實(shí)驗(yàn)七 饑餓與飽食對(duì)肝糖原含量的影響_第1頁
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文檔簡介

1、.,1,實(shí)驗(yàn)七 饑餓與飽食對(duì)肝糖原含量的影響,.,2,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵?1.掌握饑餓與飽食對(duì)小白鼠肝糖原含量的影響 2.熟悉肝糖原提取鑒定的原理和方法 3.掌握低速常溫離心機(jī)的使用，了解離心技術(shù),.,3,二、實(shí)驗(yàn)原理,肝糖原是由許多葡萄糖分子聚合而成的物質(zhì)，是動(dòng)物機(jī)體能夠迅速動(dòng)用的糖儲(chǔ)存形式之一。,.,4,二、實(shí)驗(yàn)原理,血糖,糖原合成,肝（?。┨窃?胰高血糖素,胰島素,.,5,二、實(shí)驗(yàn)原理,提取:用三氯醋酸破壞肝組織的蛋白質(zhì)和酶，使其沉淀而保留糖原，再用乙醇將糖原從濾液中沉淀出來，溶于熱水中，即為糖原溶液。 性質(zhì):糖原溶液呈乳樣光澤，遇碘呈紅棕色。 定量:肝糖原在濃硫酸中水解為葡萄糖后，分子

2、內(nèi)部脫水縮合成5-羥甲基-呋喃甲醛。后者與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)色化合物，在620nm波長下有最大光吸收。,.,6,三、器材和試劑,1.主要器材：手術(shù)盤、剪刀、鑷子、天平、研缽、離心機(jī)、離心管、恒溫水浴箱、分光光度計(jì)、微量進(jìn)樣器、試管及試管架、白瓷凹皿 2.主要試劑： （1）蒸餾水 （2）5%三氯乙酸 （3）標(biāo)準(zhǔn)的葡萄糖溶液：0.5ml相當(dāng)于25ug葡萄糖 （4）95%乙醇 （5）碘試劑：I2 100mg 及KI 200mg溶解于30ml蒸餾水中 （6）0.2%蒽酮試劑,.,7,四、操作,.,8,四、操作,小白鼠,斷頭處死,0.5g肝臟,2ml 5%三氯乙酸,研缽中研為勻漿,離心管,3ml 蒸餾水洗滌,上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中,4000rpm 離心3min,沉淀即為初步純化糖原。加2ml H2O溶解，吹打混勻，即為肝糖原提取液,加5ml 95%乙醇，混勻，靜止1min，4000r/min離心5min,觀察對(duì)比兩組溶液現(xiàn)象,取0.5ml定量檢測(cè),取2滴于白瓷凹皿中,觀察、記錄兩組顏色，與蒸餾水比較,加入碘試劑1滴,.,9,四、操作,.,10,四、操作,.,11,四、操作,.,12,五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果,1.性質(zhì)：糖原溶液呈乳樣光澤，遇碘呈紅棕色。,2.定量： 糖原濃度(g /ml)=Au/As Cs 1/1.11 肝糖原含量=糖原濃度100/0.5液體體積106 注：1.11是用此法測(cè)得葡萄糖含

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