘酸鹽(HIO4)氧化形成2-醛基，高碘酸鹽是一種強(qiáng)氧化劑。后者與希夫試劑中的無色品紅亞硫酸化合物結(jié)合形成紫紅色反應(yīng)產(chǎn)物，PAS反應(yīng)陽性位點(diǎn)表明多糖的存在。2.酶顯

2、示酶顯示方法通過顯示酶的活性而不是酶本身來顯示酶的存在。將具有酶活性的組織放入含有某種底物的溶液中孵育，底物在酶的作用下形成初級(jí)反應(yīng)產(chǎn)物，然后與某種捕獲劑反應(yīng)，在顯微鏡下形成可見沉淀，即最終反應(yīng)產(chǎn)物。脂類顯示脂類包括脂肪和脂類。標(biāo)本可以用甲醛固定、冷凍，并用脂溶性染料如油紅、蘇丹、蘇丹黑B和尼羅藍(lán)染色。它也可以用鋨酸固定和染色，脂質(zhì)是黑色的。4核酸展示法，展示DNA的傳統(tǒng)方法是弗氏反應(yīng)。切片DNA用弱酸(1摩爾/升)水解，嘌呤堿基與脫氧核糖之間的鍵被打開，使脫氧核糖的一端形成游離醛基。這些醛基與希夫試劑(無色品紅亞硫酸鈉溶液)原位反應(yīng)生成紫紅色化合物，使細(xì)胞中含DNA的部分與紫紅色發(fā)生正反應(yīng)。

3、紫紅色的原因是反應(yīng)產(chǎn)物的分子含有醌基，醌基是發(fā)色團(tuán)，所以它們有顏色。甲基綠與細(xì)胞核中的脫氧核糖核酸結(jié)合為藍(lán)綠色，庇隆蛋白與細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中的核糖核酸結(jié)合為紅色。酸性磷酸酶顯示了酸性磷酸酶能夠分解磷酸酯(常用的甘油磷酸鈉)并釋放磷酸基團(tuán)的實(shí)驗(yàn)原理。在pH50環(huán)境下，磷酸基團(tuán)可與鉛鹽(硝酸鉛、捕集劑)反應(yīng)形成無色的磷酸鉛(細(xì)小沉淀，可在電子顯微鏡下觀察)，然后與硫化銨反應(yīng)形成深棕色的硫化鉛沉淀(可在光學(xué)顯微鏡下觀察)，從而顯示酸性磷酸酶在細(xì)胞中的存在和分布。實(shí)驗(yàn)材料：小鼠腹腔液涂片(以巨噬細(xì)胞為重點(diǎn))。實(shí)驗(yàn)試劑和用品，1，6淀粉肉湯牛肉膏03g蛋白胨1.0g氯化鈉05g可溶性淀粉6g蒸餾水100m

4、l高壓滅菌99104pa(15磅)20min 2，10中性福爾馬林(pH6871)甲醛10ml蒸餾水90ml乙酸鈉2g，3。酸性磷酸酶作用液配方：蒸餾水90毫升02毫升醋酸緩沖液(pH46)12毫升5硝酸鉛2毫升3.2甘油磷酸鈉4毫升。配方：首先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合，然后分成兩等份，一份用硝酸鉛溶液，另一份用甘油磷酸鈉溶液，然后邊攪拌邊慢慢混合。如果酸堿度低于50，可加入少量乙酸進(jìn)行調(diào)節(jié)。注：制備的工作溶液應(yīng)透明，無絮狀懸浮固體和沉淀物；最好在使用前準(zhǔn)備好，不能儲(chǔ)存。附件：制備方法02mL乙酸緩沖液(pH46) 0.2mol/l乙酸(ml) 25.5 0.2mol/l乙酸鈉(ml) 24.

5、5，4，1硫化銨溶液1ml硫化銨蒸餾水9ml 5，Giemsa染料溶液(1: 30) 3滴Giemsa原液5ml磷酸鹽緩沖液(ph68)，實(shí)驗(yàn)方法2。收集巨噬細(xì)胞：第三天注射后34小時(shí)，腹腔內(nèi)注入1毫升生理鹽水，3分鐘后抽取腹腔液。3.粘附：將腹膜液滴放在預(yù)冷卻的載玻片上，每人2滴，每張載玻片23滴，將載玻片水平放入冰箱(4)中，讓細(xì)胞自行擴(kuò)散和粘附30分鐘。將其中一個(gè)樣品放在濕盒子里，然后放在50的盒子里30分鐘，使酶失活。4.固定：將載玻片插入裝有10%中性福爾馬林(預(yù)冷卻)的染色缸中，并在冰箱中固定30分鐘。5.用自來水沖洗5分鐘，將水甩干。6.加入足夠的酸性磷酸酶溶液覆蓋樣品，并將其置于37水浴中30分鐘。7.用自來水沖洗一會(huì)兒。9.向通風(fēng)櫥中加入硫化銨，反應(yīng)10分鐘。10.用自來水沖洗并甩干。11.直接加入PBS密封(或在密封前用130的姬姆薩染料溶液染色15分鐘)。顯微鏡下，陽性標(biāo)本的細(xì)胞質(zhì)中出