1、血栓與止血檢驗,臨床血液學教研室,第一節(jié) 血栓與止血的篩選檢驗,一、一期止血缺陷的篩選檢驗 二、二期止血缺陷的篩選檢驗 三、纖溶活性增強的的篩選檢驗 四、 抗凝物質(zhì)檢驗,出血時間測定 血小板計數(shù) 束臂試驗（毛細血管脆性實驗） 血塊收縮試驗 毛細血管抵抗力試驗,第一節(jié) 一期止血篩查試驗,出血時間測定(bleeding time，BT),一、原理： 測定在皮膚受特定條件外傷后，出血自然停止所需的時間即為出血時間。此過程反映了毛細血管與血小板的相互作 用，包括內(nèi)皮下組織與血小板粘附（通過vWF 的作用）、血小板的聚集和釋放等反應，以 及PGI2與TXA2的動態(tài)平衡。,二、方法 Duke法、 Ivy法

2、、出血時間測定器法（TBT法） （衛(wèi)生部推薦方法） 三、試劑與器材： 1、血壓計，秒表，干凈濾紙 2、出血時間測定器,四、操作： 1、血壓計袖帶縛于測定上肢的上臂，加壓并維 持在40mmHg,兒童減半。 2、在肘前窩下5cm處的尺側做局部消毒后，將測定器垂 直貼于皮膚表面，按下按鈕，同時啟動秒表，移開測 定器。 3、每隔30s,用干凈濾紙吸去流出的血液，直至流血自然停止，并記錄秒表讀數(shù)。,五、參考值 ： 2.3-9.5 min 六、臨床意義： 延長： 1、 血小板數(shù)量異常，如ITP、TTP 2、血小板功能異常，如plt無力癥、巨大plt綜合征、 儲存池病 3、 血管壁異常血管性血友病、遺傳性毛

3、細血管擴張癥 4、某些嚴重的凝血因子缺乏 縮短：高凝狀態(tài)和血栓性疾病,七、質(zhì)量控制 1、注意影響B(tài)T測定的因素 2、濾紙吸去血液時，避免與傷口接觸 3、注意藥物的影響（抗凝劑、Apc）,血小板檢驗,一、血小板計數(shù) 二、血小板生存時間檢測 三、血小板相關抗體檢測 四、血小板粘附試驗 五、血小板聚集試驗 六、血小板第3因子有效性檢測 七、血小板膜糖蛋白檢測 八、血小板活化指標檢測（血漿-TG、PF4、血 小板P選擇素檢測）,正常值：（100300）109/L,危險,血 小 板 粘 附 試 驗 ( platelet adhension test,PAdT),原理： 受檢者血液一定速度通過一定量玻璃珠

4、的塑料管，測定通過玻璃珠前后血液中血小板數(shù)的差值，即為粘附于玻珠和塑料管的血小板數(shù)，由此可計算出其占血小板總數(shù)的百分比，即為血小板粘附率。 方法：玻球法、玻璃濾器法、玻珠法,臨床意義： 血管性血友病、巨大血小板綜合癥、血小板無力癥、肝硬化、MDS、急性白血病、服用抗血小板藥物等 血栓前狀態(tài)和血栓性疾病、妊高癥、口服避孕藥等,粘附率減低,粘附率增高,誘聚劑,PPP,PRP,血 小 板 聚 集 試 驗platelet aggregation tset，PAgT,比濁法：以PPP設最低濁度，PRP設最高濁度，在血漿中加入誘聚劑，測定血漿濁度的變化，繪制血小板聚集曲線。,臨床意義： 血小板無力癥、血管

5、性血友病、巨大血小板綜合癥、血小板貯存池病、低（無）纖維蛋白原血癥、肝硬化、使用血小板抑制劑等。 高凝狀態(tài)、血栓形成性疾病、動脈粥樣硬化、糖尿病、口服避孕藥、人工瓣膜移植術后、吸煙等。,聚集率減低,聚集率增高,質(zhì)量控制： 1.采血要順利，避免組織液混入，抗凝劑使用合理（不用EDTA抗凝） 2.采集后3h內(nèi)室溫下完成 3.試驗前十天停用一切抑制血小板聚集的藥物；試驗前禁食高脂類食物 4.注意 PRP：1000r/min離心10min PLT(100300)109/L PPP ：3000r/min離心20min PLT20109/L,全血凝固時間測定（CT） 活化部分凝血活酶時間測定（APTT）

6、血漿凝血酶原時間測定（PT）,第二節(jié) 二期止血缺陷篩查檢驗,全血凝 固時間測定(coagulation time, CT),原理 觀察血液自離體后，到玻璃試管中凝固所需時間,血液,從血管中 抽出,與帶負電荷表面接觸,內(nèi)源性凝血途徑啟動,纖維蛋白形成（血液凝固）,XII XIIa,臨床意義 1. 因子VIII、IX、XI活性減低；嚴重的因子、和纖維蛋白原缺乏 2. 原發(fā)性纖溶亢進；血循環(huán)中存在抗凝物質(zhì) 高凝狀態(tài)和血栓性疾病,CT延長,CT縮短,肝素治療用量檢測指標,活 化 部 分 凝 血 活 酶 時 間 測 定 (activated partial thromboplastin time，APT

7、T),一、原理,APTT,Ca2+ 腦磷脂,白陶土,Ca2+ 腦磷脂,部分凝血活酶,二、操作 （一）APTT手工法(試管法） 血漿0.1mlAPTT試劑各0.1ml +CaCl20.1ml （混勻計時） 結果觀察：緩慢傾斜試管，觀察液體流動狀態(tài)，流動 停止停止計時 參考值 2545s (二）儀器法,37溫浴,APTT,延長,縮短,因子VIII、IX、XI活性減低,高凝狀態(tài),三、臨床意義,肝素抗凝監(jiān)測,APTT糾正試驗,于患者血漿中分別加入1/4 的正常新鮮血漿、硫酸鋇吸附血漿、正常血清，再作APTT試驗。 硫酸鋇吸附血漿 VIII、XI、XII （不含IX） 正常血清 IX、XI、XII（不含

8、VIII） 新鮮血漿 VIII、IX、XI、XII,血友病甲,血友病乙,F缺乏,正常血漿,硫酸鋇吸附血漿 （缺）,正常血清(缺),APTT糾正試驗-血友病,糾正,不糾正,糾正,糾正,糾正,糾正,不糾正,患者血漿,糾正,糾正,凝血酶原時間測定 Prothrombin time ，PT 一、原理,Ca2+ 腦磷脂,PT,組織因子,Ca2+ 腦磷脂,二、報告方式 1. 直接報告患者及正常對照的PT秒數(shù) 2. 報告凝血酶原時間比值（PTR） PTR=受檢者PT（秒）/正常對照PT（秒） 3. 報告國際標準化比值（INR） INR=PTRISI,組織凝血活酶的國際敏感指數(shù)（internation sen

9、setivity index,ISI）是用組織凝血活酶試劑與ISI已知的國際參比品或經(jīng)其標定過的參比品之間敏感度相比較的一個參數(shù)。 測定方法： 用多份凝血因子水平不同的血漿（包括正常人和口服抗凝劑患者的血漿），用參比品測得它們的PT的對數(shù)（lgPT），再用待標定的組織凝血活酶測得它們的lgPT，以前者為縱坐標，后者為橫坐標作圖，經(jīng)回歸求得直線斜率。 待標定的組織凝血活酶的ISI=已知的ISI斜率,PT,延長,縮短,因子VII、 II、V、X、Fg活性減低,高凝狀態(tài),三、臨床意義,口服雙香豆素類抗凝藥物監(jiān)測,要保證止凝血檢驗的質(zhì)量 必須做好以下十點：,1. 采血須順利，盡量用大號針頭，動作要輕柔

10、； 2. 標本用加蓋有刻度標記的塑料試管或硅化管收 集 ； 3. 抗凝劑用109mmol/L的枸櫞酸鈉，抗凝劑與 血液的比例為1:9。,當Hct 增高55% 或25% 時，務必對抗凝劑用量 或濃度進行調(diào)整： 抗凝劑用量(ml)=0.185全血量(ml)1-Hct(%),4. 標本采集至檢驗時間PT4小時，APTT2 小時，一些因子活性檢測要求即刻試驗； 5.使用儀器推薦或配套的試劑，使用時嚴格按照說 明書，注意有效期和穩(wěn)定性； 6. 反應溫度控制在（371）； 7. 手工操作必須做正常對照，復管檢測； 8. 正確使用正常對照血漿及參比血漿； 9. 每天堅持室內(nèi)質(zhì)控，積極參加室間質(zhì)評； 10.建

11、立本實驗室的參考范圍。,血清纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物檢測 血漿D-二聚體檢測 血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗,第三節(jié) 纖溶活性篩查檢驗,血漿纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物測定（fibrin/fibrinogen product，F(xiàn)DP）,一、原理： 膠乳凝集法：在受檢血漿中加入特異性抗纖維蛋白（原）D、E片段抗體標記的膠乳顆粒懸液，如果血漿中含有纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（FDP），特別是D、E片段，即可發(fā)生抗原抗體反應，導致膠乳顆粒凝集。,二、參考值： 血清10mg/L，血漿5mg/L 三、臨床意義： 1. 血清FDP輕度增高10-40mg/L，見于深靜脈血栓、急性心梗、嚴重肺 炎、大手術后、惡性腫瘤、休克等

12、。 2. 血清FDP明顯增高40mg/L，見于原發(fā)性纖溶癥、DIC、M3、應用鏈激酶等溶栓治療時。,血漿D-二聚體測定,一、原理： 1. 膠乳凝集法 2. ELISA法 二、參考值：0.5mg/L有臨床意義 三、臨床意義： 1. DIC時呈陽性或明顯增高，另見深靜脈血栓、心梗、肺栓塞、重癥肝炎等 2. 可作為原發(fā)纖溶和繼發(fā)纖溶鑒別的重要依據(jù)。,血漿硫酸魚精蛋白副凝試驗 （plasma protamine paracoagulation test, 3P）,結果判斷 陰性,血漿硫酸魚精蛋白副凝固試驗plasma protamin parcoagulation test，3P,四、臨床意義 1.

13、陰性 正常或DIC晚期，原發(fā)纖溶 2. 陽性 含細顆粒沉淀，粗顆粒沉淀、纖維蛋白絲網(wǎng)或膠凍樣物質(zhì)，見于DIC早期，中期，靜脈血栓、嚴重創(chuàng)傷，大手術，及久置冰箱的標本,生理性抗凝蛋白檢驗：,一、抗凝血酶檢測 1、血漿抗凝血酶活性檢測 2、血漿抗凝血酶抗原檢測 二、蛋白C檢測 1、血漿蛋白C活性檢測 2、血漿蛋白C抗原檢測 三、血漿蛋白S抗原檢測 四、組織因子途徑抑制物檢測,第四節(jié) 抗凝物質(zhì)檢驗,病理性抗凝物質(zhì)檢驗：,一、復鈣交叉試驗 二 、凝血酶時間檢測及甲苯胺藍糾正試驗 三、普通肝素和低相對分子質(zhì)量肝素檢測 四、凝血因子抑制物檢測 五、狼瘡抗凝物質(zhì)的篩選試驗和確診試驗,凝血酶時間測定及甲苯胺藍糾正試驗 thrombin time,TT一、原理:,凝血酶,TT,二、結果判斷： 正常人凝血酶時間一般在16-18s，超過正