1、1,第十一章 黃酮類化合物,概 述,1,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,2,黃酮類化合物的理化性質(zhì),3,黃酮類化合物的提取和分離,4,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,5,2,黃酮類化合物概述,黃酮類化合物是一類重要的含氧雜環(huán)天然有機(jī)化合物。 分布廣泛：高等植物中常見(jiàn) 存在形式：苷元、苷 活性多樣：抗氧化、心血管、保護(hù)肝臟、抗炎、 抗癌、雌激素作用等,3,第十一章 黃酮類化合物,概 述,1,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,2,黃酮類化合物的理化性質(zhì),3,黃酮類化合物的提取和分離,4,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,5,4,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,母核：,9(8a),10(4a),結(jié)構(gòu)特征,5,生物合成基本途徑

2、,6,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,a.中央三碳鏈的氧化程度 b.B-環(huán)聯(lián)接位置（2-或3-位） c.三碳鏈?zhǔn)欠駱?gòu)成環(huán)狀,分類標(biāo)準(zhǔn),7,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,木犀草素，抗菌作用,黃芩苷，清熱解毒,槲皮素：R = H 蘆 丁：R = 蕓香糖 最常見(jiàn)的黃酮醇類化合物,黃酮類 flavones,黃酮醇類 flavonols,黃酮 黃酮醇,8,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,二氫黃酮類 flavanones,二氫黃酮醇類flavanonols,橙皮苷 Vpp樣作用,甘草素 對(duì)潰瘍有抑制作用,水飛薊素 保肝作用,二氫黃酮 二氫黃酮醇,9,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,異黃酮類 isoflavones,二氫異黃酮類

3、isoflavanones,大豆異黃酮,魚(yú)鱗酮 農(nóng)業(yè)殺蟲(chóng)劑,異黃酮 二氫異黃酮,10,大豆異黃酮,進(jìn)入20世紀(jì)90年代，國(guó)內(nèi)外的生物學(xué)家、化學(xué)家、醫(yī)學(xué)家被一種神奇的物質(zhì)所吸引，這存在于大豆中的神奇物質(zhì)被稱作“大豆異黃酮”。 流行病學(xué)資料表明，長(zhǎng)期食用大豆的東南亞人群中，癌癥、動(dòng)脈粥樣硬化等心血管病癥的發(fā)病率明顯低于西方。在日本，乳腺癌的發(fā)病率是美國(guó)的1/4；婦女更年期綜合癥的發(fā)病率只有美國(guó)的1/3；這個(gè)現(xiàn)象已引起科學(xué)家的注意。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，大豆中含有一種結(jié)構(gòu)與雌激素相似的物質(zhì)叫異黃酮，它是大豆中的一種非營(yíng)養(yǎng)成份，具有生理活性，能產(chǎn)生類似雌激素的效應(yīng)，而被稱之為“植物雌激素”。 對(duì)身體雌激素的雙向

4、調(diào)節(jié)作用。當(dāng)人體內(nèi)雌激素水平低時(shí)，大豆異黃酮占據(jù)雌激素受體，發(fā)揮弱雌激素效應(yīng)，表現(xiàn)出提高雌激素水平的作用。當(dāng)人體內(nèi)雌激素水平高時(shí)，大豆異黃酮以“競(jìng)爭(zhēng)”方式占據(jù)受體位置，同樣發(fā)揮弱雌激素效應(yīng)，但由于它的活性僅為體內(nèi)雌激素的2%，因而從總體上表現(xiàn)出降低體內(nèi)雌激素水平的作用，這就是著名的大豆異黃酮對(duì)雌激素的雙向調(diào)節(jié)作用機(jī)制。,11,大豆異黃酮,對(duì)身體雌激素的雙向調(diào)節(jié)作用 抗癌作用 降低膽固醇，預(yù)防動(dòng)脈硬化 改善骨質(zhì)疏松 預(yù)防冠心病 美國(guó)的食品藥物管理局（FDA）把大豆列為能夠 “真正降低心臟病危險(xiǎn)的食品”之一,12,大豆異黃酮,12,植物雌激素,雌二醇,12,13,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,查耳酮類

5、 chalcones,橙酮類 aurones,紅花的顏色變化,較少見(jiàn) 黃花波斯菊花：硫黃菊素,查耳酮 橙酮,14,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,花色素類anthocyanidins,黃烷醇類,矢車菊素：R1 = OH, R2 = H 飛燕草素：R1 = R2 = OH 天竺葵素：R1 = R2 = H 錦葵花素：R1 = R2 = OCH3,黃烷-3-醇 R = H,黃烷-3,4-二醇 R = OH,兒茶素：抗癌活性,麻黃寧A/B：抗癌活性,花色素 黃烷醇,15,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,苯駢色原酮類xanthones,苯色原酮類,異芒果苷：止咳祛痰 芒果葉和知母葉,呋喃色原酮類,凱林 khell

6、in,紅 鐮 枚 素： R1 = CH3, R2 = H 去甲紅鐮枚素： R1 = R2 = H 紅鐮枚素-6-龍膽雙糖苷： R1 = CH3, R2 = 龍膽雙糖基,其他黃酮類,16,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,黃酮苷元 取代基：OH，OMe，Me，異戊烯基等 黃酮苷 氧苷和碳苷,存在形式,17,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,取代基,18,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,天然黃酮類化合物多以苷類形式存在。由于糖的種類、數(shù)量、聯(lián)接位置及聯(lián)接方式不同，組成各種各樣的黃酮苷。 組成苷類的糖有：?jiǎn)翁牵篋-glc、D-gal、D-xyl、L-rha、L-ara、 D-glucuronic acid雙糖：槐糖（gl

7、c 1- 2glc), 蕓香糖 （rha1-6glc)等。三糖：龍膽三糖（glc 1-6glc 1 2 fru) 槐三糖（glc 1-2 glc 1-2glc),黃酮苷,19,氧苷,碳苷,黃酮,異黃酮,黃酮苷,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,20,黃酮類化合物的生理活性,（一）對(duì)心血管系統(tǒng)的作用 1、降低血管脆性及異常的通透性 蘆丁、橙皮苷 2、擴(kuò)冠作用 如：槲皮素、葛根素 3、降低血脂及膽固醇的作用 （二）有抗肝臟毒活性 如：水飛薊素、兒茶素 （三）抗炎作用 如：蘆丁、羥乙基蘆丁、 橙皮苷-甲基查爾酮 （四）雌激素樣作用 如：染料木素、大豆素等,21,黃酮類化合物的生理活性,（五）抗菌作用 如：木

8、犀草素、黃芩素、黃芩苷 （六）抗病毒作用 如：槲皮素、山柰酚等 （七）瀉下作用 如：營(yíng)實(shí)苷A （八）解痙作用 如：異甘草素、大豆素等 （九）其它作用 止咳、祛痰、平喘等作用,22,第十一章 黃酮類化合物,概 述,1,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,2,黃酮類化合物的理化性質(zhì),3,黃酮類化合物的提取和分離,4,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,5,23,黃酮類化合物的理化性質(zhì),形 態(tài)：黃酮類化合物多為晶性固體，少數(shù)為無(wú)定形粉末。 顏 色： 黃酮（醇）及其苷：顯灰黃-黃色。 若7-及4-位引入-OH 和OCH3等，顏色加深。 查爾酮：顯黃-橙黃色。 二氫黃酮（醇）及異黃酮：不顯色或顯微黃色。 花色苷及苷元：

9、顏色隨pH不同而變化 ： pH8.5 顯蘭色。,性狀,24,黃酮類化合物的理化性質(zhì),游離苷元： 二氫黃酮（醇）、黃烷（醇）有旋光性 其余黃酮類化合物無(wú)旋光性。 苷 類： 因?yàn)樘欠肿拥囊耄哂行庑裕?且多為左旋。,旋光性,25,黃酮類化合物的理化性質(zhì),黃酮類化合物的溶解行為與其結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài) 有很大的關(guān)系。 苷元： 難溶或不溶于水，可溶于甲醇、乙 醇、乙酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑。 苷： 可溶于水、乙醇、甲醇中，難溶于苯和氯仿 水溶度： 苷元苷，連糖越多，水溶度越大,溶解性,26,黃酮類化合物的理化性質(zhì),取代基對(duì)溶解度的影響： 羥基數(shù)目越多，水中溶解度增加； 羥基甲基化后，在有機(jī)溶劑中溶解度增加

10、。,黃酮（醇），查耳酮 平面型分子 二氫黃酮（醇） 非平面型分子 花色素 離子,水溶性增大,溶解性,27,黃酮類化合物的理化性質(zhì),酸性： 酚羥基 可溶于堿水、吡啶、中 酸性強(qiáng)弱取決于羥基數(shù)目和位置 7 、4二OH 7或4OH 一般酚OH 5OH 3OH 應(yīng)用: 提取、分離和鑒定中,酸性,28,黃酮類化合物的理化性質(zhì),由于黃酮類化合物分子中-吡喃酮環(huán)上的1-位氧原子，有未共用的電子對(duì)，表現(xiàn)出微弱堿性，與強(qiáng)無(wú)機(jī)酸生成鹽。,堿性,29,黃酮類化合物的理化性質(zhì),還原反應(yīng) 與金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng) 硼酸顯色反應(yīng) 堿性試劑顯色反應(yīng),顯色反應(yīng),30,黃酮類化合物的理化性質(zhì),HCl-Mg反應(yīng) 含黃酮（醇）、二

11、氫黃酮（醇） （+）橙紅色-紫紅色 查耳酮、橙酮、黃烷（醇）類 （-）不顯色 操作方法：1ml 樣品 + Mg粉 + 幾滴濃HCl 花色素及部分橙酮、查耳酮在濃鹽酸中會(huì)變色，故需做對(duì)照,還原反應(yīng),HCl-Mg反應(yīng),31,黃酮類化合物的理化性質(zhì),HCl-Zn反應(yīng) 二氫黃酮醇、黃酮醇-3-O-糖苷 （+）紅紫色 四氫硼鈉（鉀）反應(yīng) 二氫黃酮類化合物的專屬性還原劑 （+）紫-紫紅色,還原反應(yīng),32,黃酮類化合物的理化性質(zhì),鋁鹽：1% AlCl3或Al（NO2）3 黃色 定性、定量 鉛鹽：1%醋酸鉛或堿式醋酸鉛 黃紅色 沉淀 鋯鹽： 2%ZrOCl2的甲醇溶液 黃色 游離的3，5-羥基 鋯-枸櫞酸反應(yīng)

12、 黃綠色 熒光,絡(luò)合反應(yīng),33,黃酮類化合物的理化性質(zhì),鎂鹽： 二氫黃酮（醇）類 天藍(lán)色 5-酚羥基 色澤更明顯 氯化鍶： 氨性甲醇溶液 具有鄰二酚羥基 綠色棕色黑色 沉淀 三氯化鐵：酚類顯色劑 三氯化鐵-鐵氰化鉀,絡(luò)合反應(yīng),34,黃酮類化合物的理化性質(zhì),硼酸顯色反應(yīng),35,黃酮類化合物的理化性質(zhì),堿：氨蒸汽 可逆； 碳酸鈉水溶液 不可逆 二氫黃酮類 開(kāi)環(huán) 橙色黃色 黃酮醇類 黃色棕色（通入空氣）其他黃酮無(wú)次反應(yīng) 含有鄰二羥基或3,4-二羥基取代的黃酮類 不穩(wěn)定 易氧化 黃色深紅色綠棕色,堿性試劑顯色反應(yīng),36,練習(xí)一 蘆丁的顯色反應(yīng),HCl-Mg反應(yīng),(+),黃酮醇,HCl-Zn反應(yīng),(+)

13、,黃酮醇-3-O-糖苷,NaBH4反應(yīng),(-),非二氫黃酮類,鋯-枸櫞酸反應(yīng),(+),游離的5-羥基 加枸櫞酸褪色,SrCl2反應(yīng),(+),鄰二酚羥基,硼酸+草酸反應(yīng),(+),5-羥基黃酮,Molish反應(yīng),(+),苷,37,練習(xí)二-鑒別(化學(xué)方法),A,B,C,D,38,第十一章 黃酮類化合物,概 述,1,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,2,黃酮類化合物的理化性質(zhì),3,黃酮類化合物的提取和分離,4,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,5,39,黃酮類化合物的提取和分離,原理：黃酮類化合物的溶解性和酸性 相似相溶與酸堿理論 提?。?苷元：極性小的溶劑，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等 回流提取 苷及極性大的苷元：

14、 用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加熱提取 極性稍大的甙元一般指：羥基黃酮、雙黃酮、 橙酮、查爾酮 多糖苷類：一般用沸水提取,提取,40,黃酮類化合物的提取和分離,溶劑萃取法（系統(tǒng)分離法） 堿提酸沉法 炭粉吸附法,粗分,41,黃酮類化合物的提取和分離,藥 材,水或醇-水，加熱提取,提取液,濃縮，加3-4倍醇,醇水液,沉淀（水雜）,濃縮，回收醇，加水,水 液,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,石油醚層,氯仿層,乙酸乙酯層,正丁醇層,水層,葉綠素等脂 溶性成分,黃酮苷元,大極性苷元 小極性的苷,黃酮苷,多糖 蛋白質(zhì),原理： 利用黃酮類與其它雜質(zhì)極性 不同，選不同溶劑進(jìn)行萃取,溶劑萃取法

15、,42,黃酮類化合物的提取和分離,原理：酚羥基與堿成鹽，溶于水；加酸后析出 堿： 常用Ca(OH)2，即石灰乳(石灰水) 優(yōu)點(diǎn) A：使含酚羥基化合物成鹽溶解 B：使含羧基雜質(zhì)（果膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)等） 形成沉淀 注意 a：提取時(shí)，堿液濃度不宜過(guò)高。 b：加酸酸化時(shí)，酸性也不宜過(guò)強(qiáng)。 應(yīng)用：蘆丁和槲皮素的提取、分離和鑒定,堿提酸沉法,43,黃酮類化合物的提取和分離,原理：活性炭吸附黃酮苷類化合物 用途：主要用于含量較高的黃酮苷類的精制 操作：植物的甲醇提取物中，分次加入活性炭， 攪拌，靜置，定性檢查上清液無(wú)黃酮反應(yīng)時(shí)為止。 過(guò)濾，收集活性炭，依次用沸水、沸甲醇、7%酚/水、 15%酚/醇溶劑進(jìn)行

16、梯度洗脫，對(duì)各部分洗脫液進(jìn)行定 性檢查。 大部分黃酮苷類可以用7%酚/水洗下。,活性炭吸附法,44,黃酮類化合物的提取和分離,極性 氫鍵 分子大?。浚?酸性 特殊結(jié)構(gòu),硅膠 聚酰胺 凝膠 梯度pH萃取法 金屬鹽絡(luò)合法,柱色譜法,分離方法,45,黃酮類化合物的提取和分離,硅膠是一種高活性吸附材料，其化學(xué)分子式為mSiO2nH2O 應(yīng)用范圍： 主要分離小極性和中等極性的化合物，應(yīng)用最為廣泛。 異黃酮、二氫黃酮（醇）、高度甲基化（乙?；┑狞S 、 酮及黃酮醇 多羥基黃酮、黃酮醇及其苷類：硅膠加水去活化 吸附規(guī)律： 極性大吸附能力強(qiáng) e g ： A 苷元 B 二糖苷 C 單糖苷 Rf：A C B,硅

17、膠柱色譜,46,黃酮類化合物的提取和分離,原理：氫鍵吸附（作用） 洗脫規(guī)律：（先后） 母核上羥基增加，洗脫順序遞減 羥基數(shù)目相同時(shí)，有締合羥基 無(wú)締合羥基 苷元相同：三糖苷 雙糖苷 單糖苷 苷元 不同類型黃酮類化合物的洗脫先后順序?yàn)椋?異黃酮二氫黃酮醇黃酮黃酮醇。 分子中芳香程度高、共軛雙鍵多，則聚酰胺對(duì)其的吸附力強(qiáng)，故難于洗脫。 應(yīng)用范圍：適合各種類型的黃酮類化合物，包括苷、苷元、查耳酮及二氫黃酮,聚酰胺柱色譜,47,聚酰胺“雙重色譜”原理,正相色譜 反相色譜,苷與苷元聚酰胺色譜,聚酰胺：極性固定相（極性酰胺基團(tuán)） 非極性固定相（非極性脂肪鏈） 洗脫劑：有機(jī)溶劑（氯仿-甲醇，極性?。?含水溶

18、劑（甲醇-水，極性大） 先洗脫：游離黃酮（苷元，極性?。?苷（極性大）（柱色譜分離） Rf值： 苷元 苷 苷元 苷（TLC色譜鑒別）,48,正相與反相層析,硅膠 固定相（硅醇）極性 流動(dòng)相（醇）極性時(shí)為正相 聚酰胺 固定相（聚酰胺脂肪鏈）極性 流動(dòng)相（醇水）極性時(shí)為反相,槲皮素對(duì)照品,槲皮素,蘆丁,蘆丁對(duì)照品,槲皮素對(duì)照品,槲皮素,蘆丁,蘆丁對(duì)照品,聚酰胺TLC,硅膠TLC,49,黃酮類化合物的提取和分離,常用型號(hào)：Sephadex-G和Sephadex-LH20 原理：吸附作用和分子篩 對(duì)游離黃酮，主要是吸附作用, 吸附程度取決于游離酚羥基的數(shù)目，苷元的羥基數(shù)目越多，越難洗脫。 對(duì)黃酮苷，主

19、要是分子篩原理, 洗脫時(shí)按分子量由大到小先后洗脫下來(lái)。 常用洗脫劑： 堿性水溶液（0.1mol/L NH4OH），鹽水溶液(0.05mol/L NaCl) 醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水，乙醇等。 其它溶劑：含水丙酮、甲醇-氯仿(凝膠會(huì)膨脹， 體積變大)。,葡聚糖凝膠柱色譜,50,黃酮類化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo,51,黃酮類化合物的提取和分離,規(guī)律： 苷元的羥基數(shù)越多，Ve/Vo越大，越難以洗脫。 吸附作用 苷的分子量越大, 其上聯(lián)結(jié)糖的數(shù)目越多,Ve/Vo 越小, 容易洗脫。 分子篩原理 苷比苷元先洗脫。,葡聚糖凝膠柱色譜,52,黃酮類化合物的提取和分離,原理：

20、 黃酮類化合物具有酸性、且不同數(shù)目和不同位置的酚羥基的酸性強(qiáng)弱不同 適用范圍：適用于分離酸性強(qiáng)弱不同的黃酮苷元,梯度pH萃取法,53,黃酮類化合物的提取和分離,乙醚液 （脂雜）,乙醚液,乙醚液,乙醚液,乙醚液,堿液(3或5-OH黃酮),堿液(一般酚OH黃酮),堿液(7,4-二OH黃酮),堿液(7或4-OH黃酮),5% NaHCO3,5% Na2CO3,0.2% NaOH,4% NaOH,梯度pH萃取法,54,黃酮類化合物的提取和分離,原理：利用分子中某些特定官能團(tuán)性質(zhì)進(jìn)行分離 具有鄰二酚羥基的成分，用醋酸鉛沉淀 不具有鄰二酚羥基的成分，用堿式醋酸鉛沉淀 具有鄰二酚羥基的黃酮類化合物還可以與硼酸

21、反應(yīng)形成溶于水的硼酸絡(luò)合物，可以與不具有鄰二酚羥基的其它黃酮類化合物分離,金屬鹽絡(luò)合法,55,從檸檬果皮中分離降血壓有效成分,目的：使要得到的化合物溶解，而使蛋白質(zhì)、黏液質(zhì)等大極性成分形成沉淀除去,水提醇沉法,提取分離實(shí)例1,56,從檸檬果皮中分離降血壓有效成分,溶劑萃取法,鉛鹽沉淀法,凝膠色譜法,硅膠色譜法,目的： 除去Pb，生成PbCO3,提取分離實(shí)例1,57,提取分離實(shí)例1,從檸檬果皮中分離降血壓有效成分,58,提取分離實(shí)例1,從檸檬果皮中分離降血壓有效成分,59,滿山紅化學(xué)成分的提取分離,提取分離實(shí)例2,60,去除鞣質(zhì)等 減少雜質(zhì),滿山紅化學(xué)成分的提取分離,提取分離實(shí)例2,61,第十一

22、章 黃酮類化合物,概 述,1,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)和分類,2,黃酮類化合物的理化性質(zhì),3,黃酮類化合物的提取和分離,4,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,5,62,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,一 色譜法的應(yīng)用二 紫外光譜三 1H-NMR四 13C-NMR五 質(zhì)譜,63,黃酮類化合物的檢識(shí),顏色：多呈黃色 母核檢識(shí)： 鹽酸-鎂粉反應(yīng) 黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇 四氫硼鈉反應(yīng) 二氫黃酮（醇）類 取代基團(tuán)檢識(shí)：鋯鹽-枸櫞酸反應(yīng) 3-OH、 5-OH黃酮鑒別 氨性氯化鍶反應(yīng) 鄰二酚羥基 色譜檢識(shí): 硅膠 TLC 聚酰胺TLC 紙層析（PC）,理化檢識(shí),64,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,硅膠TLC

23、：用于分析與鑒定弱極性黃酮類化合物。 展開(kāi)劑：甲苯-甲酸甲酯-甲酸(5:4:1)，苯-甲醇，氯仿-甲醇等。 聚酰胺TLC： 適合于含游離酚OH的黃酮及其苷類的分析。 聚酰胺對(duì)黃酮類化合物吸附能力強(qiáng)，大多數(shù)展開(kāi)劑中含有醇、酸或水。 紙色譜（PC）： 適用于各種黃酮類化合物及其苷類的分析,色譜法,65,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,第一相展開(kāi)采用醇性展開(kāi)劑 如: BAW n-BuOH: HOAc:H2O=4:1:5上層 TBA t-BuOH: HOAc: H2O=3:1:1 水飽和n-BuOH 層析行為: Rf值: 苷元單糖苷雙糖苷 一般:苷元在0.70以上，而苷則小于0.7。,分 配 作 用,第

24、二相展開(kāi)采用水性展開(kāi)劑 如：26% HOAc水溶液 3% NaCl 水溶液 HOAc:濃HCl:H2O= 30: 3 : 10 層析行為: 連接糖鏈越長(zhǎng), Rf 越大(0.5); 苷元Rf較小，有的留在原點(diǎn)。,吸 附 作 用,紙色譜,66,雙向PC,第I向 醇性展開(kāi)劑 第II向 水性展開(kāi)劑 （BAW、TBA、水飽和正丁醇） （28%HAc、3%NaCl、1%HCl）,正相色譜 反相色譜 固定相（水）極性 流動(dòng)相 （ *有認(rèn)為是吸附原理）？,Rf規(guī)律：極性小的化合物Rf大 極性大的化合物Rf大,苷元（0.7以上） 單糖苷 雙糖苷（0.7以下） 苷元中，平面型分子 非平面型分子 Rf規(guī)律與左邊相反

25、 母核相同，2-OH 3-OH 4-OH 5- OH黃酮,苷元的分離鑒別 黃酮苷及花色素類,67,黃酮類化合物的檢識(shí)和結(jié)構(gòu)鑒定,紙層析（PC）：采用雙向紙層析。苷元:平面型分子: 黃酮(醇)、查耳酮的Rf小, 幾乎留在 原點(diǎn)不動(dòng)(Rf 0.02);非平面型分子: 二氫黃酮(醇)、二氫查耳酮的Rf大, 因親水性較強(qiáng)(Rf 0.10-0.30)。層析檢查方法：觀察熒光,用紫外光燈照射看到有色斑點(diǎn)，NH3處理 產(chǎn)生明顯的色變。用2%AlCl3甲醇液噴霧,UV燈下呈亮黃色熒光斑點(diǎn)。,紙色譜,68,黃酮類化合物結(jié)構(gòu)鑒定,一般步驟： 1 待測(cè)樣品在甲醇中的UV光譜 2 待測(cè)樣品在甲醇中加入各種診斷試劑后的

26、UV光譜 診斷試劑：NaOCH3 ,NaOAc, NaOAc/H3BO3, AlCl3, AlCl3/HCl 3 苷類水解后的UV光譜。,UV,69,黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定,苯甲酰基 帶II：220280nm,桂皮?；?帶I：300400nm,UV,70,兩者UV光譜圖形相似，但帶I位置不同。整個(gè)母核上氧取代程度越高，則帶I將向長(zhǎng)波方向位移（紅移）。,不同類型黃酮的UV基本特征,黃酮 黃酮醇,71,帶II吸收峰為主峰，帶I很弱，常在主峰的長(zhǎng)波方向有一肩峰。,c. d.,不同類型黃酮的UV基本特征,245-270nm,270-295nm,異黃酮、二氫黃酮 二氫黃酮醇,72,共同特征是帶I很強(qiáng)，為

27、主峰 而帶II則較弱，為次強(qiáng)峰。帶I的位置不同。,不同類型黃酮的UV基本特征,查耳酮 橙酮類,73,不同類型黃酮的UV基本特征,74,診斷試劑在結(jié)構(gòu)測(cè)定中的應(yīng)用,常用的診斷試劑： 甲醇鈉(NaOCH3) 醋酸鈉(NaOCOCH3) 醋酸鈉/硼酸(NaOCOCH3/H3BO3) 三氯化鋁(AlCl3) 三氯化鋁/鹽酸(AlCl3/HCl),75,診斷試劑在結(jié)構(gòu)測(cè)定中的應(yīng)用,1. NaOMe：堿性強(qiáng)，酚OH易形成鈉鹽。PhOHPhO-Na+，從而增加電子云密度和流動(dòng)性 紅移。 2. NaOAc： 未熔融: 堿性較弱，只能使黃酮母核上酸性較強(qiáng) 的酚OH解離而使UV譜紅移。 熔 融：堿性,表現(xiàn)出與Na

28、OMe類似的效果。,76,診斷試劑在結(jié)構(gòu)測(cè)定中的應(yīng)用,3. NaOAc/H3BO3：用于鑒定鄰二酚OH。 在醋酸鈉堿性下，鄰二酚OH與硼酸絡(luò)合，引起峰帶紅移。,77,診斷試劑在結(jié)構(gòu)測(cè)定中的應(yīng)用,4. AlCl3 5. AlCl3 /HCl： 分子中有3-OH，5-OH，鄰二酚OH時(shí)，可與Al3+絡(luò)合，引 起吸收峰紅移。 鋁絡(luò)合物穩(wěn)定性： 黃酮醇3-OH 黃酮5-OH 二氫黃酮5-OH 鄰二酚OH 二氫黃酮醇3-OH,78,診斷試劑對(duì)黃酮類化合物UV譜圖的影響及結(jié)構(gòu)的關(guān)系,79,診斷試劑對(duì)黃酮類化合物UV譜圖的影響及結(jié)構(gòu)的關(guān)系,80,練習(xí)-蘆丁的UV光譜,CH3OH NaOCH3 AlCl3 A

29、lCl3/HCl NaOCOCH3 NaOCOCH3/H3BO3,259, 266sh, 299sh, 359 272, 327, 410 275, 303sh, 433 271, 300, 364sh, 402 271, 325, 393 262, 298, 387,81,練習(xí)-由UV光譜推斷結(jié)構(gòu),CH3OH NaOCH3 AlCl3 AlCl3/HCl CH3OH NaOCOCH3 NaOCOCH3/H3BO3,259,266sh,299sh,359 272,327,410 275,303sh,433 271,300,364sh,402 259,266sh,299sh,359 271,32

30、5,393 262,298,387,紅移51nm,有4-OH,紫移31nm,示B環(huán)有鄰二酚羥基,紅移43nm,只有5-OH,紅移12nm,有7-OH,紅移28nm,示B環(huán)有鄰二酚羥基,82,氫核磁共振在黃酮類結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用,常用溶劑: CDCl3、DMSO-d6、C5H5N; 當(dāng)用DMSO-d6 時(shí): 5-OH: 12.40; 7-OH: 10.93; 3-OH: 9.70。 加入D2O交換后，OH信號(hào)消失。,83,氫核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（一）,84,氫核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（二）,1,0,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,C3CH C2CH2 C-CH3 環(huán)烷烴,0.21.5,

31、CH2Ar CH2NR2 CH2S CCH CH2C=O CH2=CH-CH3,1.73,CH2F CH2Cl CH2Br CH2I CH2O CH2NO2,24.7,0.5(1)5.5,68.5,10.512,CHCl3 (7.27),4.65.9,910,OH NH2 NH,CR2=CH-R,RCOOH,RCHO,常用溶劑的質(zhì)子的化學(xué)位移值,D,特征質(zhì)子化學(xué)位移,Chemical shift (d, ppm),Cl2CHCH3,4 lines; quartet,2 lines; doublet,CH3,CH,核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（三）,Chemical shift (d, ppm),BrCH2

32、CH3,4 lines; quartet,3 lines; triplet,CH3,CH2,核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（四）,Chemical shift (d, ppm),BrCH(CH3)2,7 lines; septet,2 lines; doublet,CH3,CH,核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（五）,Chemical shift (d, ppm),OCH3,核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（六）,doublet of doublets,doublet,doublet,核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（七）,Chemical shift (d, ppm),ClCH2,CH3,ClCH2CH2CH2CH2CH3,1H,核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（八）

33、,Chemical shift (d, ppm),ClCH2CH2CH2CH2CH3,13C,CDCl3,核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（九）,Chemical shift (d, ppm),核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（十）,Chemical shift (d, ppm),C,C,CH,CH,CH,CH2,CH2,CH2,CH3,核磁共振基礎(chǔ)知識(shí)（十一）,94,1H-NMR在黃酮結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用,A 環(huán)質(zhì)子 B環(huán)質(zhì)子 C環(huán)質(zhì)子 糖上質(zhì)子 取代基團(tuán)質(zhì)子,芳環(huán)質(zhì)子 芳環(huán)質(zhì)子 與類型有關(guān) 端基質(zhì)子 -OH、-CH3、 其他質(zhì)子 -OCH3、,-OCOCH3,黃酮類化合物各質(zhì)子的信號(hào)特征（、峰形狀、J、峰面積）,符合芳環(huán)質(zhì)子

34、規(guī)律,95,黃酮類化合物A、B環(huán)的取代模式,A環(huán)取代模式,B環(huán)取代模式,96,黃酮類化合物1H-NMR譜,5,7-二取代黃酮,A環(huán),97,5,7-二取代黃酮實(shí)例,芹菜素,98,5-H 7.98.2 (d, J = 9.0 Hz) 6-H 6.77.1 (dd, J=9.0, 2.5 Hz) 8-H 6.77.0 (d, J = 2.5 Hz),7-取代黃酮,A環(huán),黃酮類化合物1H-NMR譜,99,7-取代黃酮實(shí)例,刺槐亭,100,B環(huán)質(zhì)子形成H-2,6及H-3,5兩組 形成AABB系統(tǒng) 總體比A環(huán)質(zhì)子低場(chǎng) H-2,6比H-3,5低場(chǎng),4-取代黃酮,B環(huán),黃酮類化合物1H-NMR譜,101,4-

35、取代黃酮實(shí)例,芹菜素,Chemical shift (d, ppm),OCH3,AABB 取代模式,103,對(duì)于黃酮與黃酮醇 H-5作為一個(gè)二重峰 (d, J=8.5 Hz)出現(xiàn)在6.7-7.1處 H-2(d, J=2.5 Hz)及 H-6(dd, J=8.5, 2.5Hz) 信號(hào)出現(xiàn)在7.2-7.9,異黃酮、二氫黃酮及二氫異黃酮 H-2,5,6作為一個(gè)多重峰出現(xiàn)在 6.7-7.1,3,4-取代黃酮,B環(huán),黃酮類化合物1H-NMR譜,104,3,4-取代黃酮實(shí)例,木犀草素,105,若3 位和5 位取代基相同時(shí)，H-2 , H-6 作為一個(gè)單峰，出現(xiàn)在 6.50 7.50。 若3 位和5 位取代基不相同時(shí)， H-2 , H-6