1、一氧化氮腎內(nèi)作用 的研究進(jìn)展,一、腎內(nèi)NO的生物合成 二、NO與腎臟生理學(xué) 三、長期NOS抑制效應(yīng),一、腎內(nèi)NO的生物合成,一、腎內(nèi)NO的生物合成,（一）腎內(nèi)NOS亞型的分布,神經(jīng)型一氧化氮合酶（nNOS） 誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS） 內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）,一、腎內(nèi)NO的生物合成,nNOS 分子表達(dá): 出球小動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞，腎小球臟層上皮細(xì)胞，弓形動(dòng)脈和小葉間動(dòng)脈的管周神經(jīng)，腎盂上皮下神經(jīng)纖維，髓質(zhì)髓袢升支粗段的部分細(xì)胞群（鼠） nNOS分子及其mRNA： 致密斑（共存區(qū)） 內(nèi)髓部集合管，腎小球，內(nèi)髓髓袢細(xì)段，皮質(zhì)和外髓部集合管和腎血管,一、腎內(nèi)NO的生物合成,eNOS分子表達(dá)：

2、腎小球毛細(xì)血管，入球和出球小動(dòng)脈，腎內(nèi)小動(dòng)脈，以及髓質(zhì)直小血管內(nèi)皮細(xì)胞 eNOS的mRNA ： 腎小球，球前血管，近端小管，髓袢升支粗段和集合管,一、腎內(nèi)NO的生物合成,iNOS分子表達(dá)： 鼠入球小動(dòng)脈？ 集合管中層細(xì)胞？ iNOS的mRNA： 髓袢升支粗段，遠(yuǎn)曲小管，皮質(zhì)集合管和內(nèi)髓部集合管,共性： nNOS和eNOS的同功酶均通過鈣調(diào)蛋白受Ca2+調(diào)節(jié) 由乙酰膽堿，緩激肽，應(yīng)激刺激引起的Ca2+內(nèi)流入神經(jīng)細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞，即可刺激NO的生物合成,一、腎內(nèi)NO的生物合成,（二）腎內(nèi)NO合成的生物調(diào)節(jié),一、腎內(nèi)NO的生物合成,nNOS的合成調(diào)節(jié)： 致密斑細(xì)胞nNOS基因表達(dá)與食鹽攝入量呈反變關(guān)系

3、（Bosse等，1995）。 離體情況下，nNOS催化活性由酶的磷酸化狀態(tài)決定。 （-）蛋白激酶A、蛋白激酶G、蛋白激酶C或Ca2+/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶 （+）神經(jīng)鈣蛋白介導(dǎo)的去磷酸化,在體？,一、腎內(nèi)NO的生物合成,eNOS的合成調(diào)節(jié)： 在體情況下，eNOS基因表達(dá)受胚胎發(fā)育慢性缺氧、長期鍛煉的調(diào)節(jié) 在培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞中，應(yīng)激刺激、氧張力、轉(zhuǎn)化生長因子1、蛋白激酶C、腫瘤壞死因子、溶血磷脂膽堿和細(xì)胞增殖程度，均可調(diào)節(jié)eNOS基因轉(zhuǎn)錄及其mRNA的穩(wěn)定性,一、腎內(nèi)NO的生物合成,iNOS的合成調(diào)節(jié)： 細(xì)胞類型特異性 鼠髓袢升支粗段細(xì)胞中 NF/KB p50/P65 蛋白參與iNOS基因活化

4、髓袢升支粗段和內(nèi)髓部集合管，受低氧誘導(dǎo)基因調(diào)節(jié) 轉(zhuǎn)化生長因子-1，局部調(diào)控,二、NO與腎臟生理學(xué),二、 NO與腎臟生理學(xué),二、NO與腎臟生理學(xué),（一）NO與腎血流動(dòng)力學(xué),NO對腎血流量和局部微循環(huán)具有重要的調(diào)節(jié)作用。NO可明顯舒張隔離灌流的鼠和人腎動(dòng)脈。 NO可能是腎內(nèi)血管緊張性的調(diào)定者,急性全身NOS阻斷（大鼠、狗和人類）： 動(dòng)脈血壓和腎血管阻力呈劑量依賴性增高，腎血漿流量減少，壓力性利鈉； L-精氨酸灌注可減輕這一反應(yīng)。 腎內(nèi)局部或全身應(yīng)用小劑量NOS抑制劑： 在動(dòng)脈血壓不變的情況下，可引起明顯的腎血管收縮反應(yīng)。這一效應(yīng)在緩沖機(jī)制正常的清醒動(dòng)物中也存在。,二、NO與腎臟生理學(xué),腎皮質(zhì)血流量

5、對NO抑制非常敏感，皮質(zhì)血管的血流動(dòng)力學(xué)和電解質(zhì)平衡呈NO依賴性調(diào)節(jié) 腎髓質(zhì)產(chǎn)生NO主要對其局部循環(huán)產(chǎn)生緊張性作用 非升壓劑量的局部NOS抑制可導(dǎo)致腎乳頭血流量顯著降低； 腎間質(zhì)內(nèi)NOS的輕微抑制，不影響髓質(zhì)血流量和局部氧分壓，但可使無效劑量的血管緊張素II、去甲腎上腺素或血管加壓素誘導(dǎo)上述兩參數(shù)下降,二、NO與腎臟生理學(xué),二、NO與腎臟生理學(xué),NOS抑制過程中腎血管收縮的機(jī)制： 腎血管阻力的升高部分由自身調(diào)節(jié)引起 部分是由于NOS抑制時(shí)其它血管活性系統(tǒng)繼發(fā)性改變所致，其中研究最多的是血管緊張素、交感神經(jīng)、內(nèi)皮素的作用,血管緊張素抑制對清醒大鼠L-NAME性腎血流動(dòng)力學(xué)改變影響很小，但在麻醉狀

6、態(tài)下則可阻斷L-NAME引起的系統(tǒng)和腎小球血流動(dòng)力學(xué)改變 可見腎素-血管緊張素系統(tǒng)，只有在應(yīng)激狀態(tài)下才參與急性NOS抑制所引起的腎改變 腎內(nèi)血管緊張素水平逐漸升高的情況下，NO具有保護(hù)性舒血管效應(yīng),二、NO與腎臟生理學(xué),在麻醉大鼠，抑制NOS而未引起血壓變化時(shí)，可潛在地提高腎神經(jīng)活動(dòng)，橫斷脊髓可使這一效應(yīng)消失，由此推測NOS阻斷劑可通過血-腦屏障直接刺激交感中樞。 在清醒動(dòng)物，腎去神經(jīng)支配對急性NOS抑制所致的腎血流動(dòng)力學(xué)反應(yīng)無影響，但可阻斷壓力性利鈉效應(yīng)。,二、NO與腎臟生理學(xué),內(nèi)皮素是一種強(qiáng)效縮血管肽，其受體廣泛分布于腎血管。 內(nèi)皮素受體阻斷可減弱麻醉大鼠對L-NAME的升壓效應(yīng)，而在清醒

7、大鼠則可阻斷約50%的L-NAME升壓效應(yīng),二、NO與腎臟生理學(xué),二、NO與腎臟生理學(xué),（二）NO與腎小球微循環(huán),腎內(nèi)局部應(yīng)用NOS阻斷劑在皮質(zhì)腎小球可優(yōu)先導(dǎo)致入球小動(dòng)脈阻力增加，對出球小動(dòng)脈阻力和腎小球毛細(xì)血管壓影響很小。 局部NOS抑制在髓旁腎單位引起入球、出球小動(dòng)脈阻力同等程度增強(qiáng),在深層腎單位，NO既可調(diào)節(jié)入球小動(dòng)脈的阻力，也可調(diào)節(jié)出球小動(dòng)脈的緊張度。 生理情況下，皮質(zhì)腎單位出球小動(dòng)脈不釋放NO，這可能是允許入球、出球小動(dòng)脈獨(dú)立調(diào)節(jié)其緊張性，從而參與腎小球血流動(dòng)力學(xué)的精細(xì)調(diào)節(jié)機(jī)制,二、NO與腎臟生理學(xué),（三）NO與腎小管的功能,二、NO與腎臟生理學(xué),離體實(shí)驗(yàn)證實(shí)NO可通過抑制Na+-H

8、+交換，Na+-K+-ATP酶和阿米洛利-敏感性Na+通道直接抑制近端小管Na+重吸收。 在髓袢升支粗段細(xì)胞系，NO可通過限制Na+-K+-ATP酶1-亞單位的基因表達(dá)，降低Na+-K+-ATP酶的活性，還能通過cGMP合成抑制Cl-流。 在遠(yuǎn)端腎單位，NO可直接抑制集合管對鈉的重吸收和水的滲透。,三、 長期NOS抑制效應(yīng),三、長期NO抑制效應(yīng),慢性NOS抑制可導(dǎo)致持久的、劑量依賴性高血壓并伴有心血管和腎損傷。 中等劑量L-NAME（5mg/kg/day）持續(xù)應(yīng)用2月可出現(xiàn)高血壓、腎血管收縮，腎小球?yàn)V過率降低、腎小球毛細(xì)血管壓持續(xù)升高、蛋白尿、腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化。 高劑量的L-NAME持續(xù)4-6周，除上述類似變化外還觀察到更嚴(yán)重的腎內(nèi)血管損傷，如小動(dòng)脈管壁明顯增厚和纖維素樣變性，