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,實(shí)驗(yàn)三 酶促轉(zhuǎn)氨反應(yīng),一 實(shí)驗(yàn)原理,氨基酸分子上的氨基轉(zhuǎn)移到-酮酸分子上的反應(yīng)稱轉(zhuǎn)氨反應(yīng)。由轉(zhuǎn)氨酶催化的轉(zhuǎn)氨反應(yīng)是氨基酸代謝的重要反應(yīng)之一。經(jīng)轉(zhuǎn)氨后，原來(lái)的氨基酸變成了酮酸，而原來(lái)的酮酸則變成新的氨基酸。,生成的丙酮酸與2，4-二硝基苯肼作用生成腙，在堿性環(huán)境下呈紅色，紅色的深淺與丙酮酸生成量成正比。,1. 稱取0.5g葉片用剪刀將葉片剪碎放于研缽中。 2. 量取5ml磷酸緩沖液，分三次加入研缽中（2，1，1），轉(zhuǎn)速5000，時(shí)間10min,離心完后上清液即為酶粗提液。,二 實(shí)驗(yàn)步驟,3. 取4支試管編號(hào)按下表要求加樣:,4.加樣完畢搖勻用橡皮筋將4支試管扎牢置于40水浴中加熱30min。,5.取出冷卻每支試管各加0.5ml 2，4-二硝基苯肼反應(yīng)5min再每支試管各加5ml 0.4N的 NaOH溶液搖勻靜止8min在=530nm下，測(cè)量吸光度OD值。,三、計(jì)算：,按下式計(jì)算丙酮酸生成量：,Cx=樣品中丙酮酸含量 Cs=標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸溶液含量(0.002mM/m1) V=標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸溶液毫升數(shù) Dl=樣液OD530 D2=標(biāo)準(zhǔn)液OD530 D3=對(duì)照管OD530,

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