1、醫(yī)學(xué)科研方法學(xué),醫(yī)學(xué)科研的基本要素,中南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)系,羅自強(qiáng),內(nèi)皮素-1對肺型細(xì)胞表面活性物質(zhì)合成的調(diào)控,被試因素 實(shí)驗(yàn)對象 實(shí)驗(yàn)效應(yīng),一、被試因素,1. 因素（factor）與水平 （level） * 雌二醇對肺成纖維細(xì)胞增殖的調(diào)控,* 不同季節(jié)環(huán)磷酰胺對小鼠精子細(xì)胞致畸效應(yīng)的研究,* 性別與年齡和心肌梗塞病死率的研究,* 心理應(yīng)激與高血壓發(fā)生的關(guān)系,* CC16 gene polymorphism influences the degree of airway responsiveness in asthmatic children,外源性的： 人為給予的物理、化學(xué)、生物因素 外

2、界客觀存在的：氣候、季節(jié)等 內(nèi)源性的的自身特征： 性別、年齡、心理、遺傳因素,因素,實(shí)驗(yàn)的目的是闡明被試因素的作用,被試因素（T）+非被試因素（N） t + n,實(shí)驗(yàn)組： T + N t + n 對照組： N n,必須明確被試因素；各組間非被試因素必須一致,效應(yīng) T t,水平的選定 水平：實(shí)驗(yàn)因素的不同的量或狀態(tài),被試因素的效應(yīng)與水平有依賴關(guān)系 藥物如果沒有量-效關(guān)系，為非特異作用 水平的選擇與目的有關(guān),藥效篩選：最大安全量（通常LD50的1/10） 影響藥效的因素：半數(shù)有效濃度（EC50） 半數(shù)有效劑量（ED50） 毒性實(shí)驗(yàn)：半數(shù)致死量（LD50） 最大致死量（LD100）,單因素單水平：

3、簡單易行，效率不高 單因素多水平：比較不同劑量 多因素單水平：比較不同因素（藥物、療法） 多因素多水平：探索聯(lián)合用藥方案、最佳反應(yīng)條件,因素與水平的組合,2.因素的施加,確保因素的施加 被試因素標(biāo)準(zhǔn)化：保證被試因素在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中始終保持一致 劑量、劑型、給藥時(shí)間、用藥時(shí)間、給藥途徑、藥品批號,不同時(shí)間給予曲馬多所引起的死亡率不同,藥學(xué)學(xué)報(bào) 2001 08,晝夜節(jié)律,曲馬多鎮(zhèn)痛作用的晝夜變化,藥學(xué)學(xué)報(bào) 2001 08,皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 2002 01,小鼠痛閾的晝夜變化,季節(jié)節(jié)律,苯丙胺 LD50 1月小于7月,實(shí)驗(yàn)組和對照組平行進(jìn)行,給藥途徑,* 吸收速度 靜脈注射吸入肌肉=腹腔皮下口服經(jīng)肛貼

4、皮,* 藥物的生物轉(zhuǎn)化 口服 先經(jīng)肝轉(zhuǎn)化 皮下、肌肉、靜脈 先經(jīng)肺轉(zhuǎn)化,正確選擇劑量,口服 100% 灌胃 100% 灌腸 100-200% 皮下 30-50% 肌肉 25-30% 腹腔 25-30% 靜脈 20-25%,二、受試對象,實(shí)驗(yàn)對象的確定取決于試驗(yàn)?zāi)康?1.受試對象的選擇 （1）敏感、穩(wěn)定 動(dòng)脈粥樣硬化 兔 過敏反應(yīng) 豚鼠 心肌缺血 狗、兔、大鼠、豬 降壓治療 高血壓II期 （2）可行性 （3）病人診斷明確（客觀指標(biāo)）,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 種屬、品系、窩別、性別、齡、體重、營養(yǎng)狀態(tài)和飼養(yǎng)條件,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四級： 一級，普通動(dòng)物（conventinal animal）：教學(xué)和預(yù)試 二級，清潔動(dòng)

5、物（clean animal）：大多數(shù)的科研 三級，無特定病原體動(dòng)物（specific pathogen free animal）：為國際標(biāo)準(zhǔn)級，所有科研 四級，無菌動(dòng)物（germfree animal）：特殊課題,第四章 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的應(yīng)用 第十九條 應(yīng)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)當(dāng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，選用相應(yīng)的合格實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。申報(bào)科研課題和鑒定科研成果，應(yīng)當(dāng)把應(yīng)用合格實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為基本條件。應(yīng)用不合格實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取得的檢定或者安全評價(jià)結(jié)果無效，所生產(chǎn)的制品不得使用。 第二十條 供應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)當(dāng)具備下列完整的資料： （一）品種、品系及亞系的確切名稱； （二）遺傳背景或其來源； （三）微生物檢測狀況； （四）合格證書

6、； （五）飼育單位負(fù)責(zé)人簽名。,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例（國家科委，1988）,人體為研究對象 種族、性別、年齡、體重、職業(yè)、工種、工齡、精神狀態(tài)、居住條件、生活習(xí)慣、嗜好、經(jīng)濟(jì)及社會(huì)因素,病人為研究對象 病種、病程、病期、病型、既往史、治療和護(hù)理?xiàng)l件,人體實(shí)驗(yàn)或用人體組織或器官作材料, 應(yīng)被有關(guān)研究單位的專門委員會(huì)批準(zhǔn)，同時(shí)符合1975年出版、1983年修訂的赫爾辛基宣言和有關(guān)國際倫理標(biāo)準(zhǔn)。被試者應(yīng)知情并同意。醫(yī)院和被試者的名稱可以省略。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也應(yīng)符合國家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例和有關(guān)動(dòng)物保護(hù)與使用的法律和法規(guī)。 -生理學(xué)報(bào)投稿須知,所有醫(yī)學(xué)研究的基本原則 -摘自赫爾辛基宣言 * 要保護(hù)人體對象的生命、健

7、康、隱私和尊嚴(yán)。 * 必須遵守公認(rèn)的科學(xué)原則，十分熟悉科學(xué)文獻(xiàn)、以及適當(dāng)?shù)膭?dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上 。 * 實(shí)驗(yàn)方案應(yīng)上報(bào)專門的道德審核委員會(huì)批準(zhǔn)。 * 只能由科學(xué)上合格的人員來承擔(dān)，并在醫(yī)務(wù)人員的監(jiān)督下進(jìn)行。 * 必須先對預(yù)計(jì)的風(fēng)險(xiǎn)和壓力或給實(shí)驗(yàn)對象的好處進(jìn)行仔細(xì)評估。 * 醫(yī)學(xué)研究只有當(dāng)研究結(jié)果有可能造益于參與研究的人們時(shí)才是合理的。 * 研究對象必須自愿，并了解研究項(xiàng)目情況。,下列情況一般不作為臨床研究對象,* 存在影響結(jié)果的并發(fā)癥 * 危重狀態(tài) * 多種療法無效 * 不配合者,2.選擇適當(dāng)?shù)难芯克?整體實(shí)驗(yàn) （in vivo） ： 綜合性實(shí)驗(yàn) 離體實(shí)驗(yàn) （in vitro）： 分析性實(shí)驗(yàn) 器

8、官水平 細(xì)胞水平 分子水平 半體內(nèi)實(shí)驗(yàn)（ex vivo）： 分析性實(shí)驗(yàn),3.受試對象的純化 所用受試對象力求一致，盡力減少個(gè)體差異，降低非被試因素對效應(yīng)的影響,（1） 表現(xiàn)典型的確診病例 （2） 病情輕重一致，先從病情中等的病例開始 （3） 使用統(tǒng)一、公認(rèn)的診斷和分型分級標(biāo)準(zhǔn),Case 4 某人為了研究“補(bǔ)充維生素A對學(xué)齡前兒童血紅蛋白的影響”，選擇1999年秋季入托的三歲兒童進(jìn)行體檢，排除呼吸道、消化道等系統(tǒng)疾病，測定174名兒童的血清VA、血紅蛋白、血清鐵濃度，將血紅蛋白110g/L定為貧血。再將貧血組兒童隨機(jī)分為兩組，一組為治療組33例，每日投VA2000IU，另一組為對照組25例。三月

9、后，兩組兒童分別查血清VA、血紅蛋白、血清鐵濃度。結(jié)果：治療組三月后血清VA、血紅蛋白、血清鐵濃度明顯升高P0.01，對照組治療后無明顯變化P0.05。,4.受試對象的依從性 按預(yù)定計(jì)劃接受被試因素的合作程度,* 增加患者的信任感 * 實(shí)驗(yàn)時(shí)間不要太長 * 盲法（單盲、雙盲、三盲）,急性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)必須在藥物麻醉下進(jìn)行, 嚴(yán)禁單純用肌肉松弛劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物手術(shù)。 生理學(xué)報(bào) 投稿須知 2001,5.麻醉,三、試驗(yàn)效應(yīng),客觀指標(biāo) 主觀指標(biāo) 定量指標(biāo) 定性指標(biāo) 率 定量和定性指標(biāo)的轉(zhuǎn)換 特異性指標(biāo) 非特異性指標(biāo),比較生物效應(yīng) 可以用引起同一水平效應(yīng)所需要的量 半數(shù)致死量 LD50 半數(shù)有效量 ED50 半

10、數(shù)有效濃度 EC50 閾強(qiáng)度,比較生物效應(yīng)的時(shí)間 潛伏期 半衰期 效應(yīng)持續(xù)期：從起效到作用消失所需時(shí)間,三、試驗(yàn)效應(yīng),（一）指標(biāo)的要求 扣題-關(guān)聯(lián)性 TXA2 TXB2 11脫氫TXB2 PGI2 6酮PGFI 去二甲6酮PGFI 自由基 膜磷脂 MDA 血小板AA代謝,自由基 膜磷脂,異構(gòu)前列腺素（isoprostane),結(jié)果 兩名醫(yī)生讀 名醫(yī)生在兩次 同一批片子 不同時(shí)間讀片,結(jié)果一致 6245 701 結(jié)果不一致 2686（30%） 192（21%）,X線胸片讀片結(jié)果,2.客觀化,三、試驗(yàn)效應(yīng),（一）指標(biāo)的要求 1.扣題-關(guān)聯(lián)性 指標(biāo)與研究主題要有本質(zhì)聯(lián)系 2.客觀化 * 統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn) * 儀器相對定量 * 多人盲法，加權(quán)平均,3.靈敏度,能正確反映效應(yīng)變化的最小數(shù)量或水平,4.指標(biāo)的可用性,敏感度：是否可檢出發(fā)生的變化，真陽性率 特異度：檢出變化的專一性，真陰性率,真陽性率=a/（a+c）,真陰性率=d/（b+d）,漏診率=1-真陽性率,誤診率=1-真陰性率,5.指標(biāo)的精確性,準(zhǔn)確度：與真實(shí)值的接近程度，測定的正確性 主要取決于系統(tǒng)誤差 精密度：各次測定值的集中程度，測定的可重復(fù)性 主要取決于隨機(jī)誤差,（二）注意事項(xiàng),1.標(biāo)本的采集于儲存標(biāo)準(zhǔn)化 采樣時(shí)間、部位、方法、保持、運(yùn)輸 2.測定方法標(biāo)準(zhǔn)化 方法、儀器、試劑