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文檔簡介

1、實驗九抗 酸 染 色,臨床病原生物學(xué)教研室,一、實驗?zāi)康模?1.掌握抗酸染色的原理和方法 2掌握結(jié)核分支桿菌痰涂片的報告方法。,分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長染色時間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色。 齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。,二、實驗原理：,三、實驗材料： 細(xì)菌：結(jié)核桿菌 染液：石炭酸復(fù)紅液、3%鹽酸酒精、堿性美

2、蘭溶液 其它：接種環(huán)、酒精燈、載玻片等,四、實驗方法： 1、細(xì)菌涂片的制備 1）涂片：20mm*25mm薄涂片或 20mm*15mm厚涂片 2）干燥：自然干燥 3）固定：火焰固定,四、實驗方法： 1、細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備 涂片 干燥 固定 2、染 色,3、油鏡觀察,1）初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱5-10分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。 2）脫色： 3%鹽酸酒精脫色301；用水沖洗。 3）復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染1，用水沖洗后用吸水紙吸干。,五、實驗結(jié)果：,結(jié)核桿菌呈紅色，常堆積成團，排列無序，偶呈分枝狀生長。 背景及非抗酸性細(xì)菌呈蘭色。,六、注意事項：,1、無菌操作 2、涂片厚度要適中 3、固定 4、沖洗 5、染色時間 6、初染加熱的溫度，勿沸騰,準(zhǔn)備,細(xì)菌：卡介苗 染液：抗酸染液（2套/室）

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