分子檢測技術(shù)在農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中的應(yīng)用,09碩士 邵曉敏 學(xué)號：21090733066,研究背景,1.農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量問題正在成為全世界關(guān)注的焦點。 2.我國是農(nóng)產(chǎn)品主要生產(chǎn)和消費國之一。農(nóng)產(chǎn)品同時也是我國出口創(chuàng)匯的主要來源之一。隨著世界貿(mào)易一體化的發(fā)展， 農(nóng)產(chǎn)品的安全性在農(nóng)業(yè)經(jīng)濟的發(fā)展中起著舉足輕重的作用， 是影響我國農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的主要因素之一。 3.人們對農(nóng)產(chǎn)品的的檢測的要求。,主要介紹的分子檢測技術(shù),1.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù) 2.酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)（ELISA） 3.生物傳感器 4.基因芯片（gene chips） 技術(shù),1.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù),概念 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)是一種模擬生物體內(nèi)DNA 復(fù)制過程而設(shè)計的在體外對特定DNA 序列進行快速擴增的技術(shù)。 包括實時PCR 技術(shù)、 電化學(xué)發(fā)光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（ECLPCR） 技術(shù)、免疫PCR 技術(shù)、反轉(zhuǎn)錄PCR （RTPCR） 技術(shù)、套式引物PCR 技術(shù)等。,應(yīng)用 1. PCR 技術(shù)廣泛用于轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的檢測。 2. PCR 可有效檢測農(nóng)產(chǎn)品中的病原菌、寄生蟲、病毒等生物污染物。 Meroth 等采用具有乳桿菌群特異性的16S rDNA引物，檢測了不同面包發(fā)酵采用的酸面團，分析了各種面團的發(fā)酵中乳酸菌數(shù)量的變化，證明在整個發(fā)酵過程中占優(yōu)勢的菌類分別為舊金山乳桿菌、橋乳桿菌、約氏乳桿菌、路氏乳桿菌等.,2 酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)（ELISA）,概念 ELISA 是將分子免疫技術(shù)與現(xiàn)代測試手段相結(jié)合而建立的一種微量的測定技術(shù)。此技術(shù)特異性強， 靈敏度高， 被廣泛應(yīng)用于檢測污染物的殘留中。在此基礎(chǔ)上衍生出多種方法 如斑點酶聯(lián)免疫吸附試驗（dotELISA）、親和素生物素系統(tǒng)ELISA （ABCELISA）、雙夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（DSELISA） 等。,技術(shù)原理可用如下三個反應(yīng)式表示：,應(yīng)用 商品檢測試劑盒廣泛應(yīng)用于食品、蔬菜和環(huán)境中的農(nóng)藥殘留的檢測分析， 應(yīng)用范圍非常廣， 可檢測有機磷農(nóng)藥、有機氯農(nóng)藥、氨基甲酸酯類農(nóng)藥等， 檢測硫磷含量靈敏度和特異性佳。,3 生物傳感器,應(yīng)用 1 農(nóng)藥殘留的檢測 例如：乙酰膽堿酯酶和牛血清蛋白通過戊二 醛共價交聯(lián)，固定在氫離子敏場效應(yīng)管的柵極上， 制成膽堿酯酶場效應(yīng)傳感器， 可測出極低濃度的敵敵畏， 抗干擾能力強。,2 抗生素、獸藥殘留的檢測 例如：利用抗磺胺二甲嘧啶單克隆抗體和相應(yīng)抗個體基因型抗體制成光學(xué)傳感器， 可用于檢測動物尿液中磺胺二甲嘧啶。 3 殘留重金屬離子的檢測 例如(1).通過固定化技術(shù)將葉綠素體包埋在光 交聯(lián)的苯乙烯基吡啶聚乙烯醇， 用洋電機測定氧氣量，可在g L 濃度水平下檢測Hg、Pb、Cd、Ni、Cu、Zn等金屬離子。,(2).利用lacZ 基因和arsD 基因在重組大腸桿菌中的融合表達可制成高靈敏度生物傳感器， 檢測重金屬亞銻， 亞銻鹽。 4 真菌、致病菌等的檢測 例如：(1).基于毛細管酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)， 結(jié)合微射流系統(tǒng)， 利用化學(xué)發(fā)光免疫分析， 制成生物傳感器， 可檢測葡萄球菌腸毒素B，大腸桿菌致病菌O157： H7 ，對噬菌體M13 。,(2).免疫親和傳感器已經(jīng)成功應(yīng)用于檢測棉籽、玉米、花生、谷物曲霉菌和A型寄生菌等真菌導(dǎo)致的黃曲霉毒素污染。 (3).利用生物傳感器檢測疫霉菌屬真菌感染馬鈴薯的揮發(fā)性物質(zhì)， 可用于鑒定馬鈴薯樣品的疫霉菌屬真菌感染情況。,4 基因芯片（gene chips） 技術(shù),概念 基因芯片將大量核酸片段以預(yù)先設(shè)計的方式固定在玻片、硅片、尼龍膜等載體上組成密集的點陣排列，通過靶分子與芯片上的探針分子的特異性結(jié)合， 對芯片表面特征識別信號進行檢測分析， 從而判斷樣品中靶分子的性質(zhì)和數(shù)量。 該方法檢測信息通量高和自動化程度高， 一次性可檢測出多個位點突變， 具有很大的發(fā)展?jié)摿Α?應(yīng)用 1.基因芯片廣泛用于農(nóng)產(chǎn)品中致病菌的檢測?；蛐酒捎糜谕瑫r檢測動物性食品中7 種主要致病菌，而且這7 種致病菌的基因芯片雜交檢測靈敏度可達102cfu g， 較經(jīng)典傳統(tǒng)檢測方法及分子生物學(xué)、免疫學(xué)方法特異性強， 準(zhǔn)確率高。 2.基因芯片技術(shù)為病原微生物的研究提供了一個快 速、準(zhǔn)確、大規(guī)模平行處理樣品的技術(shù)平臺,可用于病原微生物鑒定和分型、基因組測序、發(fā)現(xiàn)致病基因、病原微生物與宿主之間的關(guān)系以及尋找藥物靶基因等方面的研究。,不足之處 1.基因芯片也有其不足之處:靶片段與探針的雜交存在錯配現(xiàn)象,靶片段自身二級結(jié)構(gòu)的形成影響到與探針的雜交結(jié)果。 2.昂貴的掃描儀器是限制基因芯片推廣應(yīng)用的重要因素。,總結(jié),隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展和成熟， 新技術(shù)層出不窮， 了解國內(nèi)外最新發(fā)展動態(tài)， 盡可能縮短新術(shù)在檢驗領(lǐng)域中應(yīng)用的周期， 盡快把科學(xué)技術(shù)轉(zhuǎn)化成生產(chǎn)力。在傳統(tǒng)檢測方法的基礎(chǔ)上， 多種不同新的分子診斷技術(shù)綜合交叉運用以進一步提高檢測靈敏性、特異性， 快速、便捷、低成本檢測將是今后相關(guān)研究的一個重要發(fā)展趨勢。,參考文獻,1 湯嬌雯,陳兆波.分子檢測技術(shù)在農(nóng)產(chǎn)品安全檢測中的應(yīng)用研究進展J.食品工程技術(shù).113-116. 2 翟俊輝,宋亞軍,杜宗敏,等通用基因芯片檢測感染性細菌方法的研究J中國公共衛(wèi)生,200