科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）1精制益母草生物堿對(duì)兔心肌缺血血流動(dòng)力學(xué)的影響摘要：目的：探討益母草注射液對(duì)心肌缺血血流動(dòng)力學(xué)的作用及其機(jī)制。方法：新西蘭白兔48只平均分成假手術(shù)對(duì)照組，心肌缺血模型組，益母草注射液高劑量組，益母草注射液中劑量組，益母草注射液低劑量組,硝酸甘油(0.33mg/kg)陽(yáng)性藥物對(duì)照組，在左冠狀動(dòng)脈前降支近第一分支處結(jié)扎建立心肌缺血模型，檢測(cè)兔冠脈結(jié)扎后10分鐘和60分鐘藥物對(duì)各項(xiàng)指標(biāo)的影響。結(jié)果：益母草注射液高劑量組兔冠脈結(jié)扎后10分鐘和60分鐘心率減慢，MAP下降，CO降低，LVSP降低，LVEDP升高，RPP下降均十分明顯(P0.01)，優(yōu)于硝酸甘油組。當(dāng)膠原誘導(dǎo)聚集時(shí)，益母草注射液中劑量組和益母草注射液高劑量組的血小板聚集率明顯低于模型對(duì)照組；當(dāng)ADP誘導(dǎo)聚集時(shí)益母草注射液各劑量組的血小板聚集率明顯低于模型對(duì)照組；當(dāng)AA誘導(dǎo)聚集時(shí)，益母草注射液各劑量組的血小板聚集率與模型對(duì)照組相比也有降低趨勢(shì)。結(jié)論：益母草生物堿具有良好的抗心肌缺血作用，其機(jī)制與其明顯改善心肌梗死后心臟的血液動(dòng)力學(xué)低下狀況，抑制血小板聚集作用有關(guān)。關(guān)鍵詞：益母草；心肌缺血；血流動(dòng)力學(xué)科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）2TheeffectofherbaleonuriinjectiononthehemodynamicofrabbitheartmuscleischemiaAbstract:Objective:Toinvestigatetheeffectofherbaleonuriinjectiononthehemodynamicofrabbitheartmuscleischemiaanditsmechanism.Method:Divided48rabbitsintoSHcontrolgroup,MIanaloggroup,HDherbaleonurigroup,MDherbaleonurigroup,LDherbaleonurigroupandNitroglycerincontrolgroup.AmodelofmyocardiacischemicinjurywasestablishedtodetecttheeffectofherbaleonuriinjectionontheindexesoframusdescendensanteriorarteriaecoronariaesinistraeDeligationtreatedwith10minand60min.Results:TheHD-Herbaleonuriinjectiongroupdecreasedheartrate,MAP,CO,LVSP,LVEDPandRPPobviouslyandbetterthenNitroglycerincontrolgroup.whenplateletaggregationderivnedbyCol、AAandADP,therateofplateletaggregationlowerthenanalogcontrolgroup.Conclusions:herbaleonurialkaloidshowedprotectiveeffectsagainstmyocytesischemic,itsmechanismsprobablyassociatewithimprovingbloodkinesicsindexandrestraintingplateletaggregation.Keywords:herbaleonuri；heartmuscleischemia；haemodynamics科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）3前言心肌缺血是心血管疾病的常見病理改變。心臟的缺血性疾病具有發(fā)病急、進(jìn)展快、危害大的特點(diǎn)。心肌缺血可引起心肌代謝功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷，持續(xù)性的心肌缺血可導(dǎo)致心肌壞死，并可進(jìn)一步導(dǎo)致心律失常、心力衰竭12。治療和保護(hù)缺血心肌是目前心血管疾病防治研究的熱點(diǎn)之一34。增加心肌供血、減少心肌耗能是藥物抗心肌缺血的基本原則5。當(dāng)前治療心肌缺血的主要藥物有硝酸酯類、腎上腺素受體阻滯劑、鈣通道拮抗劑等，均通過(guò)擴(kuò)張冠脈，改善心臟和全身的血流動(dòng)力學(xué)，增加心肌供血、減少心肌耗能的達(dá)到治療目的167。益母草，神農(nóng)本草經(jīng)原名茺蔚，為唇形科益母草屬植物益母草LeonurusheterophyllusSweet(Leonurus)的全草,我國(guó)大部分地區(qū)都有分布，具有來(lái)源廣、常規(guī)劑量無(wú)毒副作用的特點(diǎn)，是我國(guó)藥用植物最早、最普遍的一種89。中醫(yī)藥文獻(xiàn)記載其功用為活血、祛瘀、調(diào)經(jīng)、消水,素有“血脈圣藥“經(jīng)產(chǎn)良方”之稱10?，F(xiàn)代藥理研究，益母草具有擴(kuò)張冠脈、增加冠脈血流、溶栓、抗凝、降脂、降血黏度、降低紅細(xì)胞聚集、抑制血小板聚集、改善微循環(huán)、抗氧自由基、減少細(xì)胞內(nèi)鈣超載、興奮子宮、利尿等諸多作用，從而為其用于臨床提供了廣泛的藥理學(xué)基礎(chǔ)111213。益母草的主要化學(xué)成分有生物堿類，二萜類，黃酮類，揮發(fā)油類，微量元素等等，其中生物堿類一直被認(rèn)為是益母草的有效成分，用作質(zhì)量控制的指標(biāo)1415。針對(duì)益母草類制劑在抗心肌缺血臨床運(yùn)用方科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）4面的不足，本研究組已按照中藥注射劑研究的技術(shù)要求和中藥新藥制備工藝研究的技術(shù)要求16171819，通過(guò)不同現(xiàn)代中藥提取方法的研究比較，篩選出益母草生物堿注射液最佳提取工藝，制備出靜脈注射用針劑。本課題旨在按中藥注射劑研究的技術(shù)要求和中藥、天然藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則開展益母草注射液的臨床前藥效學(xué)研究，探討益母草注射液的抗心肌缺血作用及其機(jī)制，為開發(fā)新型具有抗心肌缺血或心血管保護(hù)作用的臨床用藥奠定基礎(chǔ)。1.實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)試劑和儀器1.1.1實(shí)驗(yàn)材料注射用益母草生物堿：自制，本研究組已按篩選的最佳工藝，從益母草粗粉中分離純化出益母草生物堿。硝酸甘油注射液，每1ml含硝酸甘油5mg，由廣州明興制藥廠生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：050505。戊巴比妥鈉（購(gòu)自中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司提供，批號(hào)20020915）。0.9%氯化鈉注射液由北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：03072212。二磷酸腺苷（ADP）二鈉鹽由中國(guó)科學(xué)院生物化學(xué)研究所生產(chǎn)，批號(hào)030906，用生理鹽水配制成1.0mM/L的溶液，4保存?zhèn)溆谩；ㄉ南┧?AA)為FlukaAG產(chǎn)品，臨用時(shí)用1.0mM/LNaOH配科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）5制成鈉鹽，濃度為5.0g/L。膠原（100ug/ml）KOKEN公司產(chǎn)品。1.1.2試驗(yàn)動(dòng)物新西蘭白兔48只，2.0-2.2kg，4月齡，雌雄各半。動(dòng)物置于符合中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量國(guó)家清潔級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室中飼養(yǎng)，室溫20-25，相對(duì)濕度55-70%。1.1.3儀器FA1004型電子天平為上海天平儀器廠產(chǎn)品；SDZ-A1型體外血栓形成儀,江蘇無(wú)錫縣電子儀器廠生產(chǎn)；LBYNJ2型血小板聚集儀，北京生化儀器廠產(chǎn)品；Pclab3808八通道生物醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)，北京微信斯達(dá)科技發(fā)展有限責(zé)任公司。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1實(shí)驗(yàn)分組新西蘭兔48只，雌雄各半，隨機(jī)分為共6組，每組8只，組間兔體重、雌雄無(wú)顯著性差異。（1）假手術(shù)對(duì)照組：予開胸手術(shù)后，不予其它處理。（2）心肌缺血模型組：予以左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎，造梗阻性心肌缺血模型，方法見后。（3）益母草注射液高劑量組：予以左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎和益母草注射液10.0mg/kg靜脈滴注?？粕厴I(yè)論文（設(shè)計(jì)）6（4）益母草注射液中劑量組：予以左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎和益母草注射液2.0mf/kg靜脈滴注。（5）益母草注射液高劑量組：予以左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎和益母草注射液0.4mg/kg靜脈滴注。（6）硝酸甘油陽(yáng)性藥物對(duì)照組：予以左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎和硝酸甘油0.33mg/kg靜脈滴注。1.2.2兔心肌缺血模型的建立靜注戊巴比妥鈉30mgkg麻醉，氣管切開插入導(dǎo)管機(jī)械呼吸；以針形電極插入四肢皮下連續(xù)監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)聯(lián)心電圖；股動(dòng)脈置管監(jiān)測(cè)動(dòng)脈壓。再經(jīng)胸骨正中入胸腔，暴露心臟，分離升主動(dòng)脈，以多普勒測(cè)定升主動(dòng)脈血流(即心排出量)。在左冠狀動(dòng)脈前降支近第一分支處穿引無(wú)損傷縫合線。心尖處用20G動(dòng)脈穿刺針直接穿刺并固定，連接于動(dòng)脈測(cè)壓的同一換能器，以三通轉(zhuǎn)換監(jiān)測(cè)動(dòng)脈血壓和左室壓。操作完成后平穩(wěn)20min。各預(yù)處理組分別開始與益母草注射液或陽(yáng)性對(duì)照藥?kù)o脈滴注處理。將置于左冠狀動(dòng)脈前降支近第一分支處的縫合線套以小橡皮管，收緊橡皮管使血流中斷，供血區(qū)心肌顏色轉(zhuǎn)為暗紫，心電圖示ST段弓背向上抬高大于0.5mV，證實(shí)心臟局部缺血形成，維持60min后放血處死動(dòng)物。1.2.3心臟血液動(dòng)力學(xué)檢測(cè)用Pclab3808八通道生物醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)檢測(cè)動(dòng)物HR（心率）、MAP（平均地脈壓）、CO（心輸出量）左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)和心率收縮壓乘積(RPP)。科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）71.2.4血小板凝集率的檢測(cè)硅化注射器穿刺耳中動(dòng)脈取血，3.8枸櫞酸鈉溶液抗凝(血：抗凝劑=9：1)，200rmin離心8min，取上清部分即富血小板血漿(PRP)，剩余部分2200rmin離心10min，取上清部分即貧血小板血漿(PPP)。PRP中血小板計(jì)數(shù)為4.0105mm3左右。按照Borns比濁法，將盛有200ulPRP及1小磁棒的比濁管置于LBYNJ2血小板聚集儀中，接通聚集儀電源，使之預(yù)熱15min，同時(shí)調(diào)節(jié)聚集儀恒溫旋鈕，使其恒溫在370.1。分別取PRP及PPP各450gl于比濁管中，置于預(yù)熱孔內(nèi)，恒溫孵育5min(370.1)。測(cè)定時(shí)用PPP管調(diào)零，在攪拌情況下加入誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)聚集。所