1、第2課時(shí)微生物的選擇與純培養(yǎng)學(xué)習(xí)導(dǎo)航1.閱讀教材P9內(nèi)容，分析培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。2.結(jié)合教材P1112“微生物的分離與純化實(shí)驗(yàn)”，理解并掌握利用平板劃線分離法和涂布分離法來純化微生物的方法。重難點(diǎn)擊1.探究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。2.掌握微生物分離與純化的基本操作。一、培養(yǎng)基對微生物的選擇作用不同微生物的營養(yǎng)需求不同，因此同一培養(yǎng)基上不同微生物的生長繁殖情況不同，同一種微生物在不同培養(yǎng)基上的生長繁殖情況也不同。通過實(shí)驗(yàn)探究分析培養(yǎng)基對微生物的選擇作用。1.實(shí)驗(yàn)探究利用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基檢測空氣中的微生物，利用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基檢測桌面上的微生物。(1)實(shí)驗(yàn)方法空氣打開無菌平板，讓其在

2、空氣中暴露3060 min。桌面用一根無菌棉簽，先在無菌平板的一個(gè)區(qū)域潤濕，然后用其擦抹桌面，再用此棉簽在平板的另一區(qū)域內(nèi)來回劃線。(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果同種培養(yǎng)基上生長的微生物類群主要有：細(xì)菌、放線菌、霉菌和酵母菌。在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中細(xì)菌的數(shù)量多，為優(yōu)勢菌；在馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基中霉菌的數(shù)量多，為優(yōu)勢菌。(3)上述實(shí)驗(yàn)說明在科研或工業(yè)生產(chǎn)中如果想獲得一種培養(yǎng)物應(yīng)采取的措施是：配制相應(yīng)的培養(yǎng)基，采用適當(dāng)?shù)南♂尪龋玫侥骋环N微生物的純培養(yǎng)物，即單菌落。2.歸納分析(1)菌落概念：微生物的單個(gè)菌體或孢子在固體培養(yǎng)基表面上生長繁殖形成的肉眼可見的細(xì)胞群體，稱為菌落。(2)菌落特征：不同種微生物對營養(yǎng)要求不

3、一樣，在相應(yīng)的培養(yǎng)基上可形成大小、形態(tài)各異的菌落(如圖)，由圖思考：細(xì)菌菌落的特征：濕潤、黏稠、易挑起、菌落顏色一致。酵母菌菌落的特征：與細(xì)菌極相似，但是菌落要大而厚，顏色單調(diào)。霉菌菌落的特征：較疏松、常呈絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀，一般比細(xì)菌菌落大幾倍到幾十倍。(3)利用不同培養(yǎng)基培養(yǎng)、分離微生物種類營養(yǎng)需求pH范圍適用培養(yǎng)基細(xì)菌高氮源(CN41)7.27.6牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基酵母菌和霉菌高碳源(CN161)56馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基3.選擇培養(yǎng)基根據(jù)微生物對營養(yǎng)物質(zhì)、pH、氧氣等要求的不同，在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，促進(jìn)需要的微生物的生長，或者抑制不需要的微生物的生長，從而淘汰不需要的微生物

4、，分離得到需要的微生物純種，這樣的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。1.不同種微生物菌落的區(qū)別(1)酵母菌菌落與細(xì)菌菌落有何區(qū)別？答案酵母菌菌落外形上與細(xì)菌極為相似，但比細(xì)菌菌落大而厚，顏色也較單調(diào)。(2)霉菌菌落與細(xì)菌菌落有何區(qū)別？答案霉菌菌落較疏松，常呈絨毛狀、絮狀或蜘蛛網(wǎng)狀，一般比細(xì)菌菌落大幾倍到幾十倍。2.培養(yǎng)基的采用及原因(1)培養(yǎng)細(xì)菌常采用什么培養(yǎng)基，原因是什么？答案牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，原因是細(xì)菌生長需要的氮源高(C/N比為41)，pH中性或微堿性(pH7.27.6)，因此培養(yǎng)細(xì)菌常采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。(2)培養(yǎng)酵母菌和霉菌常采用什么培養(yǎng)基，原因是什么？答案馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，酵母菌和

5、霉菌生長所需的碳源含量高(C/N比為161)，pH偏酸性(pH56)，因此培養(yǎng)酵母菌和霉菌常采用馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(簡稱PDA)。歸納總結(jié)(1)菌落中的微生物是同一類型的，可以看做一個(gè)種群，菌落的特征是進(jìn)行菌種鑒定的重要依據(jù)之一。(2)常見的選擇培養(yǎng)基加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌。加入高濃度的食鹽可得到金黃色葡萄球菌。無氮源培養(yǎng)基可以分離固氮微生物。石油是唯一碳源的培養(yǎng)基，可以分離能消除石油污染的微生物。將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)，分離耐高溫的微生物。1.下列關(guān)于四種生物的能源、碳源、氮源和代謝類型的描述，其中正確的一組是()項(xiàng)目硝化細(xì)菌乳酸菌酵母菌衣藻能源氧化NH3分解乳酸固定N2利

6、用光能碳源CO2糖類糖類CO2氮源NH3N2N2NO代謝類型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型自養(yǎng)需氧型A.硝化細(xì)菌、乳酸菌 B.乳酸菌、酵母菌C.酵母菌、衣藻 D.硝化細(xì)菌、衣藻答案D解析解答此題時(shí)應(yīng)明確：硝化細(xì)菌、乳酸菌屬于細(xì)菌，酵母菌屬于真菌，衣藻屬于真核生物。微生物所需的能源、碳源、氮源因其同化作用類型的不同而不同。2.培養(yǎng)基是人工配制的適合不同微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。先用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)混合菌種，然后分別放在A、B、C三種特殊培養(yǎng)基上培養(yǎng)，分別得到菌落、。其中A培養(yǎng)基以蛋白質(zhì)為唯一碳源；B培養(yǎng)基中缺氮源；C培養(yǎng)基中成分如下表：成分粉狀硫MgSO47H2O(NH4)2SO4F

7、eSO4KH2PO4CaCl2H2O含量10 g0.5 g0.4 g0.01 g4 g25 g1 000 mL請分析回答：(1)菌落同化作用類型最可能是 。A.光能自養(yǎng)型 B.化能自養(yǎng)型C.異養(yǎng)型 D.A或B(2)如果要獲得具有固氮能力的菌株，應(yīng)選用菌落 ；如果要培育獲得大量蛋白酶的菌株，應(yīng)選用菌落 。(3)從題中分析可見，生物進(jìn)化的內(nèi)在因素是 ，對生物生存起重要作用的因素是 。問題導(dǎo)析(1)蛋白酶可水解蛋白質(zhì)為氨基酸。(2)當(dāng)培養(yǎng)基無氮源時(shí)，固氮微生物可以進(jìn)行固氮作用，獲得氮源。(3)題干表格中缺少碳源成分且含硫較多。答案(1)B(2)(3)遺傳和變異外界環(huán)境條件解析由題目可知：A培養(yǎng)基以蛋

8、白質(zhì)為唯一碳源，則菌落的菌株可合成較多的蛋白酶；B培養(yǎng)基中缺氮源，只能培養(yǎng)固氮微生物；C培養(yǎng)基中無碳源且含有大量粉狀硫，可培養(yǎng)化能自養(yǎng)型微生物，所以生物的生存是由外界環(huán)境條件決定的。二、微生物的分離與純化要研究某種微生物的特性，就要從混雜的樣品中分離所需的菌種進(jìn)行純培養(yǎng)。閱讀教材，試以大腸桿菌為例探討微生物分離與純化的方法。1.實(shí)驗(yàn)原理微生物的分離與純化就是將待檢測微生物樣品通過劃線或涂布接種在固體培養(yǎng)基上，樣品中的每一個(gè)細(xì)胞或孢子都可以生長繁殖形成單個(gè)菌落。將單個(gè)菌落接種到斜面培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后，即可得到一個(gè)微生物的純種。2.方法步驟(1)稀釋：用1 mL無菌吸管吸取1 mL大腸桿菌培養(yǎng)液，

9、加入到盛有9 mL無菌水的大試管中，充分混勻，然后用無菌吸管從此試管中吸取1 mL加入另一支盛有9 mL無菌水的試管中混合均勻，依次類推制成101、102、103、104、105、106系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。(2)劃線或涂布平板劃線分離法a.操作：在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取大腸桿菌培養(yǎng)液一環(huán)在平板上劃線。b.劃線方法：平行劃線和連續(xù)劃線。c.平行劃線時(shí)，第一次劃線及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，劃線結(jié)束后也要灼燒接種環(huán)，目的分別是什么？答案項(xiàng)目第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結(jié)束時(shí)灼燒目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次

10、劃線的末端，使每次劃線后菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者涂布分離法a.將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。b.取不超過0.1 mL的菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。c.將蘸有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810 s。d.用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。(3)培養(yǎng)：將接種的平板倒置于培養(yǎng)箱或溫室中37 培養(yǎng)1624 h。3.接斜面從單個(gè)菌落上挑取少許細(xì)胞，接種到斜面培養(yǎng)基上，置于培養(yǎng)箱或溫室37 培養(yǎng)24 h，菌種長好后，4 保存?zhèn)溆谩?.平板劃線分離法操作注意事項(xiàng)(1)平板劃線分離法接種菌種時(shí)，哪些操作可防止雜菌污染

11、？答案接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒。劃完一個(gè)區(qū)域后，將接種環(huán)灼燒，冷卻后再劃下一區(qū)域。接種環(huán)沾取菌液時(shí)，要將試管口、棉塞等通過火焰。劃線時(shí)將培養(yǎng)皿打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)。(2)在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答案避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。(3)在做第二次劃線以及其后的操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答案劃線后末端含有的細(xì)菌數(shù)目較少，每次從上一次的末端開始劃線能夠使細(xì)菌的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終分散成單個(gè)的細(xì)菌。(4)為何最后一次劃線不能與第一次劃線相連？答案最后一次劃線已經(jīng)將細(xì)菌稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連則

12、增加了細(xì)菌的數(shù)目，得不到純化的效果。2.涂布分離法操作注意事項(xiàng)(1)涂布分離法的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想將菌液滴加到培養(yǎng)基上時(shí)應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？答案應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適，吸管頭不要接觸任何其他物體，吸管要在酒精燈火焰附近等。(2)操作結(jié)束后，為什么要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)？未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長很關(guān)鍵。如果有菌落生長，說明了什么？答案培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照。未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12 d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的；若有菌落生長，說明培養(yǎng)基滅菌不

13、徹底，或培養(yǎng)基被污染，需要重新制備。歸納總結(jié)平板劃線分離法和涂布分離法的比較平板劃線分離法涂布分離法特點(diǎn)操作簡單，但是單菌落不易分離操作復(fù)雜，但是單菌落易分離原理連續(xù)劃線。由于劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落將菌液進(jìn)行一系列的梯度釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)皿表面形成單個(gè)菌落操作注意事項(xiàng)第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)。在灼

14、燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線，以免接種環(huán)溫度太高殺死菌種涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，對涂布器等接種器具進(jìn)行消毒和滅菌、酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等相同點(diǎn)用平板劃線分離法和涂布分離法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種3.涂布分離法是微生物培養(yǎng)中常用的一種接種方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.操作前需要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B.需將不同稀釋度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基表面C.不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落D.

15、操作過程中對培養(yǎng)基和涂布器等均需進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理答案C解析涂布分離法要先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，A項(xiàng)正確；只有在稀釋度足夠高的菌液中，聚集在一起的微生物才被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落，故而要將不同稀釋度的菌液分別涂布平板，B項(xiàng)正確、C項(xiàng)錯(cuò)誤；在稀釋涂布過程中，為防止雜菌污染，要對培養(yǎng)基和涂布器等進(jìn)行嚴(yán)格滅菌處理，D項(xiàng)正確。一題多變(1)B項(xiàng)中不同稀釋度的菌液一般涂布幾個(gè)平板為宜？答案為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每個(gè)稀釋度的菌液一般涂布3個(gè)平板，并對結(jié)果取平均值。(2)如何證明該接種過程是成功的？答案將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入適宜溫度的恒溫箱中，培養(yǎng)12 h和24 h

16、后，觀察培養(yǎng)基上的菌落情況，若未接種的培養(yǎng)基上無菌落生長，則證明操作是成功的；否則不成功。(3)題中如果不同稀釋度的菌液接種后都不能得到單細(xì)胞菌落，原因可能是什么？答案可能是稀釋度不夠，聚集在一起的微生物沒能被分散成單個(gè)細(xì)胞。(4)如果不進(jìn)行D項(xiàng)操作，培養(yǎng)基上的菌落可能有哪些變化？答案菌落種類和數(shù)目增多。4.圖甲是涂布分離法中的部分操作，圖乙是平板劃線分離法操作結(jié)果。 下列敘述中，錯(cuò)誤的是()A.甲中涂布前要將涂布器灼燒，冷卻后才能取菌液B.對于濃度較高的菌液，如果甲中的稀釋倍數(shù)僅為102，則所得的菌落可能不是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成C.乙中培養(yǎng)皿中所得的菌落都符合要求D.乙中的連續(xù)劃線的起

17、點(diǎn)是上一次劃線的末端問題導(dǎo)析(1)對菌液進(jìn)行稀釋時(shí)，菌液中菌體的濃度越高，則稀釋的倍數(shù)也要越高，菌體的濃度低時(shí)，則稀釋的倍數(shù)不必太高。(2)高溫會(huì)殺死菌體，所以一些經(jīng)過高溫或灼燒滅菌的器材需要冷卻后才能接觸菌種。(3)平板劃線分離法的多次劃線中，菌體越來越少，即不同劃線處的菌體數(shù)目不同，所以形成的菌落并非全部是由單個(gè)菌體繁殖而成的。答案C解析灼燒后的涂布器如果沒有冷卻就接觸菌種，會(huì)將菌體殺死，A正確；稀釋倍數(shù)過低，會(huì)導(dǎo)致多個(gè)菌體聚集在一起繁殖成菌落，B正確；平板劃線分離法中一般最后一次劃線的末端處形成的菌落才是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成，這種菌落才符合要求，C錯(cuò)誤；連續(xù)劃線中，除了第一次劃線外

18、，每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，目的是使菌體密度越來越小，保證最后劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)胞或孢子繁殖而成，D正確。一題多變稀釋倍數(shù)和劃線次數(shù)是兩種接種方法的關(guān)鍵，決定稀釋倍數(shù)和劃線次數(shù)的因素是什么？答案決定稀釋倍數(shù)及劃線次數(shù)的因素是菌液的濃度，如果菌液的濃度較高則需要高倍數(shù)的稀釋，所劃線次數(shù)也要較多，否則就可以低倍稀釋或減少劃線次數(shù)。拓展提升兩種接種方法中，只有涂布分離法才適合對細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)的原因只要稀釋倍數(shù)足夠高，則涂布分離法中形成的每個(gè)菌落都是由單一菌體繁殖而成的，即一個(gè)肉眼看不見的細(xì)菌對應(yīng)著一個(gè)可以看見的菌落，可以通過統(tǒng)計(jì)菌落的數(shù)目推測出細(xì)菌的數(shù)目。而平板劃線分離法中一般除了

19、最后一次劃線末端處的菌落是由單一的細(xì)菌繁殖而成的，其他每個(gè)菌落往往是由多個(gè)細(xì)菌一起繁殖而成，即一個(gè)菌落并非對應(yīng)著一個(gè)細(xì)菌，所以不適合用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)。1.微生物培養(yǎng)過程中，肉眼鑒別金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的重要依據(jù)是()A.細(xì)菌的大小、形狀、顏色B.菌落的大小、形狀、顏色C.有無鞭毛D.培養(yǎng)基的不同答案B解析微生物的鑒別和分離，一般要用固體培養(yǎng)基，由于不同微生物在固體培養(yǎng)基上長出菌落的形狀、顏色等各不相同，所以可以作為鑒別的標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)槊恳粋€(gè)細(xì)菌細(xì)胞很小，肉眼無法看到其顏色、形狀等。2.通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏氮源的培養(yǎng)基上，大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中

20、加入青霉素，可以抑制細(xì)菌和放線菌；在培養(yǎng)基中加入10%的酚，可以抑制細(xì)菌和霉菌。利用上述方法不能從混雜的微生物群體中分離出()A.大腸桿菌 B.霉菌C.放線菌 D.圓褐固氮菌答案A解析固氮細(xì)菌的生長不需要從培養(yǎng)基中獲得氮源，可在缺乏氮源的培養(yǎng)基上正常生長，因此可分離出圓褐固氮菌；在加入青霉素的培養(yǎng)基上不能生長細(xì)菌和放線菌，可分離出霉菌；在加入10%的酚的培養(yǎng)基中，因該培養(yǎng)基能抑制細(xì)菌和霉菌的生長，所以可分離出放線菌。利用上述三種培養(yǎng)基無法分離出大腸桿菌。3.如圖是微生物平板劃線分離法示意圖，劃線的順序?yàn)?2345。下列操作方法正確的是()A.操作前不用進(jìn)行任何處理B.劃線操作必須在火焰上進(jìn)行C

21、.在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D.在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對接種環(huán)滅菌答案D解析劃線之前應(yīng)對接種環(huán)滅菌；劃線操作在酒精燈火焰旁進(jìn)行；從1區(qū)域至5區(qū)域菌落密度越來越小，可能會(huì)在3、4、5區(qū)域得到所需菌落。4.分離純化大腸桿菌最常用的方法是平板劃線分離法和涂布分離法。下列有關(guān)這兩種方法的敘述錯(cuò)誤的是()A.均將大腸桿菌接種在固體培養(yǎng)基的表面B.獲得的每個(gè)菌落均是由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來的子細(xì)胞群C.都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行操作，以防止雜菌污染D.稀釋分散菌種的原理不同，均能達(dá)到分離純化大腸桿菌的目的答案B5.下表是從土壤中分離純化土壤細(xì)菌的培養(yǎng)基配方。請回答下面的問題：試劑用量試劑用量牛肉膏/g

22、5瓊脂/g20蛋白胨/g10水/mL1 000NaCl/g5(1)培養(yǎng)基的類型很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、 和無機(jī)鹽。上述培養(yǎng)基配方中能充當(dāng)碳源的成分是 。培養(yǎng)基配制完成以后，一般還要調(diào)節(jié)pH并對培養(yǎng)基進(jìn)行 處理。(2)分離純化微生物最常使用的接種方法是 和 。(3)假設(shè)培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是什么？(列舉兩項(xiàng)) 。答案(1)氮源牛肉膏和蛋白胨滅菌(2)平板劃線分離法涂布分離法(3)稀釋倍數(shù)不夠，菌液的濃度太高；劃線時(shí)，劃完第一次沒有滅菌又接著劃第二次；培養(yǎng)過程滅菌不嚴(yán)格，受到微生物的污染解析(1)培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中一般含有水、無機(jī)鹽、碳源、氮源和生長因子。

23、牛肉膏、蛋白胨既是碳源又是氮源；培養(yǎng)基在接種前必須滅菌處理。(2)微生物常用的接種方法包括平板劃線分離法和涂布分離法。(3)多種因素都會(huì)導(dǎo)致接種的菌種密度較大，沒有形成單一的菌落。課時(shí)作業(yè)基礎(chǔ)過關(guān)1.用平板劃線分離法或涂布分離法純化大腸桿菌時(shí)()可以用相同的培養(yǎng)基都需要使用接種針進(jìn)行接種都需要在火焰旁進(jìn)行接種都可以用來計(jì)數(shù)活菌A. B. C. D.答案C解析平板劃線分離法或涂布分離法都使用固體培養(yǎng)基，故正確；平板劃線分離法采用接種針或接種環(huán)進(jìn)行操作，而涂布分離法采用涂布器進(jìn)行操作，故錯(cuò)誤；純化時(shí)，要進(jìn)行無菌操作，需要在火焰旁接種，避免空氣中的微生物混入培養(yǎng)基，故正確；平板劃線分離法一般用于分離

24、而不是計(jì)數(shù)，故錯(cuò)誤。2.下列有關(guān)平板劃線分離法操作的敘述，不正確的是()A.第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物B.每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上的菌種C.在第二區(qū)域內(nèi)劃線，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液D.劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者答案C解析在第二區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種來源于第一次劃線的末端。3.下列依次表示倒平板、接種的位置以及平板劃線分離法接種的路徑的示意圖，其中錯(cuò)誤的是()答案D解析平板劃線分離法除第一次劃線外，以后的每一次劃線都從上一次劃線的末端開始。4.涂布分離法操作需要用到()

25、A.接種環(huán)、滴管、酒精燈B.接種環(huán)、移液管、酒精燈C.涂布器、移液管、酒精燈D.涂布器、接種環(huán)、酒精燈答案C5.將接種后的培養(yǎng)基和一個(gè)未接種的培養(yǎng)基都放入37 恒溫箱的目的是()A.對比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用B.對比分析培養(yǎng)基上是否生有雜菌C.沒必要放入未接種的培養(yǎng)基 D.為了下次接種時(shí)再使用答案B6.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是()A.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌B.接種純種細(xì)菌C.適宜環(huán)境條件下培養(yǎng) D.防止外來雜菌的入侵答案D能力提升7.如圖為純化大腸桿菌的一個(gè)操作環(huán)節(jié)，下列相關(guān)敘述中，錯(cuò)誤的是()A.該操作步驟是接種，方法是平板劃線分離法B.除第一次劃線外，以

26、后的每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端C.圖中細(xì)菌密度最小的是5處D.該接種方法適用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)答案D解析圖中所示的純化方法是平板劃線分離法，該方法要求連續(xù)劃線多次，直到最后一次劃線的末端細(xì)菌呈單個(gè)存在，所以該方法僅用于純化大腸桿菌但不適用于細(xì)菌的計(jì)數(shù)。8.做“微生物的分離與培養(yǎng)”實(shí)驗(yàn)時(shí)，下列敘述正確的是()A.高壓滅菌加熱結(jié)束時(shí)，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落D.用記號(hào)筆標(biāo)記培養(yǎng)皿中菌落時(shí)，應(yīng)標(biāo)記在皿底上答案D解析A項(xiàng)錯(cuò)，高壓滅菌加熱結(jié)束后，讓其自然冷卻后再慢慢打開排氣閥

27、以排除余氣，然后才能開蓋取物；B項(xiàng)錯(cuò)，倒平板時(shí)左手拿培養(yǎng)皿，右手拿錐形瓶，左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，倒入培養(yǎng)基后立即蓋上培養(yǎng)皿皿蓋；C項(xiàng)錯(cuò)，灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種；D項(xiàng)對，在微生物的培養(yǎng)中，一般將培養(yǎng)皿倒置，在皿底上用記號(hào)筆做標(biāo)記。9.平板劃線分離法和涂布分離法是純化微生物的兩種常用方法，下列描述正確的是()A.都要將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B.平板劃線分離法是將不同稀釋度的菌液通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作C.涂布分離法是將不同稀釋度的菌液倒入液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)D.都會(huì)在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落答案D解析平板劃線分離法不需要進(jìn)行梯度稀

28、釋，涂布分離法是將不同稀釋度的菌液滴加到固體培養(yǎng)基的表面再用無菌玻璃涂棒將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。平板劃線分離法和涂布分離法都能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。10.平板劃線分離法和涂布分離法是常用的兩種接種方法。下列相關(guān)敘述中錯(cuò)誤的是()A.平板劃線分離法要求要連續(xù)多次劃線，且除了第一次劃線外，每一次劃線的起點(diǎn)都是上一次劃線的終點(diǎn)B.除了第一次劃線需要將接種環(huán)灼燒滅菌外，以后的劃線可以不用滅菌C.如果菌液本來濃度不高，則可以適當(dāng)降低稀釋倍數(shù)D.充分稀釋和連續(xù)劃線的目的都是為了使形成的菌落是由單一的細(xì)菌細(xì)胞繁殖而成答案B解析平板劃線分離法需要連續(xù)劃線的目的就是使得細(xì)菌的濃度降低，所以除了第一次劃

29、線外，以后每次劃線的起點(diǎn)都是上一次劃線的終點(diǎn)，A正確；每一次劃線前都要將接種環(huán)進(jìn)行灼燒，將上次劃線結(jié)束后殘留的細(xì)菌殺死，使細(xì)菌盡快分散成單個(gè)，B錯(cuò)誤；稀釋倍數(shù)要隨菌液的濃度而定，如果菌液的濃度太大，則需要更高的稀釋倍數(shù)，否則就可以適當(dāng)降低稀釋的倍數(shù)，C正確；涂布分離法中的充分稀釋及平板劃線分離法中的連續(xù)劃線，目的都是為了保證菌落是由單一的細(xì)菌細(xì)胞繁殖而成的，D正確。11.回答以下關(guān)于微生物的培養(yǎng)和發(fā)酵的問題：(1)某中學(xué)生物興趣小組在進(jìn)行A細(xì)菌的培養(yǎng)過程中，發(fā)現(xiàn)了另一種B細(xì)菌，在B細(xì)菌周圍A細(xì)菌的生長繁殖受到抑制，這有可能是B細(xì)菌產(chǎn)生了不利于(抑制)A細(xì)菌生存的物質(zhì)?，F(xiàn)在請你在以下實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上

30、，繼續(xù)完成驗(yàn)證A細(xì)菌生長繁殖受到抑制的原因的實(shí)驗(yàn)過程： (用序號(hào)、文字和箭頭作答)。(2)上圖示培養(yǎng)基中加入了凝固劑(或瓊脂)，致使該培養(yǎng)基屬于 。培養(yǎng)微生物前，所用培養(yǎng)基一般需采用 法進(jìn)行滅菌，接種微生物常用的方法有 和 ，其中后者也可用于微生物的計(jì)數(shù)。答案(1)去除步驟中培養(yǎng)皿里的B細(xì)菌并保留培養(yǎng)基再接種A細(xì)菌培養(yǎng)一段時(shí)間觀察A細(xì)菌的生長情況(答案合理即可)(2)固體培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌平板劃線分離法涂布分離法解析(1)在去除B細(xì)菌的培養(yǎng)基上再接種A細(xì)菌，可根據(jù)A細(xì)菌的生長情況來驗(yàn)證是否是B細(xì)菌產(chǎn)生了不利于A細(xì)菌生存的物質(zhì)。(2)固體培養(yǎng)基中一般需加入瓊脂。一般培養(yǎng)基的滅菌方法為高壓蒸汽滅菌

31、法，接種微生物的常用方法為平板劃線分離法和涂布分離法，其中只有涂布分離法可用于微生物的計(jì)數(shù)。12.從自然界微生物中篩選某菌種的一般步驟是：采集菌樣富集培養(yǎng)純種分離性能測定。(1)不同微生物的生存環(huán)境不同，獲得理想微生物的第一步是從合適的環(huán)境采集菌樣，然后再按一定的方法分離、純化。例如，培養(yǎng)噬鹽菌的菌樣應(yīng)從 環(huán)境中采集。(2)富集培養(yǎng)指創(chuàng)設(shè)僅適合待分離微生物旺盛生長的特定環(huán)境條件，使其數(shù)量大大增加，從而分離出所需微生物的培養(yǎng)方法。對產(chǎn)耐高溫淀粉酶微生物的富集培養(yǎng)應(yīng)選擇 的培養(yǎng)基，并在 條件下培養(yǎng)。(3)接種前要對培養(yǎng)基進(jìn)行 處理。在整個(gè)微生物的分離和培養(yǎng)中，一定要注意在 條件下進(jìn)行。(4)如圖是

32、采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請分析接種的具體方法。獲得圖A效果的接種方法是 ，獲得圖B效果的接種方法是 。一同學(xué)在純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是 ，應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此種現(xiàn)象？ 。答案(1)海灘等高鹽(2)以淀粉為唯一碳源高溫(3)高壓蒸汽滅菌無菌(4)涂布分離法平板劃線分離法菌液濃度過高增大稀釋倍數(shù)(或培養(yǎng)過程被雜菌污染嚴(yán)格無菌操作；或用接種環(huán)劃下一區(qū)域前接種環(huán)沒有滅菌每劃一個(gè)新區(qū)域前都要對接種環(huán)進(jìn)行滅菌處理)解析(1)篩選菌種應(yīng)從適于目的菌種生長、繁殖的環(huán)境中尋找，故培養(yǎng)噬鹽菌應(yīng)從高鹽環(huán)境中采集。(2)富集培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件應(yīng)能促進(jìn)目的菌的生長、繁殖。(3)微生物的分離及培養(yǎng)中必須保證無菌，包括培養(yǎng)基的滅菌和操作過程的滅菌等。(4)純化培養(yǎng)中接種方法有涂布分離法和平板劃線分離法，前一種方法形成的菌落分布較均勻，后一種方法形成的菌落分布不均勻，先劃線的部分菌落密集甚至相連，后劃線的部分菌落分布稀疏。13.飼養(yǎng)動(dòng)物常用的植物飼料中含有難溶的植酸鈣等物質(zhì)，很難被動(dòng)物吸收利用，并且影響對其他營養(yǎng)物質(zhì)的利用。若在飼料中添加植酸酶，則能催化其水解成為可以被動(dòng)物吸收利