1、實(shí)驗(yàn)八 細(xì)菌鑒定中常用的生化實(shí)驗(yàn),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握糖發(fā)酵試驗(yàn)、淀粉實(shí)驗(yàn)、吲哚實(shí)驗(yàn)、M.R.及V.P的原理及方法。 掌握以上實(shí)驗(yàn)的用途。,二、實(shí)驗(yàn)原理,淀粉實(shí)驗(yàn) 糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn) 發(fā)酵后產(chǎn)生的有機(jī)酸： 乳酸、醋酸、丙酸等 （溴甲酚紫變色范圍pH5.26.8, pH6.8紫色） 發(fā)酵后產(chǎn)生的氣體： 甲烷、氫、二氧化碳等（德漢氏小管內(nèi)有氣泡，產(chǎn)氣漂?。?糖發(fā)酵試驗(yàn)現(xiàn)象,二、實(shí)驗(yàn)原理,M.R.及V.P實(shí)驗(yàn) 甲基紅試驗(yàn)是用來檢測由葡萄糖產(chǎn)生的有機(jī)酸，如甲酸、乙酸、 乳酸等。當(dāng)細(xì)菌代謝糖產(chǎn)生酸時(shí)，培養(yǎng)基就會(huì)變酸，使加入培養(yǎng)基 的甲基紅指示劑變色，甲基紅指示劑變色范圍（紅4.46.2黃，中間色 為橙色）。,二、

2、實(shí)驗(yàn)原理,M.R.及V.P實(shí)驗(yàn) VP試驗(yàn)是用來測定某些細(xì)菌利用葡萄糖產(chǎn)生非酸性或中性末端產(chǎn)物的能力，如丙酮酸。丙酮酸經(jīng)縮合、脫羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物。,二、實(shí)驗(yàn)原理,吲哚實(shí)驗(yàn) 吲哚試驗(yàn)是用來檢測吲哚的產(chǎn)生。有些細(xì)菌能產(chǎn)生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成紅色的玫瑰吲哚。,三、實(shí)驗(yàn)器材,培養(yǎng)基 1、淀粉培養(yǎng)基 :500ml（分裝于四個(gè)三角瓶，包扎，121126滅菌30min） 蛋白胨 10g 可溶性淀粉 2g 氯化鈉 5g 瓊脂 1520g 牛肉膏 5

3、g 水 1000ml pH 7.2 2、糖發(fā)酵培養(yǎng)基：300ml（分裝于28只試管，包扎，112115滅菌30min） 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 葡萄糖 10g 水 1000ml pH 7.4 溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml 3、M.R.及V.P實(shí)驗(yàn):600ml（分裝于56只試管，包扎，112115滅菌30min） 蛋白胨 5g K2HPO4 5g 葡萄糖 5g 水 1000ml pH 7.27.4 4、吲哚培養(yǎng)基:300ml（分裝于28只試管，包扎，121126滅菌30min） 蛋白胨 10g 氯化鈉 5g 水 1000ml pH 7.6,三、實(shí)驗(yàn)器材,菌種 1、大腸桿菌 2、枯草

4、芽孢桿菌 3、產(chǎn)氣腸 其他 1、試管6組 28個(gè)/組（每個(gè)試管帶一個(gè)德漢氏小管） 2、平皿2組 16個(gè)/組 3、三角瓶2組 8個(gè)/組,四、實(shí)驗(yàn)步驟,（一）準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器材及培養(yǎng)基（3人/組） 1、淀粉培養(yǎng)基1瓶，培養(yǎng)皿三個(gè) 2、糖發(fā)酵培養(yǎng)基7支 3、M.R.,V.P培養(yǎng)基14支 4、吲哚培養(yǎng)基7支,（二）接種培養(yǎng),接種方案,（三）結(jié)果觀察,淀粉試驗(yàn)加入碘液觀察 葡萄糖/乳糖發(fā)酵試驗(yàn)直接觀察。 VP試驗(yàn)：去塞，加40KOH 15滴，振蕩，再加等量奈酚，振蕩，37振蕩培養(yǎng)30min，觀察。 MR試驗(yàn)：加甲基紅試劑23滴，觀察。 吲哚試驗(yàn)：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振蕩，靜止片刻使分層，沿管壁慢慢加入吲哚試劑10滴，觀察。,五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析,六、思考題,1.糖發(fā)酵試驗(yàn)中，所安裝的杜氏小管起什么作用？ 2