1、第1章 無(wú)菌操作技術(shù)實(shí)踐章末綜合測(cè)評(píng)(時(shí)間：45分鐘，分值：100分)一、選擇題(共8小題，每小題5分，共40分)1對(duì)無(wú)菌操作轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物的敘述中，正確的是()接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開(kāi)棉塞打開(kāi)棉塞的試管口通過(guò)火焰將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液，蘸取一環(huán)菌液轉(zhuǎn)移到一裝有無(wú)菌培養(yǎng)基的試管中將試管口塞上棉塞接種環(huán)進(jìn)行滅菌ABC D【解析】在無(wú)菌操作轉(zhuǎn)接培養(yǎng)物的過(guò)程中，剛開(kāi)始應(yīng)灼燒接種環(huán)進(jìn)行滅菌，在操作過(guò)程中應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行，轉(zhuǎn)接完成后還應(yīng)對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，以防止培養(yǎng)物擴(kuò)散到環(huán)境中?！敬鸢浮緾2在農(nóng)田土壤的表層自生固氮菌較多。將用表層土制成的稀泥漿接種到特制的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，可將自生

2、固氮菌與其他細(xì)菌分開(kāi)，對(duì)培養(yǎng)基的要求是()加抗生素不加抗生素加氮素不加氮素加葡萄糖不加葡萄糖37 恒溫箱中培養(yǎng)2830 溫度下培養(yǎng)A BC D【解析】自生固氮菌有固氮功能，因此培養(yǎng)基中不需要加氮素；細(xì)菌對(duì)抗生素敏感，因此，不能加抗生素；自生固氮菌是異養(yǎng)型的，應(yīng)加葡萄糖；其生長(zhǎng)繁殖的適宜溫度是2830 。【答案】C3關(guān)于用涂布平板法培養(yǎng)和計(jì)數(shù)土壤中僅以尿素為氮源的微生物的實(shí)驗(yàn)，以下操作不正確的是()A需制備系列濃度梯度的土壤懸液B所選用的培養(yǎng)基中，尿素為唯一氮源C接種時(shí)從濃度最低的土壤懸液開(kāi)始，每個(gè)濃度設(shè)置3個(gè)重復(fù)D涂布平板上形成的每個(gè)菌落，都是由樣品中的單個(gè)個(gè)體形成的【解析】由于待測(cè)樣品往往不

3、易完全分散成單個(gè)個(gè)體，長(zhǎng)成的菌落，也有可能來(lái)源于樣品中的23個(gè)或更多個(gè)個(gè)體。【答案】D4某學(xué)者欲研究被石油污染過(guò)的土壤中的細(xì)菌數(shù)并從中篩選出能分解石油的細(xì)菌。下列有關(guān)操作錯(cuò)誤的是() 【導(dǎo)學(xué)號(hào)：】A利用平板劃線法對(duì)細(xì)菌進(jìn)行計(jì)數(shù)B利用以石油為唯一碳源的培養(yǎng)基篩選能分解石油的細(xì)菌C采用涂布平板法分離菌種D稱(chēng)取土壤和稀釋土壤溶液時(shí)應(yīng)在火焰旁操作【解析】平板劃線法能對(duì)細(xì)菌分離純化但不能計(jì)數(shù)，通常將被石油污染過(guò)的土壤浸出液稀釋后，采用涂布平板法分離分解石油的細(xì)菌菌種，并對(duì)菌種進(jìn)行計(jì)數(shù)；篩選能分解石油的細(xì)菌只能利用以石油為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基；稱(chēng)取土壤和稀釋土壤溶液過(guò)程中的每一步都要在火焰旁操作?！敬鸢浮?/p>

4、A5下面為植物組織培養(yǎng)過(guò)程的示意圖：對(duì)上圖的下列敘述，錯(cuò)誤的是()A將經(jīng)脫分化培養(yǎng)成時(shí)，再植上人造種皮即可獲得人造種子B植物組織培養(yǎng)所依據(jù)的生物學(xué)原理為細(xì)胞的全能性C過(guò)程指植物的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)和生殖生長(zhǎng)階段D的再分化過(guò)程中，誘導(dǎo)生根的激素為生長(zhǎng)素【解析】人工種子是由通過(guò)植物組織培養(yǎng)將離體的植物組織培養(yǎng)成的具有生根發(fā)芽能力的胚狀結(jié)構(gòu)包裹上人造種皮制成的，而不是由愈傷組織包上人造種皮形成的。【答案】A6用高度分化的植物器官、組織或細(xì)胞進(jìn)行組織培養(yǎng)可以形成愈傷組織。下列敘述不正確的是()A該愈傷組織是細(xì)胞經(jīng)過(guò)脫分化和分裂形成的B該愈傷組織的細(xì)胞沒(méi)有全能性C該愈傷組織是由排列疏松的薄壁細(xì)胞組成的D該愈傷組織

5、可以形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結(jié)構(gòu)【解析】植物組織培養(yǎng)的原理是植物細(xì)胞的全能性。植物細(xì)胞只有在脫離了植物體，在一定的外部因素的作用下，細(xì)胞經(jīng)脫分化和分裂形成愈傷組織，才能表現(xiàn)出全能性，由愈傷組織分化形成胚狀體或叢芽，從而形成新的植物體?！敬鸢浮緽7甲、乙、丙是三種微生物，下表、是用來(lái)培養(yǎng)微生物的三種培養(yǎng)基。甲、乙、丙都能在中正常生長(zhǎng)繁殖；甲能在中正常生長(zhǎng)繁殖，而乙和丙都不能；乙能在中正常生長(zhǎng)繁殖，而甲和丙都不能。下列說(shuō)法正確的是()培養(yǎng)基粉狀硫10 gK2HPO44 gFeSO405 g蔗糖10 g(NH4)2SO404 gH2O100 mLMgSO4925 gCaCl205 g注：“”表示培

6、養(yǎng)基中加入了這種物質(zhì)，“”表示培養(yǎng)基中沒(méi)有加入這種物質(zhì)。A甲、乙、丙都是異養(yǎng)型微生物B甲、乙都是自養(yǎng)型微生物，丙是異養(yǎng)型微生物C甲是異養(yǎng)型微生物、乙是固氮微生物、丙是自養(yǎng)型微生物D甲是固氮微生物、乙是自養(yǎng)型微生物，丙是異養(yǎng)型微生物【解析】中缺少N，中缺少有機(jī)物，中營(yíng)養(yǎng)全面。N是微生物生長(zhǎng)的必需元素，每一種微生物正常生長(zhǎng)都需要N，但自己能夠固氮的微生物可以生活在無(wú)氮培養(yǎng)基中。甲能在中生長(zhǎng)繁殖，而乙，丙都不以，說(shuō)明甲是能夠固氮的微生物。乙能在中生長(zhǎng)繁殖，而甲、丙不能，說(shuō)明乙不需要培養(yǎng)基為它的正常生命活動(dòng)提供能源物質(zhì)，則乙為自養(yǎng)型微生物，甲、丙都為異養(yǎng)型微生物?！敬鸢浮緿8抗生素可由微生物產(chǎn)生，具有

7、抑菌作用，能在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散。在篩選產(chǎn)生抗生素的菌種時(shí)，先在瓊脂培養(yǎng)基平板上劃線接種一種從土壤中獲得的甲菌，在27 下培養(yǎng)3 d，形成菌落。然后接種乙、丙、丁三種致病菌(如下圖a)，繼續(xù)在同樣條件下培養(yǎng)3 d，結(jié)果如下圖b。分析結(jié)果，得出的結(jié)論是()a b甲菌產(chǎn)生了抗生素丁菌的生長(zhǎng)被丙菌產(chǎn)生的抗生素抑制乙菌的生長(zhǎng)被甲菌產(chǎn)生的抗生素抑制丙菌產(chǎn)生的抗生素抑制了乙菌的生長(zhǎng)A BC D【解析】由圖可得出，乙、丙、丁三種致病菌不會(huì)產(chǎn)生抗生素，否則靠近乙、丙、丁的甲菌落不能生長(zhǎng)。從圖b來(lái)看，乙菌的生長(zhǎng)被抑制，最可能的原因是甲菌產(chǎn)生了抗生素，此種抗生素只能抑制乙菌的生長(zhǎng)，而對(duì)丙、丁兩種致病菌沒(méi)有影響。【答

8、案】A二、非選擇題(共60分)9(10分)有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐?wèn)題：(1)在篩選過(guò)程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以_為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上。從功能上講，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。(2)純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即_和_。(3)為了篩選出高效菌株，可比較單菌落周?chē)纸馊Φ拇笮。纸馊Υ笳f(shuō)明該菌株的降解能力_。(4)通常情況下，在微生物培養(yǎng)過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌、_和_。無(wú)菌技術(shù)要求實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈_附近進(jìn)行，以避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染。【解析】(1)可以將所需

9、要的微生物從混雜的微生物群中分離出來(lái)的培養(yǎng)基為選擇培養(yǎng)基。欲篩選出能降解原油的菌株，則培養(yǎng)基中應(yīng)只含有原油而無(wú)其他碳源，這樣不能降解原油的細(xì)菌在此培養(yǎng)基上不能生存，能降解原油的細(xì)菌才能在只含原油這一碳源的培養(yǎng)基上生存。(2)分離純化菌種時(shí)，接種的方法有平板劃線法和涂布平板法，其目的都是使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單菌落，以便于純化菌種。(3)降解原油能力越強(qiáng)的菌株，在菌落周?chē)纬傻姆纸馊υ酱蟆?4)實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌(如接種環(huán))、干熱滅菌(如培養(yǎng)皿)和高壓蒸汽滅菌(如培養(yǎng)基)等。無(wú)菌技術(shù)要求整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作都要在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免周?chē)h(huán)境中微生物的

10、污染。【答案】(1)原油選擇(2)平板劃線法涂布平板法(3)強(qiáng)(4)干熱滅菌高壓蒸汽滅菌火焰10(16分)將基因型為AaBb的水稻(具有24條染色體)的葉肉細(xì)胞通過(guò)無(wú)菌操作接入含有營(yíng)養(yǎng)成分全面的培養(yǎng)基的試管中，在一定條件下培養(yǎng)形成試管幼苗，其過(guò)程如下圖所示： 【導(dǎo)學(xué)號(hào)：】(1)圖中的1過(guò)程為_(kāi)，圖中的2過(guò)程為_(kāi)。(2)在形成愈傷組織的過(guò)程中，細(xì)胞必須不斷地從培養(yǎng)基中獲得_、_和小分子有機(jī)物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)如果4是無(wú)病毒植株，則“水稻的某種細(xì)胞”應(yīng)選用_或_細(xì)胞，這種繁殖方式實(shí)際上是_，培養(yǎng)成的植株的基因型為_(kāi)。(4)如果某種細(xì)胞選用的是水稻花粉細(xì)胞，則4稱(chēng)為_(kāi)植株，基因型可能是_，植株特點(diǎn)為

11、_，需用_處理，使其恢復(fù)正常體細(xì)胞染色體數(shù)，對(duì)應(yīng)的基因型為_(kāi)?！窘馕觥?1)植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程為：外植體愈傷組織根、芽植物體。(2)在形成愈傷組織的過(guò)程中，細(xì)胞不能進(jìn)行光合作用，必須從培養(yǎng)基中獲取水、無(wú)機(jī)鹽和小分子有機(jī)物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)根尖或莖尖細(xì)胞不含病毒，因此可用根尖或莖尖通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)獲得脫毒植株，這種繁殖方式屬于無(wú)性生殖，其培養(yǎng)成的新植株的基因型與母本一致。(4)該水稻的基因型為AaBb，可產(chǎn)生四種花粉：AB、Ab、aB、ab，通過(guò)花藥離體培養(yǎng)可獲得四種基因型的單倍體植株：AB、Ab、aB、ab。單倍體植株長(zhǎng)得弱小，且高度不育，用秋水仙素處理后使其染色體加倍后獲得可育植株，

12、對(duì)應(yīng)的基因型有AABB、AAbb、aaBB、aabb。【答案】(1)脫分化再分化(2)水分無(wú)機(jī)鹽(3)莖尖根尖無(wú)性生殖AaBb(4)單倍體aB、ab、Ab、AB植株弱小，高度不育秋水仙素aaBB、aabb、AAbb、AABB11(18分)(2016全國(guó)丙卷)某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用_對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)M(jìn)行梯度稀釋的理由是_。(2)推測(cè)在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有_和_。分離純化時(shí)應(yīng)挑選出_的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌

13、在20 長(zhǎng)期保存時(shí)，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。【解析】(1)分離純化乳酸菌時(shí)，首先需要用無(wú)菌水對(duì)泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)@樣既可避免雜菌污染，又可將乳酸菌分散成單個(gè)細(xì)胞，以便在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌落。(2)乳酸的積累影響乳酸菌的增殖，加入碳酸鈣可以中和乳酸菌代謝(無(wú)氧呼吸)過(guò)程中產(chǎn)生的乳酸，另外，乳酸和碳酸鈣反應(yīng)，進(jìn)而導(dǎo)致碳酸鈣分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鑒別和分離。(3)對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，裝入1 mL甘油后滅菌。將1 mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在20 的冷凍箱中保存。【答案】(1

14、)無(wú)菌水泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落(2)鑒別乳酸菌中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)具有透明圈(3)甘油12(16分)耐高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選了能高效產(chǎn)生耐高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過(guò)程如下圖所示：(1)從用途上來(lái)說(shuō)，號(hào)培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基，僅以淀粉作為_(kāi)源；從物理狀態(tài)上來(lái)說(shuō)，號(hào)培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，配制時(shí)一般加入_作為凝固劑。(2)進(jìn)行過(guò)程的目的是_；過(guò)程所使用的接種方法是_法。(3)、號(hào)培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是_；一般對(duì)配制的培養(yǎng)基采用_法滅菌。(4)部分嗜熱菌在號(hào)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可釋放淀粉酶分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周?chē)?/p>

15、形成透明圈，應(yīng)挑出透明圈_(填“大”或“小”)的菌落，接種到號(hào)培養(yǎng)基上。(5)下圖是采用純化微生物培養(yǎng)的兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖，請(qǐng)分析接種的具體方法。獲得圖A效果的接種方法是_，獲得圖B效果的接種方法是_。一同學(xué)用涂布平板法純化土壤中的細(xì)菌時(shí)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是_，應(yīng)當(dāng)怎樣操作才可避免此現(xiàn)象？_?！窘馕觥?1)篩選特定微生物的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。淀粉酶能催化淀粉分解，故篩選能高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌要以淀粉為唯一碳源。采用平板劃線法接種的是固體培養(yǎng)基，通常用瓊脂作為凝固劑。(2)、過(guò)程為將樣品稀釋后用涂布平板法接種。(3)制備培養(yǎng)基時(shí)先調(diào)pH后滅菌，培養(yǎng)基的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌法。(4)嗜熱菌可產(chǎn)生淀粉酶以分解培養(yǎng)基中的淀粉，在菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈，透明