1、,實(shí)驗(yàn)三 植物DNA的提取,實(shí)驗(yàn)原理,真核生物DNA與蛋白質(zhì)結(jié)合，以核蛋白的形式存在于細(xì)胞核內(nèi) 在提取DNA時(shí)，通過研磨破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，釋放出核蛋白,實(shí)驗(yàn)原理,在濃氯化鈉溶液（12 molL）中，DNA核蛋白的溶解度很大，RNA核蛋白的溶解度很小。 在稀氯化鈉溶液（0.14 molL）中，DNA核蛋白的溶解度很小，RNA核蛋白的溶解度很大。 利用不同濃度氯化鈉溶液將DNA核蛋白或RNA核蛋白從樣品中分別抽提出來。,在核蛋白溶液加入氯仿異戊醇，振蕩，使蛋白質(zhì)乳化變性，再離心除去變性蛋白質(zhì)。 用十二烷基硫酸鈉（SDS）等去污劑使蛋白質(zhì)變性，與核酸分離，從材料中提取出DNA。 用苯酚處理，然后離

2、心分層，蛋白變性后則停留在酚層內(nèi)。,實(shí)驗(yàn)原理-去除蛋白質(zhì)的方法, 化學(xué)因素 核酸在pH4.011.0穩(wěn)定， 否則就變性降解。 物理因素 DNA是長鏈線狀分子，強(qiáng)機(jī)械作用會使DNA分子斷裂。 酶的作用 DNA酶會降解DNA分子。,實(shí)驗(yàn)原理-破壞DNA完整結(jié)構(gòu)的因素,1、10mL CTAB分離緩沖液加入50mL 小燒杯中， 在65水浴中預(yù)熱。 2、剪碎小白菜葉片， 2組同學(xué)稱取6g，置于預(yù)冷的研缽中，倒入液氮，盡快將葉片研碎。 3、每組稱約3g葉片粉末，加入預(yù)熱的CTAB分離緩沖液，研 磨混勻，再把混合液裝入50ml離心管，65保溫30分鐘。 4、加10mL氯仿-異戊醇（24：1），輕輕混勻。 室

3、溫，6000 rpm離心8分鐘。,實(shí)驗(yàn)步驟,5、用1ml微量移液器將上層水相吸入另一干凈的50mL 小燒杯中，加入2/3體積的異丙醇，輕輕混勻，使核酸 沉淀下來。 6、用玻璃棒將絲狀DNA攪起，轉(zhuǎn)移至10mL70乙醇中， 浸泡洗滌10分鐘。 7、用玻璃棒取出DNA沉淀，室溫下干燥。 8、將DNA沉淀溶于1.0 mL TE緩沖液中,實(shí)驗(yàn)步驟,試 劑,CTAB分離緩沖液 2% CTAB （十六烷基三甲基溴化銨） 1.4 mol/L NaCl 100 mmol/L Tris-HCl(pH8.0) 異丙醇 氯仿-異戊醇（24：1） 液氮 70%乙醇,CTAB,CTAB（十六烷基三甲基溴化銨） 陽離子去污劑,它不僅能使蛋白質(zhì)變性，還能與 核酸形成特異的核酸CTAB復(fù)合物。 核酸CTAB復(fù)合物可溶于0.7mol/L NaCl的高 鹽緩沖液。,TE 緩沖液,10mmol/L Tris-HCl（pH7.4） 1mmol/L EDTA,思考題,1、本實(shí)驗(yàn)中CTAB、EDTA