1、植物組織逆境傷害程度的測定 電導法 （ 實 驗 37 ),教師處理材料（-20C,20min冷凍材料 ）,學生進入實驗室先洗試管 教師將水浴鍋及電導率儀打開,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,逆境傷害程度的測定方法：,1 紫外法： 根據(jù)滲出物質(zhì)對紫外的吸收,2 電導法: 測定受損質(zhì)膜外滲電解質(zhì)的電導,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,實驗原理,植物細胞膜對維持細胞的微環(huán)境和正常的代謝起著重要的作用。在正常情況下，細胞膜對物質(zhì)具有選擇透性能力。 逆境：高溫、干旱、凍害、冷害、污染、酸雨 當植物受到逆境影響時，細胞膜遭到破壞，膜透性增大，從而使細胞內(nèi)的電解質(zhì)外滲，以致植物組織浸入去離子水中，水的電導將因電解質(zhì)

2、的外滲而加大。 用電導儀測定外液的電導度增加值，求得傷害程度。,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,膜透性增大的程度與逆境脅迫強度有關，也與植物抗逆性的強弱有關。因此，電導法目前已成為作物抗性栽培、育種上鑒定植物抗逆性強弱的一個精確而實用的方法。,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,大葉扶芳藤葉片,實驗材料：,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,操作方法,實驗處理： 正常植物葉片 冷凍脅迫處理（-20），處理20min。,洗刷試管，去離子水中含有吐溫20,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,正常、凍害各取3個葉片，用去離子水洗凈 每葉片打取葉圓片9個，放到小燒杯中用去離子水沖洗； 每支試管放入9個葉圓片； 加入15ml去離子

3、水； 放入塑料紗網(wǎng)（距液面1-2cm），用去離子水漂洗；,2. 步驟,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,放置到塑料燒杯中（不蓋塞子），統(tǒng)一抽氣15min。（設置空白1只試管）,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,4.電導儀測定初電導值S1,5.沸水浴15 min（殺死植物組織），自來水冷卻，用力搖1-2min后即可測定終電導S2（注意：沸水浴時需將塞子松動一下，以防加熱后打不開）,3.抽氣后取出紗網(wǎng)，室溫搖動20min （時間可以更長）,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,結(jié)果計算:（參照課本） 相對電導度（L）= (S1-空白）/ (S2-空白） 凍害的傷害度（）= Lt凍害處理的相對電導度 Lck室溫對照的相對

4、電導度,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,植物組織逆境傷害程度的測定記載表,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,實驗步驟簡圖,取材（各3片葉） 打取葉圓片 9片/管 15ml蒸餾水/管 集中抽氣15min 平衡20min 測量S1 煮沸15min冷卻冷卻 搖勻 測量S2,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,DDS-307型電導率儀操作規(guī)程,1、打開電源開關，預熱30分鐘。 2、儀器校準：將“選擇”旋鈕指向“檢查”檔，調(diào)節(jié)常數(shù)補償旋鈕到“1” 刻度線，調(diào)節(jié)溫度補償旋鈕到“25”刻度線，然后調(diào)節(jié)“校準”旋鈕，使儀器顯示100.0S/cm，校正完畢。,按照電極上標明的電極常數(shù)，調(diào)節(jié)常數(shù)補償旋鈕，使儀器顯示值與電極所標常數(shù)

5、一致。,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,3、樣品測定： 將“選擇”旋鈕置于適合的量程位置。當測定過程中顯示值熄滅時，說明測量值超出量程范圍，此時應將選擇旋鈕置于高一擋量程。 測定時電極完全浸沒到溶液中。 （如果試管口小，電極不能全部浸沒時，可以全部加去離子水至20ml。） 測定一個樣品后用去離子水沖洗后，再用濾紙將電極表面的水份吸干后測定下一個樣品。,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中心,問題與注意事項,1.葉片大小一致，防止打出不圓片使誤差增大，并保證各重復來自同三個葉片。 2.材料不可混放。 3.抽氣前，切記將紗網(wǎng)放入試管。紗網(wǎng)距離液面1-2cm，可以防止抽氣時葉圓片翻出試管。 4.抽氣的目的。 5.平衡時振蕩的作用。 6.溫度對電導影響較大，故S1和S2應在相同溫度下測定。 7.CO2在水中溶解度較高，測定電導時要防止高CO2氣源和口中呼出的CO2進入試管。 8.測定時，電極要完全插入待測液中。且不可甩電極，防止碰破電極。測定一個樣品后用去離子水沖洗后，再用濾紙將電極表面的水份吸干后測定下一個樣品。 9.蒸餾水中加吐溫，洗儀器時出現(xiàn)泡沫。 吐溫作用：陰離子表面活性劑，促進水分與葉片表面接觸。 吐溫20聚氧乙烯（20）山梨醇酐單月桂酸酯,農(nóng)業(yè)生物學基礎實驗教學中