1、第四章 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)實踐 4.1 DNA粗提取與鑒定一、學(xué)習(xí)目標(biāo)1、通過嘗試對植物或動物組織中的DNA進(jìn)行粗提取，了解DNA的物理化學(xué)性質(zhì)。2、理解DNA粗提取與鑒定的原理3.掌握DNA如提取計數(shù)，能利用DNA的性質(zhì)進(jìn)行實驗設(shè)計和操作二、知識構(gòu)成：1提取DNA的原理包括DNA的溶解性和耐受性兩個方面。問：提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？2.DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度有何特點？要使DNA溶解，需要使用什么濃度？要使DNA析出，又需要使用什么濃度？3、酒精是一種常用有機(jī)溶劑，但DNA卻不能溶于酒精（特別是95冷卻酒精），但細(xì)胞中蛋白質(zhì)可溶于酒精。問：采用DNA不溶于酒精的

2、原理，可以達(dá)到什么目的？ 4、提取DNA還可以利用DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性原理。利用該原理時，應(yīng)選用怎樣的酶和怎樣的溫度值？5、思考：洗滌劑在提取DNA中有何作用？ 6、當(dāng)鑒定提取出的物質(zhì)是否是DNA時，需要使用什么指示劑進(jìn)行鑒定？7、不同生物的組織中DNA含量不同。在選取材料時，應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。你認(rèn)為教材提供的材料中哪些不適合提取DNA？ 8、從核DNA數(shù)目來看，豬38條，雞78條，哺乳動物血0條，獼猴桃58條，洋蔥16條，豌豆14條，菠菜12條，大腸桿菌1條。請選擇動植物材料各一種。 9、若選用雞血和洋蔥作實驗材料，則怎樣獲取含DNA的濾液？10、在以

3、上實驗中，加入蒸餾水、洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？過濾時應(yīng)當(dāng)選用（濾紙、尼龍布）。11、在處理植物組織時需要進(jìn)行研磨，其目的是什么？研磨不充分產(chǎn)生什么結(jié)果？具體做法。 12、在濾液中仍然含有一些雜質(zhì)，怎樣除去這些雜質(zhì)呢？得到的DNA呈何顏色？13、怎樣鑒定析出的白色絲狀物就是DNA呢？閱讀教材。 具體做法。試管2支，編號甲乙各加等量5mLNaCl溶液甲中放入少量白色絲狀物，使之溶解各加4mL二苯胺，混合均勻沸水浴5min觀察顏色變化3總結(jié)DNA粗提取和鑒定的實驗操作過程。三、學(xué)法和自檢：1 在DNA分子的粗提取實驗中，兩次向燒杯中加入蒸餾水的作用是（ ）A.稀釋血液、沖洗樣品B.使血細(xì)胞破裂

4、，降低NaCl濃度使DNA析出C.使血細(xì)胞破裂，增大DNA溶解度D.使血細(xì)胞破裂，提取含雜質(zhì)較少的DNA2 在制備雞血細(xì)胞液的過程中，加入檸檬酸鈉的目的是（ ）A.防止凝血 B. 加快DNA析出 C. 加快DNA溶解 D. 加速凝血課題 四、達(dá)標(biāo)檢測1.在研究DNA的基因樣本前，采集來的血樣需要蛋白水解酶處理，然后用有機(jī)溶劑除去蛋白質(zhì)。用蛋白水解酶處理血樣的目的是（ ）A.除去血漿中的蛋白質(zhì) B.除去染色體上的蛋白質(zhì) C.除去血細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)D.除去血細(xì)胞中的所有的蛋白質(zhì)，使DNA釋放，便于進(jìn)一步提純2與析出DNA粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是（ ）A.操作時緩緩滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度

5、 B.在操作A時，用玻璃棒輕緩攪拌，以保證DNA分子完整 C.加蒸餾水可同時降低DNA和蛋白質(zhì)的溶解度，兩者均可析出D.當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時，此時NaCl的濃度相當(dāng)于0.14mol/L3洗滌劑能夠瓦解（ ），但對DNA沒有影響。A.細(xì)胞壁 B.細(xì)胞膜 C.細(xì)胞核 D.細(xì)胞質(zhì)4在沸水浴的條件下，DNA遇（ ）會被染成藍(lán)色。A.斐林試劑 B.蘇丹染液 C.雙縮脲試劑 D.二苯胺5在DNA提取過程中，最好使用塑料試管和燒杯，目的是（ ）A.不易破碎 B.減少提取過程中DNA的損失 C.增加DNA的含量 D.容易洗刷6下列操作中，對DNA的提取量影響最小的是（ ）A.使雞血細(xì)胞在蒸餾水中充分破裂，放

6、出DNA等核物質(zhì)B.攪拌時，要使用玻璃棒沿一個方向輕緩攪拌C.在“析出DNA粘稠物”時，要緩緩加蒸餾水，直至溶液中粘稠物不再增加D.在用酒精沉淀DNA時，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻E在DNA的溶解和再溶解時，要充分?jǐn)嚢?DNA的粗提取中，將與濾液體積相等的、冷卻的（ ），靜置23min，溶液中會出現(xiàn)白色絲狀物。A.09%的NaCl B.0.14mol/L的NaCl溶液 C.質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%的HCl D.體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液8.以血液為實驗材料時，需要向血液中加入（ ），防止血液凝固。A.醋酸鈉 B.龍膽紫 C.檸檬酸鈉 D.醋酸洋紅9.在向溶解DNA的NaCl溶液中，不斷加

7、入蒸餾水的目的是（ ）A.加快溶解DNA的速度 B.加快溶解雜質(zhì)的速度 C.減少DNA的溶解度，加快DNA析出 D.減小雜質(zhì)的溶解度，加快雜質(zhì)的析出10.去除濾液中的雜質(zhì)時，直接在濾液中加入嫩肉粉，利用嫩肉粉中的（ ）分解蛋白質(zhì)。A.胃蛋白酶 B.胰蛋白酶 C.木瓜蛋白酶 D.腸肽酶五、學(xué)習(xí)小結(jié)和課外作業(yè)：1、學(xué)習(xí)小結(jié)：2、上本作業(yè)：3、課本或資料選題：4、補(bǔ)充練習(xí)：DNA在NaCl溶液中溶解度有二重性，隨著NaCl溶液的變化而變化。（1）請在下列NaCl溶液中選出溶解度能使DNA析出最徹底的一種（ ）和溶解度最高的一種（ ）A. 0.14mol/l B. 2mol/l C. 0.15mol/l D. 0.3mol/l（2）DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中的某些物質(zhì)卻可以溶于酒精溶液，利用這一原理可以_，可以推測溶于酒精中的物質(zhì)可能有_。（3）利用DNA與_變藍(lán)色的特性，將該物質(zhì)作為鑒定_的試劑。其實驗過程要點是向放有_的試管中加熱4ml的_?；旌暇鶆?/p>