1、,臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ),第一章 血液一般檢驗(yàn),皖北衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院 王玲玲,第一節(jié) 血液標(biāo)本采集與處理,一,血液標(biāo)本類型,二,血液標(biāo)本抗凝劑與添加劑,三,血液標(biāo)本采集,四,血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理,1全血 2血漿 主要用于化學(xué)和凝血項(xiàng)目檢測等。 3血清 主要用于化學(xué)和免疫學(xué)等項(xiàng)目檢測。 血清與血漿比較，主要是前者缺乏纖維蛋白原及某些凝血因子。 4血細(xì)胞,靜脈全血 動脈全血 末梢全血,一、血液標(biāo)本類型,靜脈全血 動脈全血 末梢全血,血液標(biāo)本添加劑,抗凝劑,分離膠,促凝劑,二、血液標(biāo)本抗凝劑與添加劑,我是血漿， 還是血清呢？,抗凝：采用物理或化學(xué)的方法 去除或抑制某種凝血因子的活性， 以阻止血液凝固的方法稱為

2、抗凝。 抗凝劑：能夠阻止血液凝固的 化學(xué)物質(zhì)稱為抗凝劑（anticoagulant） 或抗凝物質(zhì)。,（一）抗凝劑,血細(xì)胞,（一）抗凝劑,常 用 抗 凝 劑,（二）添加劑,其 它 常 用 添 加 劑,靜脈采血法,皮膚采血法,動脈采血法,三、血液標(biāo)本采集,（一）皮膚采血法,皮膚采血法，又稱毛細(xì)血管采血法，主要用于需要微量血液檢驗(yàn)項(xiàng)目和嬰幼兒血常規(guī)檢驗(yàn)。,1、采血針皮膚采血法 （1）主要器材： 一次性采血針、 微量吸管、 消毒用品等。,（一）皮膚采血法,（2）采血部位： 一般采用手指指端或耳垂， 嬰幼兒可選擇趾或足跟內(nèi)外側(cè)緣。 世界衛(wèi)生組織（WHO）推薦采血 部位為左手中指或無名指指端內(nèi)側(cè)。 選擇皮

3、膚完好處采血。,（一）皮膚采血法,材料準(zhǔn)備,選擇采血部位,按摩,消毒,針刺,吸血,止血,（一）皮膚采血法,（4）注意事項(xiàng)： 采血時必須注意嚴(yán)格消毒和生物安全防范。 采血針應(yīng)為一次性使用的“專用采血針”，針刺深度以23mm為宜。 取血時可稍加擠壓，但切忌用力過大，以免使過多組織液混入血液中。 采血要迅速，防止流出的血液發(fā)生凝固。 手工法血液標(biāo)本采集順序?yàn)椋?血小板計數(shù)、紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白測定、白細(xì)胞計數(shù)及白細(xì)胞分類計數(shù)、血型鑒定等。 其他，激光皮膚采血法,（二）靜脈采血法,靜脈采血法臨床應(yīng)用廣泛，所采集的靜脈血能準(zhǔn)確反映全身血液的真實(shí)情況，因其不易受氣溫和末梢循環(huán)變化的影響，更具有代表性。,普

4、通采血法 負(fù)壓采血法,1、普通采血法 即傳統(tǒng)的靜脈采血方法 。 （1）主要器材： 注射器、 試管、消毒用品等。,普通采血法 負(fù)壓采血法,（二）靜脈采血法,（2）采血部位： 通常采用肘部靜脈。 當(dāng)肘部靜脈不明顯時，可采用手背部、 手腕部和外踝部靜脈。 幼兒可采用頸外靜脈采血， 其它：股靜脈、大隱靜脈及鎖骨下靜脈等。,肘部靜脈,（二）靜脈采血法,材料準(zhǔn)備,（3）簡要操作,選擇靜脈,扎壓脈帶,消毒,穿刺,抽血,止血,放血與混勻,（二）靜脈采血法,（4）注意事項(xiàng)： 根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目判斷所需采血量，選擇注射器。 嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作。 采血時切忌將針?biāo)ㄍ赝?，以免注射器中的空氣進(jìn)入血循環(huán)形成氣栓。 為避免溶血，

5、注射器和容器必須干燥，抽血時應(yīng)避免產(chǎn)生大量氣泡，抽血完畢后應(yīng)先拔下針頭，然后將血液沿管壁徐徐注入容器，需要抗凝時應(yīng)與抗凝劑輕輕混勻，切忌用力振蕩試管。 進(jìn)行血小板功能試驗(yàn)，為了防止血小板激活，須使用塑料注射器或經(jīng)硅化處理后的玻璃試管或塑料試管。 采血一般取坐位或臥位，不能立位采血，因?yàn)轶w位影響水分在血管內(nèi)外的分布，影響被測血液成分的濃度。 壓脈帶捆扎時間不應(yīng)超過1分鐘，否則會使血液成分濃度發(fā)生改變。,（二）靜脈采血法,2、負(fù)壓采血法 又稱為真空采血法 。 （1）主要器材： 負(fù)壓采血系統(tǒng) 雙向采血針 真空采血管,套管式 一次性采血針,頭皮靜脈式 一次性采血針,（2）采血部位： 同普通采血法。,（

6、二）靜脈采血法,材料準(zhǔn)備,（3）簡要操作,選擇靜脈,扎壓脈帶,消毒,穿刺針端穿刺,混勻或不混勻血液,退出刺塞針端針頭,刺塞針端刺入采血管,止血,退出穿刺針端針頭,（二）靜脈采血法,（4）注意事項(xiàng)： 使用前切勿松動或拔除采血管的膠塞頭蓋。 刺塞針端的乳膠套能防止拔除采血試管后繼續(xù)流血污染周圍環(huán)境，達(dá)到封閉采血防止污染環(huán)境的作用，因此不可取下乳膠套。 采血完畢后，先拔下刺塞針端的采血試管，后拔穿刺針端。 一次采血，使用玻璃采血管多管采集血液標(biāo)本的分配順序?yàn)椋貉囵B(yǎng)管、無抗凝劑血清管、枸櫞酸鈉抗凝管、其他抗凝劑管； 使用塑料采血管分配順序：血培養(yǎng)管（黃色）、枸櫞酸鈉抗凝管（藍(lán)色）、加或未加促凝劑或分

7、離膠的血清管、加或未加分離膠的肝素管（綠色）、EDTA抗凝管（紫色）、加葡萄糖分解抑制劑管（灰色） 。,（三）動脈采血法,1主要器材 ： 2ml或5ml注射器 （準(zhǔn)備l000U/ml無菌肝素生理鹽水溶液， 以濕潤注射器內(nèi)腔、橡皮塞）， 或一次性動脈采血針、消毒用品等。 2采血部位 多選用橈動脈（最方便） 股動脈、肱動脈。 3簡要操作,橈動脈采血,（三）動脈采血法,4. 注意事項(xiàng)： 隔絕空氣：用于血?dú)夥治龅臉?biāo)本，采集后先立即封閉針頭斜面，再混勻標(biāo)本。立即送檢：標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，否則應(yīng)將標(biāo)本置于26保存， 但保存時間不應(yīng)超過2小時。 防止血腫：采血完畢，拔出針頭后，用消毒干棉簽用力按壓采血處止

8、血， 以防形成血腫。,血液標(biāo)本,預(yù)處理與保存,檢驗(yàn)后保存與處理,運(yùn)送,接受與拒收,四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理,生物安全原則,唯一標(biāo)識原則,及時運(yùn)送原則,四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理,抗凝標(biāo)本凝固,（二） 血液標(biāo)本拒收,采集容器不當(dāng),標(biāo)本污染、容器破損,申請單和標(biāo)本標(biāo)識不一致,采血量不足或錯誤,溶血,轉(zhuǎn)運(yùn)條件不當(dāng),抗凝劑使用錯誤,四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理,預(yù)處理： 血常規(guī)檢測：室溫存放 血漿：可通過離心抗凝血獲得血漿； 血清：對未含促凝劑或分離膠采血管的血液標(biāo)本置于37孵育， 待血液完全凝固后離心分離血清； 含促凝劑或分離膠采血管的血液標(biāo)本可直接離心分離血清； 對于需要特定細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)根

9、據(jù)要求采用不同的細(xì)胞分離液 或分離技術(shù)分離細(xì)胞，同時盡量避免混入其他細(xì)胞。,四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理,（三）血液標(biāo)本預(yù)處理與保存,保存： 1分離后標(biāo)本 不能及時檢驗(yàn)或需保留標(biāo)本，一般應(yīng)將標(biāo)本置于4冰箱內(nèi)保存。 標(biāo)本需保存至少1個月時，放置于-20冰箱內(nèi)保存。 標(biāo)本需保存至少3個月時，分離后置于-70冰箱保存。 標(biāo)本存放時需要密封，以免水分揮發(fā)而使標(biāo)本濃縮。 標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。 2立即送檢標(biāo)本 如血氨（密封送檢）、紅細(xì)胞沉降率、血?dú)夥治觯芊馑蜋z）、 酸性磷酸酶、乳酸等標(biāo)本。,四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理,四、血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理,（四）血液標(biāo)本檢驗(yàn)后保存與處理,血液一般分析標(biāo)本：室溫

10、24小時后處理， 一般生化檢驗(yàn)項(xiàng)目：4存放7天后處理， 特殊檢驗(yàn)項(xiàng)目：吸出血清或血漿-20冰箱內(nèi)保存1個月以上。 保存檢驗(yàn)標(biāo)本時應(yīng)包括標(biāo)本信息的保存， 且與分離的血漿或血清標(biāo)本相對應(yīng)。 保存原則是在有效的保存期內(nèi)確保被檢測物質(zhì)不會發(fā)生明顯改變。,檢驗(yàn)后廢棄的血液標(biāo)本處理嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求（GB19489-2004），由專人負(fù)責(zé)處理，根據(jù)醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例規(guī)定使用專用的容器或袋子包裝，由專人送到指定的地點(diǎn)集中處理。 檢驗(yàn)后廢棄的血液標(biāo)本一般由專門機(jī)構(gòu)采用焚燒的辦法處理。,處 理,保 存,（一）檢驗(yàn)申請,（二）患者準(zhǔn)備,五、血液標(biāo)本采集、運(yùn)送與保存質(zhì)量保證,（三）標(biāo)本采集,（四）

11、標(biāo)本運(yùn)送,第二節(jié) 血涂片的制備與染色,一,血涂片制備,二,血涂片染色,第二節(jié) 血涂片的制備與染色,推片,載玻片,血液,將推片勻速向前，勿停頓。涂片的厚薄取決于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（?。?一張滿意的血涂片應(yīng)厚薄均勻 頭 體 尾鮮明,涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭 部寫上姓名和編號,李四,B 1 2 3,第二節(jié) 血涂片的制備與染色,良好血液涂片標(biāo)準(zhǔn) 厚薄要適宜， 頭體尾要明顯， 細(xì)胞分布要均勻， 血膜邊緣要整齊， 并留有一定的空隙。,引起血涂片分布不均的主要原因： 推片邊緣不整齊 用力不均勻 載片不清潔,第二節(jié) 血涂片的制備與染色,二、血涂片染色 (一)瑞氏染色法 (Wrights st

12、ain ) 1.瑞氏染料（復(fù)合染料） 酸性染料伊紅 (E-) 堿性染料亞甲藍(lán) (M+，又名美藍(lán)) 美藍(lán)容易氧化為一、二、三甲基硫堇等次級染料 (即天青) ， 甲醇的作用： 溶解美藍(lán)和伊紅，解離為 M+和E- ； 脫水作用，固定細(xì)胞形態(tài)，增強(qiáng)染色效果,第二節(jié) 血涂片的制備與染色,第二節(jié) 血涂片的制備與染色,2 染色原理 是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程。 物理的吸附作用 化學(xué)的親和作用 嗜酸性顆粒堿性與酸性染料粉紅色； 細(xì)胞核蛋白酸性與堿性染料紫藍(lán)色或藍(lán)色； 中性顆粒等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)染淡紫紅色。,第二節(jié) 血涂片的制備與染色,勿沖洗再加瑞氏染色液5-8滴后將液和液充分混勻靜置10分鐘,直

13、接流水沖洗3-5分鐘 （切勿先倒掉染液）,涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡 分類計數(shù)100個白細(xì)胞,李四123,涂片干燥后加瑞氏染色液5-8滴覆蓋整個血膜1分鐘,3.pH值的影響 細(xì)胞各種成分均屬蛋白質(zhì)（兩性電解質(zhì)）,第二節(jié) 血涂片的制備與染色,第二節(jié) 血涂片的制備與染色,染色所用玻片必須清潔，無酸堿污染。 配制瑞氏染液必須用優(yōu)質(zhì)甲醇。 稀釋染液必須用緩沖液。 沖洗用水應(yīng)近中性。 新鮮配制的染料偏堿，須在室溫貯存一定時間，貯存時間愈久，染色效果愈好。 DeamGilliland 等采用吸光度比值 作為瑞氏染液的質(zhì)量規(guī)格。,第三節(jié) 白細(xì)胞顯微鏡檢查,一,白細(xì)胞計數(shù),二,白細(xì)胞分類計數(shù),三,白細(xì)胞形態(tài)檢查,

14、四,嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù),五,紅斑狼瘡細(xì)胞檢查,血液,血漿,血細(xì)胞,紅細(xì)胞,白細(xì)胞,血小板,第三節(jié) 白細(xì)胞顯微鏡檢查,白細(xì)胞計數(shù)（white blood cell count）是指測定單位體積外周血中 各種白細(xì)胞的總數(shù)。 白細(xì)胞計數(shù)結(jié)果僅反映循環(huán)池中的細(xì)胞數(shù)量。,一、白細(xì)胞計數(shù),1原理 白細(xì)胞顯微鏡計數(shù)法是將全血用稀酸溶液稀釋一定倍數(shù)，使紅細(xì)胞破壞后， 充入改良牛鮑（Neubauer）計數(shù)板內(nèi)，在普通光學(xué)顯微鏡下計數(shù)一定范圍 內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。 2白細(xì)胞稀釋液 冰乙酸 破壞紅細(xì)胞，且使白細(xì)胞核固定清晰 亞甲藍(lán)或結(jié)晶紫 使白細(xì)胞核略著色，便于識別 蒸餾水,（一）方法,3

15、器材,（1）改良牛鮑計數(shù)板 （2）改良牛鮑計數(shù)板專用蓋玻片（血蓋片） （3）微量吸管 （4）顯微鏡,一、白細(xì)胞計數(shù),Neubauer計數(shù)盤（牛鮑氏計數(shù)盤）,蓋玻片,液面高度為 0.1 mm,一、白細(xì)胞計數(shù),大方格 中方格 小方格,每個大方格體積=1X1x0.1=0.1mm3= 0.1 L,0.38ml稀釋液 混勻 20ul血液 充池、靜置 鏡下計數(shù)、計算,一、白細(xì)胞計數(shù),計數(shù)：用低倍鏡計數(shù)四個大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)（N）。 計算：WBC/L=N/4 10 106 20 =N/20 X 109/L,0.1L 1L 1L,稀釋倍數(shù),一、白細(xì)胞計數(shù),1采血時間的影響 2計數(shù)誤差 （1）技術(shù)誤差（tech

16、nical errors） 器材誤差 采血與取血不當(dāng) 稀釋倍數(shù)不準(zhǔn) 充池不當(dāng) 白細(xì)胞計數(shù)不準(zhǔn)確 （2）固有誤差（inherent errors） 又叫計數(shù)域誤差 有核紅細(xì)胞的影響校正公式：,（二）質(zhì)量保證,x：校正前白細(xì)胞數(shù) y：在白細(xì)胞分類計數(shù)時，計數(shù)100個 白細(xì)胞的同時計數(shù)到的有核紅細(xì)胞數(shù)。,一、白細(xì)胞計數(shù),例：校正前白細(xì)胞數(shù)為12109/L，在作白細(xì)胞分類計數(shù)時計數(shù)100個白細(xì)胞的同時數(shù)得的有核紅細(xì)胞數(shù)為40個，則 校正后白細(xì)胞數(shù)L = 12109/L = 8.6109/L,例：校正前白細(xì)胞數(shù)為12109/L，在作白細(xì)胞分類計數(shù)時計數(shù)100個白細(xì)胞的同時數(shù)得的有核紅細(xì)胞數(shù)為40個，則

17、校正后白細(xì)胞數(shù)L = 12109/L = 8.6109/L,一、白細(xì)胞計數(shù),4經(jīng)驗(yàn)控制 以血涂片中所見白細(xì)胞的多少粗略核對白細(xì)胞計數(shù)結(jié)果有無大的誤差。 表 血涂片白細(xì)胞密度與白細(xì)胞總數(shù)的關(guān)系,一、白細(xì)胞計數(shù),（三）方法學(xué)評價 白細(xì)胞計數(shù)的方法學(xué)評價,一、白細(xì)胞計數(shù),白細(xì)胞總數(shù) 高于參考區(qū)間的上限稱白細(xì)胞增多， 低于參考區(qū)間的下限稱白細(xì)胞減少。 白細(xì)胞總數(shù)增多或減少主要受中性粒細(xì)胞數(shù)量的影響， 其臨床意義見白細(xì)胞分類計數(shù)。,（五）臨床意義,（四）參考區(qū)間,成人：（3.59.5）109/L； 兒童：（512）109/L； 6個月2歲：（1112）109/L； 新生兒：（1520）109/L,一、白

18、細(xì)胞計數(shù),二、白細(xì)胞分類計數(shù),對各種白細(xì)胞分別計數(shù)， 即白細(xì)胞分類計數(shù) （differential count，DC）。 白細(xì)胞分類計數(shù)的方法有 顯微鏡分類計數(shù)法 血細(xì)胞分析儀分類計數(shù)法,（一）方法 顯微鏡分類計數(shù)主要是將染色好的 血涂片在油鏡下根據(jù)白細(xì)胞形態(tài)學(xué) 特征逐個分別計數(shù)（一般計數(shù) 100200個白細(xì)胞），得出各種 白細(xì)胞的相對比值或百分率， 并注意觀察其形態(tài)的變化。,1簡要操作,二、白細(xì)胞分類計數(shù),最佳觀察部位： 體 尾 交 界 處,頭,體,尾,體尾交界,2報告方式 （1）白細(xì)胞分類計數(shù)結(jié)果：以各種白細(xì)胞所占的比值或百分率表示， 或者根據(jù)白細(xì)胞總數(shù)計算出各種白細(xì)胞的絕對值報告。 （2

19、）幼稚或異常白細(xì)胞：發(fā)現(xiàn)幼稚或異常白細(xì)胞，應(yīng)計算在白細(xì)胞 分類比值或百分率中。 （3）有核紅細(xì)胞：血涂片中如見到有核紅細(xì)胞，應(yīng)逐個計數(shù)，但 不列入白細(xì)胞總數(shù)之內(nèi)，而是報告分類計數(shù)100個白細(xì)胞的同時 見到的有核紅細(xì)胞個數(shù)。 （4）寄生蟲：如發(fā)現(xiàn)瘧原蟲等應(yīng)報告。 （5）紅細(xì)胞、血小板的形態(tài)：如有異常改變應(yīng)報告。,二、白細(xì)胞分類計數(shù),（二）方法學(xué)評價 白細(xì)胞分類計數(shù)方法學(xué)評價,二、白細(xì)胞分類計數(shù),（三）參考區(qū)間 白細(xì)胞分類計數(shù)參考區(qū)間（成人）,注：本參考區(qū)間適用于靜脈血的儀器檢測方法。 此參考區(qū)間來源于中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 405-2012。,二、白細(xì)胞分類計數(shù),（四）臨床意義,二者

20、的臨床意義基本一致。 （1）中性粒細(xì)胞生理性增多： 一天之內(nèi)一般下午較上午高。 劇烈運(yùn)動、情緒激動、嚴(yán)寒、暴熱。 新生兒。 妊娠5個月以上及分娩時。 以上常為一過性增多 吸煙者平均白細(xì)胞總數(shù)比不吸煙者高。,1. 白細(xì)胞總數(shù)與中性粒細(xì)胞,二、白細(xì)胞分類計數(shù),中性粒細(xì)胞 病理性增高,嚴(yán)重的組織損傷 大量血細(xì)胞破壞,急性感染,急性大出血,惡性腫瘤,急性中毒,白血病,（2）中性粒細(xì)胞病理性增高,二、白細(xì)胞分類計數(shù),中性粒細(xì)胞 病理性減少,某些血液?。?如再生障礙性貧血,某些感染： 傷寒、副傷寒沙門菌,慢性理化損傷,自身免疫性疾?。?如系統(tǒng)性紅斑狼瘡,脾功能亢進(jìn),（3）中性粒細(xì)胞病理性減少,二、白細(xì)胞分

21、類計數(shù),1生理變化 白天較低，夜間較高，上午波動大，下午較恒定。 2病理變化 （1）嗜酸性粒細(xì)胞增多： 超敏反應(yīng)性疾?。喝缰夤芟?、蕁麻疹、過敏等。 寄生蟲?。喝缁紫x、鉤蟲等。 某些皮膚?。喝玢y屑病、濕疹等。 某些血液?。喝缏粤＜?xì)胞白血病。 某些惡性腫瘤，如霍奇金病。 某些傳染?。喝缧杉t熱。 某些內(nèi)分泌疾病，如腦垂體功能低下。,2. 嗜酸性粒細(xì)胞,二、白細(xì)胞分類計數(shù),2.病理變化 （2）嗜酸性粒細(xì)胞減少： 傷寒、副傷寒、大手術(shù)后。 長期使用腎上腺皮質(zhì)激素。 3嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)的其它應(yīng)用 （1）觀察急性傳染病的預(yù)后。 （2）觀察大手術(shù)和燒傷病人的預(yù)后。 （3）腎上腺皮質(zhì)功能測定。,2. 嗜酸

22、性粒細(xì)胞,二、白細(xì)胞分類計數(shù),（1）嗜堿性粒細(xì)胞增多 慢性粒細(xì)胞性白血?。?常伴嗜堿性粒細(xì)胞增多，可達(dá)10%或更多。 嗜堿性粒細(xì)胞性白血?。?嗜堿性粒細(xì)胞異常增多，可達(dá)20%以上， 多為幼稚型。 過敏性疾?。簼冃越Y(jié)腸炎、超敏反應(yīng)等。 骨髓纖維化和某些轉(zhuǎn)移癌。 （2）嗜堿性粒細(xì)胞減少 多無臨床意義。,3. 嗜堿性粒細(xì)胞,二、白細(xì)胞分類計數(shù),（1）淋巴細(xì)胞病理性增多 絕對增多：某些病毒或細(xì)菌所致的傳染病，如風(fēng)疹、流行性腮腺炎、傳單等； 某些慢性感染，如結(jié)核病恢復(fù)期也可見淋巴細(xì)胞增多，但白細(xì)胞總數(shù)多正常； 急、慢性淋巴細(xì)胞性白血病淋巴細(xì)胞增多明顯，且可導(dǎo)致白細(xì)胞總數(shù)增高。 相對增多：再生障礙性貧血

23、、粒細(xì)胞缺乏癥等淋巴細(xì)胞百分率相對增高。 （2）淋巴細(xì)胞減少 主要見于長期接觸放射線或應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素之后， 在急性化膿性感染時由于中性粒細(xì)胞明顯增高可導(dǎo)致淋巴細(xì)胞相對減少。,4淋巴細(xì)胞,二、白細(xì)胞分類計數(shù),（1）單核細(xì)胞增多 正常兒童單核細(xì)胞較成人稍高 病理性增多見于： 某些感染：如亞急性感染性心內(nèi)膜炎、瘧疾、黑熱病、急性感染的恢復(fù)期、 活動性肺結(jié)核等。 某些血液?。簡魏思?xì)胞性白血病、粒缺恢復(fù)期、惡性組織細(xì)胞病、淋巴瘤 及骨髓增生異常綜合征（MDS）等。 （2）單核細(xì)胞減少 意義不大。,5單核細(xì)胞,二、白細(xì)胞分類計數(shù),胞體：1015m，圓形。 胞核：分25葉，以3葉核為主。 核染色質(zhì)：粗糙

24、，深紫紅色。 胞漿：粉紅色，顆粒量多、細(xì)小、 均勻、紫紅色 。,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 （一）外周血正常白細(xì)胞形態(tài),1.中性分葉核粒細(xì)胞,胞體：1015m，圓形。 胞核：彎曲呈桿狀、帶狀、臘腸樣。 核染色質(zhì)：粗糙，深紫紅色。 胞漿：粉紅色，顆粒量多、細(xì)小、 均勻、紫紅色 。,2.中性桿狀核粒細(xì)胞,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 （一）外周血正常白細(xì)胞形態(tài),三、白細(xì)胞形態(tài)檢查（一）外周血正常白細(xì)胞形態(tài),中性粒細(xì)胞,(1)胞體：1315m，圓形。 (2)胞核：多分為兩葉。 (3)核染色質(zhì)：粗糙，深紫紅色。 (4)胞漿：著色不清，橘黃色顆粒、粗大、整齊排列、均勻充滿胞質(zhì)。,3. 嗜酸性粒細(xì)胞,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,中

25、性粒細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,(1)胞體：1012m，圓形。 (2)胞核：因顆粒遮蓋而胞核不清晰。 (3)核染色質(zhì)：粗糙，深紫紅色。 (4)胞漿：著色不清，紫黑色顆粒、量少、大小不均、排列雜亂、可蓋于核上 。,4. 嗜堿性粒細(xì)胞,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,胞體：615m，圓形或橢圓形 。 胞核：圓形、橢圓形、腎形 。 核染色質(zhì)：深紫紅色，粗糙成塊，核外緣光滑。 胞漿：透明、淡藍(lán)色、多無顆粒，大淋巴細(xì)胞可有少量粗大、不均勻紫紅色顆粒。,5. 淋巴細(xì)胞,大淋巴細(xì)胞,小淋巴細(xì)胞,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,都是什么細(xì)胞？,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,6. 單核細(xì)胞,胞體：1220m，圓形、橢圓形或不規(guī)則形。

26、 胞核：腎形、山字形、馬蹄形、扭曲折疊不規(guī)則形 。 核染色質(zhì)：疏松網(wǎng)狀，淡紫紅色，有膨脹和立體起伏感 。 胞漿：半透明、灰藍(lán)色或灰紅色。顆粒細(xì)小、塵土樣紫紅色。,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查 （二）外周血異常白細(xì)胞形態(tài),1. 中性粒細(xì)胞的毒性變化 在嚴(yán)重傳染病、各種化膿性感染、敗血癥、惡性腫瘤、中毒、 大面積燒傷等病理情況下，中性粒細(xì)胞可發(fā)生下列形態(tài)改變,大小不均,中毒顆粒,空泡,杜勒體,核變性,即中性粒細(xì)胞體積大小懸殊。 可能是在內(nèi)毒素等因素作用下 骨髓內(nèi)幼稚中性粒細(xì)胞發(fā)生 不規(guī)則分裂的結(jié)果。 常見于一些病程較長的化膿性感染。,（1）大小不均,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中出

27、現(xiàn)的粗大、大小不等、分布 不均勻的紫黑色或深紫褐色顆粒，稱中毒顆粒。 可能因特殊顆粒生成受阻或發(fā)生顆粒變性所致。 常見于嚴(yán)重化膿性感染及大面積燒傷等。,（2）中毒顆粒,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,中性粒細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)一個或數(shù)個空泡。一般認(rèn)為空泡是細(xì)胞受損后胞質(zhì)發(fā)生脂肪變性或顆粒缺失的結(jié)果。 最常見于嚴(yán)重感染，特別是敗血癥時。,（3）空泡變性,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,是中性粒細(xì)胞胞質(zhì)毒性變化而保留的局部嗜堿性區(qū)域。 呈圓形、梨形或云霧狀，天藍(lán)色或灰藍(lán)色，直徑12m， 是胞質(zhì)局部不成熟的表現(xiàn)。,（4）杜勒體,杜勒體,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,（5）核變性,常見于細(xì)胞衰老后，嚴(yán)重感染時該類細(xì)胞增多。,三、白細(xì)胞形態(tài)檢

28、查,2. 中性粒細(xì)胞的核象變化 中性粒細(xì)胞的核形標(biāo)志著它的發(fā)育階段。正常以23葉為主。 病理情況下，中性粒細(xì)胞的核象可發(fā)生變化，即出現(xiàn)核左移或核右移。,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,外周血中桿狀核粒細(xì)胞增多并出現(xiàn)晚幼粒、 中幼粒甚至早幼粒細(xì)胞時稱為核左移. 核左移常伴中毒顆粒、空泡、核變性等毒性變化。 最常見于急性化膿性感染，急性中毒、急性溶血。 再生性核左移 伴白細(xì)胞增高 退行性核左移 白細(xì)胞總數(shù)不增高或減低 輕度核左移：僅見桿狀核粒細(xì)胞6%。 中度核左移：桿狀核粒細(xì)胞10%并有少數(shù)晚幼粒、中幼粒細(xì)胞。 重度核左移（類白血病反應(yīng)）：桿狀核粒細(xì)胞25%， 出現(xiàn)更幼稚的粒細(xì)胞,（1）核左移,三、白細(xì)胞形態(tài)

29、檢查,（2）核右移,外周血中5葉核及5葉核以上的中性粒細(xì)胞3%時稱為核右移。 核右移常伴有白細(xì)胞總數(shù)的減少，屬造血功能衰退的表現(xiàn)。 主要見于營養(yǎng)性巨幼細(xì)胞性貧血及惡性貧血、炎癥的恢復(fù)期。 如疾病進(jìn)展期突然出現(xiàn)核右移則是預(yù)后不良的表現(xiàn)。,巨多分葉核中性粒細(xì)胞,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,在病毒或過敏原等因素刺激下， 外周血淋巴細(xì)胞增生并發(fā)生形態(tài)上的改變，稱異型淋巴細(xì)胞。,3淋巴細(xì)胞的形態(tài)異常,型 （空泡型）,型 （不規(guī)則型）,型 （幼稚型）,（1）異型淋巴細(xì)胞,正常人血片中可偶見此種細(xì)胞。一般病毒感染異型淋巴細(xì)胞5%， 而傳染性單核細(xì)胞增多癥時異型淋巴細(xì)胞常10%。,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,即在淋巴細(xì)胞的主

30、核旁邊另有一個游離的小核。 常見于接受較大劑量的電離輻射之后或其他理化因子、抗癌藥物 等對細(xì)胞造成損傷時，常作為致畸、致突變的客觀指標(biāo)之一。,（2）衛(wèi)星核淋巴細(xì)胞,衛(wèi)星核,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,4其他異常白細(xì)胞,Pelger-Het畸形,棒狀小體,Chediak-Higashi畸形,三、白細(xì)胞形態(tài)檢查,四、嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù),顯微鏡計數(shù) 原理 用適當(dāng)?shù)南♂屢簩⒀合♂?一定倍數(shù)，破壞大部分紅細(xì)胞和其它 白細(xì)胞，并使嗜酸性粒細(xì)胞染色， 混勻后充入計數(shù)池內(nèi)，計數(shù)一定體積內(nèi) 嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，即可算出每升血液中 嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量。,簡要操作 加稀釋液0.38ml采血 取血20l，混勻稀釋 充上、下兩個計

31、數(shù)池 靜置低倍鏡下計數(shù) 四角和中央共10個大方格 內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞 計算。,五、紅斑狼瘡細(xì)胞檢查 （一）方法,系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE） 是一種原因不明，累及多個系統(tǒng)和器官的自身免疫性疾病。 90的病例為女性，尤其是育齡期婦女。,1原理 系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的血清中，存在一種紅斑狼瘡因子（LE因子）。 它屬于一種IgG型自身抗體（抗核抗體），在體外可使白細(xì)胞退化，導(dǎo)致細(xì)胞 核染色質(zhì)失去正常結(jié)構(gòu)，變成游離腫脹的圓形或橢圓形煙霧狀的均勻性物質(zhì)， 稱為“游離均勻體”；均勻體可吸引吞噬細(xì)胞（常為中性粒細(xì)胞）在其周圍形成 “花形細(xì)胞簇”；最后被其中一個吞噬細(xì)胞吞噬形成LE細(xì)胞。,2簡要操作,采集靜脈血3ml

32、，待其凝固,攪碎血凝塊，去除殘余凝塊,離心，使白細(xì)胞聚集在同一層面,孵育，去除白細(xì)胞層，離心,涂片、瑞-吉染色,油鏡下找LE細(xì)胞,LE細(xì)胞,五、紅斑狼瘡細(xì)胞檢查,（二）參考區(qū)間 陰性。 （三）臨床意義 系統(tǒng)性紅斑狼瘡病人，在疾病的活動期，LE細(xì)胞陽性率一般為70%90%， 緩解期或激素治療后不易找到。 除系統(tǒng)性紅斑狼瘡?fù)?，其它的自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、硬皮病、 活動性肝炎等亦可呈陽性反應(yīng)。 發(fā)現(xiàn)LE細(xì)胞，必須結(jié)合臨床表現(xiàn)； 未找到LE細(xì)胞，并不能完全否定紅斑性狼瘡的診斷，應(yīng)進(jìn)一步作其它有關(guān) 的免疫學(xué)指標(biāo)檢查。,五、紅斑狼瘡細(xì)胞檢查,第四節(jié) 紅細(xì)胞檢查,一,紅細(xì)胞計數(shù),二,血紅蛋白測定

33、,三,紅細(xì)胞形態(tài)檢查,四,血細(xì)胞比容測定,五,紅細(xì)胞平均值,六,網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),七,嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計數(shù),八,紅細(xì)胞沉降率測定,主要內(nèi)容,概述,紅細(xì)胞的發(fā)育過程,造血干細(xì)胞,紅系祖細(xì)胞,原始紅細(xì)胞,早幼紅細(xì)胞,中幼紅細(xì)胞,晚幼紅細(xì)胞,網(wǎng)織紅細(xì)胞,成熟紅細(xì)胞,網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟48小時，紅細(xì)胞存活月120天,第四節(jié) 紅細(xì)胞檢查,紅細(xì)胞計數(shù)（red blood cell count，RBC）即測定單位體積外周血液中紅細(xì)胞的數(shù)量，是診斷貧血等疾病最常用的檢查項(xiàng)目之一。 臨床可通過各項(xiàng)紅細(xì)胞參數(shù)檢驗(yàn)和紅細(xì)胞的形態(tài)觀察對貧血和某些疾病進(jìn)行診斷和鑒別診斷。,一、紅細(xì)胞計數(shù),（一）顯微鏡計數(shù)法,（1）Hayem

34、稀釋液：由NaCl、Na2SO4、HgCl2和蒸餾水組成。其中NaCl和Na2SO4調(diào)節(jié)滲透壓，后者還可提高比重防止細(xì)胞粘連，HgCl2為防腐劑。該稀釋液的主要缺點(diǎn)是遇高球蛋白血癥患者，由于蛋白質(zhì)沉淀而使紅細(xì)胞易凝集。 （2）枸櫞酸鈉甲醛鹽水稀釋液：由NaCl、枸櫞酸鈉、甲醛及蒸餾水組成。其中NaCl和枸櫞酸鈉調(diào)節(jié)滲透壓，后者還有抗凝作用，甲醛為防腐劑。該稀釋液配制簡單，可使紅細(xì)胞在稀釋后較長時間形態(tài)不發(fā)生改變并且不凝集，故應(yīng)用較廣。 （3）生理鹽水或1%甲醛生理鹽水：急診時如無紅細(xì)胞稀釋液可用此液代替。,1、試劑,一、紅細(xì)胞計數(shù),一、紅細(xì)胞計數(shù),用紅細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)后，充入改良牛

35、鮑計數(shù)板中，在顯微鏡下計數(shù)一定容積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量。,取稀釋液2.0ml加入全血10l，混勻充池靜置高倍鏡計數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中5個中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)計算。,2原理,3簡要操作,（二）質(zhì)量保證,一、紅細(xì)胞計數(shù),1紅細(xì)胞在室溫和48可穩(wěn)定3天，37可穩(wěn)定36小時，以后逐漸減少。 2血液加入稀釋液后和充池前需充分混勻；計數(shù)時光線不能太強(qiáng)。 3當(dāng)白細(xì)胞100109/L 時，可對紅細(xì)胞計數(shù)結(jié)果產(chǎn)生影響。處理方法是將計數(shù)所得的紅細(xì)胞數(shù)減去計數(shù)所得的白細(xì)胞數(shù)；或者在高倍鏡下注意識別，計數(shù)時勿將白細(xì)胞計入。在高倍鏡下，白細(xì)胞體積通常比紅細(xì)胞體積略大，中央無凹陷，細(xì)胞核隱約可

36、見，無黃綠色折光。 4.技術(shù)誤差和固有誤差見白細(xì)胞計數(shù)。,（三）方法學(xué)評價,一、紅細(xì)胞計數(shù),紅細(xì)胞計數(shù)的方法學(xué)評價,（四）參考區(qū)間,1成年：男性（4.35.8）1012/L，女性（3.85.1）1012/L；新生兒：（6.07.0）1012/L。 2紅細(xì)胞計數(shù)醫(yī)學(xué)決定水平 高于6.81012/L，應(yīng)采取相應(yīng)的治療措施；低于3.51012/L，可診斷為貧血；低于1.51012/L，可考慮輸血。 （五）臨床意義 見血紅蛋白測定。,一、紅細(xì)胞計數(shù),血紅蛋白的分子結(jié)構(gòu),二、血紅蛋白測定,卟啉環(huán)包著一個亞鐵離子組成一個亞鐵血紅素，每條多肽鏈含一個亞鐵血紅素，每個血紅蛋白分子有四個珠蛋白肽鏈,血紅蛋白（h

37、emoglobin，Hb或HGB）是紅細(xì)胞的主要成分，由珠蛋白和亞鐵血紅素組成，每個Hb分子有4條珠蛋白肽鏈，分子量為64 458。,二、血紅蛋白測定,Hb有多種形式及衍生物,HbO2 Hbred,Hb MHb（Hi）,HbCO SHb,二、血紅蛋白測定,正常人Hb種類及含量,二、血紅蛋白測定,1.原理,（一）HiCN測定法,RBC Hb Hi HiCN OD值 Hb（g/L）=KA,=540nm,溶血,氧化,結(jié)合,計算,直接計算結(jié)果,此處K值為理論值，在實(shí)際應(yīng)用中更多采用標(biāo)準(zhǔn)品參照，測定未知樣品血紅蛋白濃度,（一）HiCN測定法,HiCN法測定血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線求得樣品Hb濃度,

38、？ A:0.332，Hb=？,（二）其他測定方法,十二烷基硫酸鈉法（sodium dodecyl sulfate hemoglobin，SDS-Hb） 堿羥血紅蛋白法（alkaline haematin detergent，AHD575） 疊氮高鐵血紅蛋白法（HiN3） 溴代十六烷基三甲胺法（cetyltrimethyl ammonynm bromide，CTAB） 目前，自動血液分析儀已多使用不含氰化鉀的血紅蛋白測定方法,（三）質(zhì)量保證,1合格的標(biāo)本 2主要器材 分光光度計的波長、光柵、比色杯 3HiCN轉(zhuǎn)化液 的質(zhì)量要求 4HiCN參考液定標(biāo) 5開展室內(nèi)質(zhì)控,（四）方法學(xué)評價,血紅蛋白測定

39、方法學(xué)評價,成年男性：130175g/L成年女性：115150g/L新 生 兒：170200g/L。,（五）參考區(qū)間,（六）臨床意義,30 60 90 110 120 Hb（g/L）,女性 男性,貧血的程度與臨床表現(xiàn)并不一定一致,RBC+Hb的變化,（六）臨床意義,三、紅細(xì)胞形態(tài)檢查,大小異常,紅細(xì)胞 異常形態(tài),染色異常,結(jié)構(gòu)異常,形態(tài)異常,正常形態(tài)紅細(xì)胞,三、紅細(xì)胞形態(tài)檢查,（一）正常紅細(xì)胞形態(tài),正常的紅細(xì)胞呈雙凹圓盤形，細(xì)胞大小均一，平均直徑約7.2m，瑞氏染色后為淡粉紅色，血紅蛋白充盈良好，呈正常色素性、向心性淺染，中央有生理性淡染區(qū)胞質(zhì)內(nèi)無異常結(jié)構(gòu)。除健康人外，部分再生障礙性貧血、急性

40、失血性貧血和白血病等患者的紅細(xì)胞亦呈正常形態(tài)。,1.大小異常,大紅細(xì)胞,大小不等,小紅細(xì)胞,巨紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),直徑小于6m,直徑大于10m,直徑大于15m,指同一血涂片中 紅細(xì)胞大小懸殊， 直徑相差在1倍 以上,小紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),大紅細(xì)胞和巨紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),紅細(xì)胞大小不等,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),2.形態(tài)異常,橢圓形紅細(xì)胞,靶形紅細(xì)胞,球形紅細(xì)胞,口形紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),棘形紅細(xì)胞,緡錢狀排列,裂片紅細(xì)胞,紅細(xì)胞形態(tài)不整,鐮刀形紅細(xì)胞,淚滴形紅細(xì)胞,球形紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),口形紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),橢圓形紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)

41、胞形態(tài),靶形紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),鐮刀形紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),裂片紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),棘形紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),紅細(xì)胞形態(tài)不整,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),淚滴形紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),緡錢狀紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),高色素性紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),低色素性紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),嗜多色性紅細(xì)胞,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),4結(jié)構(gòu)異常,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),染色質(zhì)小體,染色質(zhì)小體（Howell-Jolly body）：又稱豪-焦小體，位于成熟或幼稚紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的紫紅色小體，直徑12m，1至數(shù)個不等，為核碎裂或溶解后的殘余物。 最

42、常見于巨幼細(xì)胞性貧血，也見于溶血性貧血及脾切除術(shù)后。,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),卡波氏環(huán),卡-波環(huán)（Cabot ring）：存在于成熟或幼稚紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，呈紫紅色線圈狀或“8”字形結(jié)構(gòu)，可能是紡錘體的殘余物或脂蛋白變性所致。 常與染色質(zhì)小體并存，見于溶貧、巨幼貧、白血病及鉛中毒等。,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞,嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞（basophilic stippling cell）：指在瑞氏染色涂片中，紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)大小不一、數(shù)量不等的灰藍(lán)色點(diǎn)狀物。 在鉛、鉍、鋅、汞等重金屬中毒時增多，為鉛中毒診斷的篩查指標(biāo)。重癥巨幼細(xì)胞性貧血和骨髓纖維化等亦可見增多。,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),有核

43、紅細(xì)胞,有核紅細(xì)胞（nucleated erythrocyte，NRBC）：即幼稚紅細(xì)胞。存在于骨髓中，1周內(nèi)新生兒外周血涂片可見少量，成人外周血中出現(xiàn)有核紅細(xì)胞屬病理現(xiàn)象，常見于各種溶血性貧血、白血病、紅白血病等。,（二）異常紅細(xì)胞形態(tài),都來認(rèn)一認(rèn)，分別屬于哪一種？,血細(xì)胞比容的概述（概念） 血細(xì)胞比容測定方法 血細(xì)胞比容質(zhì)量控制 血細(xì)胞比容方法學(xué)評價 血細(xì)胞比容參考區(qū)間 血細(xì)胞比容臨床意義,四、血細(xì)胞比容測定,內(nèi)容,血細(xì)胞比容概念,血細(xì)胞比容（hemotocrit，HCT；packed cell volume，PCV），是指一定體積（1L）的全血中（抗凝血）紅細(xì)胞所占容積的相對比例（小數(shù)或

44、百分?jǐn)?shù)） HCT的高低主要與紅細(xì)胞數(shù)量、大小有關(guān)，主要用于貧血和紅細(xì)胞增多的診斷，反應(yīng)血液稀釋和血液濃縮變化 還可根據(jù)RBC、Hb、Hct計算紅細(xì)胞平均值 HCT測定可采用直接離心法（包括溫氏法和微量法），或間接血液分析儀法,四、血細(xì)胞比容測定,溫氏法 微量法 折射儀法 黏度法 比重測定法 放射性核素法等,四、血細(xì)胞比容測定,血細(xì)胞比容測定方法,其中微量法為推薦方法，放射性核素法為參考方法,（一）溫氏法,1原理 溫氏（Wintrobe）法是利用血液中不同的有形成分比重的差異，將定量的抗凝血以一定的速度和時間離心后，血液中有形成分沉淀，讀取壓實(shí)紅細(xì)胞層在全血中所占體積的百分比,四、血細(xì)胞比容測定

45、,1.Wintrobe管 2.paustrue管,（一）溫氏法,2簡要操作 抗凝血注入Wintrobe管以2264g離心力離心30分鐘讀數(shù)再離心10分鐘判讀結(jié)果,四、血細(xì)胞比容測定,（二）微量法,微量法是采用一次性使用的毛細(xì)玻璃管將抗凝靜脈血注入其中，或先將毛細(xì)玻璃管肝素化并干燥后直接采集毛細(xì)血管血，然后以相對離心力12500g離心5分鐘，取出毛細(xì)玻璃管，測量其中紅細(xì)胞柱、全細(xì)胞柱和血漿柱的長度，判讀結(jié)果,四、血細(xì)胞比容測定,（三）質(zhì)量保證,1抗凝劑 目前多選用肝素或EDTA-K2用于HCT測定，對紅細(xì)胞影響小 2選用合格的器材 溫氏管、微量管、高速離心機(jī)等 3離心 RCF直接影響到HCT，I

46、CSH建議溫氏法RCF 2264g。RCF與RPM可相互轉(zhuǎn)換 4規(guī)范化操作，避免操作誤差 5結(jié)果判讀與分析 離心后血漿與血細(xì)胞的分界面應(yīng)為平面，目光平視，讀數(shù)時讀取自還原紅細(xì)胞層以下的紅細(xì)胞的高度,四、血細(xì)胞比容測定,（四）方法學(xué)評價,四、血細(xì)胞比容測定,HCT測定的方法學(xué)評價,（五）參考區(qū)間,四、血細(xì)胞比容測定,（六）臨床意義,1增高 ：各種原因引起的血液濃縮；原發(fā)性或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥；新生兒。 2降低 ：各種原因引起的血液稀釋；各種原因引起的貧血 3臨床補(bǔ)液量的參考 各種原因?qū)е旅撍畷r，HCT都會增高 4真性紅細(xì)胞增多癥診斷指標(biāo) 當(dāng)HCT大于0.7，RBC為（710）109/L，Hb大于

47、180g/L，即可診斷 5計算紅細(xì)胞平均指數(shù) ，對貧血的形態(tài)學(xué)分類有幫助。 6血液流變學(xué)指標(biāo) 自發(fā)性凝血時，HCT可0.6,四、血細(xì)胞比容測定,概述 計算方法 參考區(qū)間 臨床意義,五、紅細(xì)胞平均指數(shù),內(nèi)容,（一）概述,紅細(xì)胞平均指數(shù)包括： 紅細(xì)胞平均體積（MCV） 紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量（MCH） 紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度（MCHC） 為貧血的形態(tài)學(xué)分類和鑒別診斷提供重要線索,五、紅細(xì)胞平均指數(shù),（二）計算方法,儀器法與手工法基本相似，但不完全相同 手工法費(fèi)時費(fèi)力 儀器法自動計算，報告準(zhǔn)確 而且儀器法還有其他多種參數(shù)可以參考，如紅細(xì)胞直方圖,五、紅細(xì)胞平均指數(shù),手工法：紅細(xì)胞平均指數(shù)的計算,如果

48、RBC=4.01012/L,Hb=124g/L,Hct=0,42， 那么MCV=? MCH=? MCHC=?,（二）計算方法,MCV由血液分析儀直接測定細(xì)胞信號獲得 MCH=Hb/RBC MCHC=Hb/（RBCMCV） HCT= RBCMCV,儀器法：紅細(xì)胞平均指數(shù)的計算,如果MCH=30pg,MCV=120fl， 那么MCHC=?,（二）計算方法,（三）參考區(qū)間,五、紅細(xì)胞平均指數(shù),MCV、MCH、MCHC參考區(qū)間,（四）臨床意義,五、紅細(xì)胞平均指數(shù),貧血形態(tài)學(xué)分類及臨床意義,網(wǎng)織紅細(xì)胞定義 網(wǎng)織紅細(xì)胞形態(tài) 網(wǎng)織紅細(xì)胞染色方法 網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)方法 網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)參考區(qū)間 網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的臨

49、床意義 網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù),六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),網(wǎng)織紅細(xì)胞（reticulocyte，Ret）是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡階段細(xì)胞，其胞質(zhì)中尚殘留部分嗜堿性物質(zhì)（核糖體和核糖核酸），可被某些染料活體染色后呈藍(lán)色或紫色的網(wǎng)狀或顆粒狀結(jié)構(gòu)，故名為網(wǎng)織紅細(xì)胞。 Ret體積略大于成熟紅細(xì)胞（直徑8.09.5m），仍具有合成血紅蛋白的能力，約12天后，過渡為成熟紅細(xì)胞。ICSH將網(wǎng)織紅細(xì)胞分成IIV型。,定義,I型（絲球型） 型（網(wǎng)型） III型（破網(wǎng)型） 型（點(diǎn)粒型）,網(wǎng)織紅細(xì)胞類型及特征,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),（一）試管法,1原理 網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的RNA磷酸基，與新

50、亞甲藍(lán)、燦爛甲酚蘭等堿性染料帶正電荷的有色反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合，使RNA膠體間的負(fù)電荷減少而發(fā)生凝縮，形成藍(lán)色的點(diǎn)狀、線狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，顯微鏡下計數(shù)可得網(wǎng)織紅細(xì)胞的相對值（%）和絕對值（109/L）（Ret#=RBC Ret%）。 2試劑 10g/L煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)染液。 3簡要操作 染液與待檢血液11混合室溫放置1015分鐘制備血涂片低倍鏡下觀察油鏡計數(shù)計算。,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),（二）玻片法,1原理 同試管法 2試劑 10g/L煌焦油藍(lán)乙醇溶液。 3簡要操作 滴加染液于玻片上待干加同體積待檢血液充分混勻，染色制備血涂片低倍鏡下觀察油鏡計數(shù)計算。,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),網(wǎng)織紅細(xì)胞示意圖,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞

51、計數(shù),黃焦油蘭染色的網(wǎng)織紅細(xì)胞,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),黃焦油蘭染色的網(wǎng)織紅細(xì)胞,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),（三）Miller窺盤法,B,A,Miller窺盤為圓形玻片，玻片上刻有兩個正方形格子，計數(shù)時用小方格A計數(shù)紅細(xì)胞，用大方格B（包含A）計數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞，大方格B（包含A）面積為小方格A的9倍。ICSH及我國衛(wèi)計委臨床檢驗(yàn)中心推薦使用Miller窺盤進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)。,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),B格2個Ret，A格5個RBC,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),5 110 9,Ret% = = 0.5% Ret# = RBC Ret%,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),（四）儀器法,帶網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)參數(shù)的血液分析儀、流式細(xì)胞儀（FC

52、M）和網(wǎng)織紅細(xì)胞專用計數(shù)儀均可，網(wǎng)織紅細(xì)胞中RNA經(jīng)特殊熒光染料染色可進(jìn)行RNA定量，能精確計數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞占紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)（Ret%）。 網(wǎng)織紅細(xì)胞可分為低熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（LFR）、中熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（MFR）以及高熒光強(qiáng)度網(wǎng)織紅細(xì)胞（HFR）。還可計算未成熟網(wǎng)織紅細(xì)胞（IMR）和網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟指數(shù)（RMI）。 IMR=HFR+MFR,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),方法分類,試管法和玻片法原理、試劑基本相同，均可使用米勒窺盤，方便計數(shù)提高效率,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),（五）質(zhì)量保證,1及時檢測 陳舊標(biāo)本檢查結(jié)果將降低。 2選擇合適的染料 3染色過程 染色時間不能過短，室溫低時，可放置37溫箱或適當(dāng)延長

53、染色時間。染液與血液的比例以11為宜。嚴(yán)重貧血時，可適量增加血液的比例，制片時血膜應(yīng)厚薄適宜，避免網(wǎng)織紅細(xì)胞分布不勻。 4計數(shù) 選擇紅細(xì)胞分布均勻、網(wǎng)織紅細(xì)胞著色好的部位計數(shù)。外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞主要為型，凡含有2個或2個以上顆粒、且顆粒遠(yuǎn)離細(xì)胞邊緣的紅細(xì)胞均應(yīng)計為網(wǎng)織紅細(xì)胞。,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),（六）方法學(xué)評價,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的方法學(xué)評價,（七）參考區(qū)間,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),（八）臨床意義,1反映骨髓的造血功能 2作為貧血治療效果的觀察指標(biāo) 3作為觀察病情的指標(biāo),六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),1反映骨髓的造血功能,（1）網(wǎng)織紅細(xì)胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，見于各種增生性貧血，溶血性

54、貧血尤為顯著。溶血性貧血時由于大量網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)入血循環(huán)，網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)可增至6%8%或更多。急性溶血時可高達(dá)20%，嚴(yán)重者甚至可達(dá)40%50%以上；急性失血性貧血時網(wǎng)織紅細(xì)胞可明顯增高；缺鐵性貧血和巨幼紅細(xì)胞性貧血時，網(wǎng)織紅細(xì)胞正?；蜉p度增高。 （2）網(wǎng)織紅細(xì)胞減少：表示骨髓造血功能低下，多見于再生障礙性貧血。網(wǎng)織紅細(xì)胞低于15109/L為診斷急性再生障礙性貧血的標(biāo)準(zhǔn)之一。急性白血病時，由于骨髓中異常細(xì)胞大量浸潤，使紅細(xì)胞生成受到抑制，可造成網(wǎng)織紅細(xì)胞減少。,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),（3）網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)（reticulocyte production index，RPI）,反映骨髓造血功能指

55、標(biāo)，代表網(wǎng)織紅細(xì)胞的生成相當(dāng)于健康人多少倍。其計算公式為： 網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟時間：健康人RPI為1。RPI3：提示為溶血性貧血或急性失血性貧血。RPI1：提示為骨髓增生低下或紅系成熟障礙所致貧血。,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),2作為貧血治療效果的觀察指標(biāo),缺鐵性貧血和巨幼紅細(xì)胞性貧血患者在治療前，外周血網(wǎng)織紅細(xì)胞僅輕度增高（也可正?；蜉p度減少），有效治療后23天網(wǎng)織紅細(xì)胞便開始上升，710天達(dá)到高峰（可達(dá)10%以上）。治療2周左右網(wǎng)織紅細(xì)胞逐漸下降，之后紅細(xì)胞及血紅蛋白才逐漸升高。,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),貧血治療有效時網(wǎng)織紅細(xì)胞的變化,Ret#(109/L),Days,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),3作為觀察病情的

56、指標(biāo),溶血和失血性貧血患者在治療過程中，連續(xù)進(jìn)行網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)，可以作為判斷病情變化的參考指標(biāo)。如治療后網(wǎng)織紅細(xì)胞逐漸降低，表示溶血或出血已得到控制；如網(wǎng)織紅細(xì)胞持續(xù)不減低，甚至更見增高者，表示病情未得到控制，甚至還在加重。,六、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù),七、嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計數(shù),定義 測定方法 質(zhì)量保證 參考區(qū)間 臨床意義,內(nèi)容,七、嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計數(shù),嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞（basophilic stippling cell）是尚未完全成熟的紅細(xì)胞，胞質(zhì)中殘存的核酸（RNA）變性、聚集形成顆粒，經(jīng)堿性染料（如美藍(lán)）染色后，細(xì)胞內(nèi)可見深染的顆粒；若經(jīng)瑞氏染色，可見紅細(xì)胞的粉紅色胞質(zhì)中有粗細(xì)不等的藍(lán)黑色顆粒

57、，故稱嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞。,定義,basophilic stippling cell,（一）顯微鏡計數(shù)法,常規(guī)制備血涂片以甲醇固定和堿性亞甲藍(lán)染色后，按網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)方法，計數(shù)1000個紅細(xì)胞中所見到的嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞數(shù)，計算百分比。由于嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞較少且分布不均勻，必要時可擴(kuò)大紅細(xì)胞計數(shù)的數(shù)量。,七、嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計數(shù),（二）質(zhì)量保證 常規(guī)制備血涂片以甲醇固定和堿性亞甲藍(lán)染色后，按網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)方法，計數(shù)1000個紅細(xì)胞中所見到的嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞數(shù)，計算百分比。由于嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞較少且分布不均勻，必要時可擴(kuò)大紅細(xì)胞計數(shù)的數(shù)量。 1試劑應(yīng)定期配制，以免變質(zhì)沉淀。配制好的堿性亞甲藍(lán)染液在室溫下可保存23周，如有沉淀則需重新配制。 2可適當(dāng)放慢血涂片的干燥速度，使之形成較大的點(diǎn)彩顆粒。 3計數(shù)時需選擇紅細(xì)胞分布均勻、無重疊的區(qū)域，必要時采用擴(kuò)大計數(shù)域的方法計數(shù)。,七、嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞計數(shù),（三）參考區(qū)間 0.03%。 （四）臨床意義 嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞增多常見于鉛、汞、鉍、硝基苯、苯胺等中毒的患者，在職業(yè)病防治中常用于判斷鉛、汞等重金屬中毒情況。此外在溶血性貧血、惡性貧血、白血病、惡性腫瘤、瘧疾等也可見增多。,