摘要 多糖類物質(zhì)的離子色譜檢測技術(shù)研究 分析化學專業(yè)碩士研究生劉婷 指導教師周光明教授 摘要 離子色譜( i c ) 是高效液相色譜( h p l c ) 的一種，是分析陰離子和陽離子的一種液相色 譜方法。對難以用其他儀器和方法分析的常見陰離子、陽離子、有機酸和有機胺類等組分的分 析，離子色譜法具有選擇性好，靈敏度高，快速，簡便，并可同時測定多組分等的突出優(yōu)點。 基于上述優(yōu)點，離子色譜法自1 9 7 5 年問世以來發(fā)展迅速，已經(jīng)在環(huán)境監(jiān)測、電力、半導體工 業(yè)、食品、石油化工、醫(yī)療衛(wèi)生和生化等領(lǐng)域得到廣泛應用，已有數(shù)十項成為有關(guān)權(quán)威機構(gòu)的 標準方法。鑒于糖類化合物分子具有電化學活性及在強堿溶液中呈離子化狀態(tài)，r o x k l i n 等于 1 9 8 3 年首先報道了用陰離子交換色譜柱分離，脈沖安培檢測器測定糖的新方法( 簡稱h p a e c ) 【i 】。用離子色譜法檢測糖類，尋求操作簡單，結(jié)果準確的檢測體系，值得每一位分析化學學者 進行深入研究。 本文包括兩個部分。第一部分是文獻綜述，這部分結(jié)合多糖的利用價值及提取方法， 評述了近十年離子色譜檢測技術(shù)的發(fā)展以及其它相關(guān)領(lǐng)域在多糖類物質(zhì)檢測中的研究 和應用。第二部分是研究報告。首先研究了綠茶中茶葉多糖的最佳提取方法和離子色譜 檢測茶葉多糖中的2 種單糖的技術(shù)，在建立了高效，便捷的分析方法的同時選擇了最佳 的提取條件。利用溫水浸提綠茶茶葉，超聲輔助乙酸水解綠茶粗多糖，以m e t r o s e p c a r b1 ( 1 5 0 x 4 0m m ) 陰離子交換柱為分離柱，以6 0m m o l ln a o h 溶液為洗脫液，在3 2 的條件下對綠茶粗多糖水解液進行檢測，實現(xiàn)了對綠茶粗多糖中的葡萄糖和甘露糖兩種單糖的 完全分離和定量檢測。在此研究基礎(chǔ)上，對其他不同種類茶葉多糖進行了分析研究，進 一步優(yōu)化實驗條件，由對單純兩種單糖的分析拓展到同時分析檢測四種單糖，取得了良 好的試驗效果，并且打破了多種單糖需要進行梯度淋洗才可實現(xiàn)分離的復雜方法，實現(xiàn) 了固定濃度淋洗液直接分離多種單糖的高效方法?；诖?，將該法的應用延伸到真菌類 和中藥領(lǐng)域，分別檢測了香菇多糖和山藥多糖，取得了良好的實驗效果：從而進一步驗 證了該方法的應用價值。但在以上研究過程中，存在著對多糖水解液果糖檢測方面的不 足，突出表現(xiàn)為靈敏度低、分析時間過長等缺點。為了完善檢測方法，繼續(xù)優(yōu)化實驗條 件，對果糖的檢測方法進行改進，建立快速、高效檢測多糖中的果糖的離子色譜檢測方 法，實驗取得了很好的效果，得到了高的靈敏度和準確度，以及低的檢測限。 一綠茶中茶多糖的提取與離子色譜檢測方法研究 本文在不同浸提條件下提取綠茶粗多糖的基礎(chǔ)上，建立了用高效陰離子交換分離一脈沖安培 兩南大學碩十學位論文 檢測( h p a e p a d ) ，在3 2 的條件下分離測定綠茶茶葉多糖中的葡萄糖和甘露糖2 種單糖的 分析方法。以m e t r o s e pc a r b1 ( 1 5 0 4 0m m ) 陰離子交換柱為分離柱，6 0m m o l l n a o h 溶液為淋洗液，淋洗液流速為1 0m l m i n ，總分析時間為3 5m i n 。在優(yōu)化的分離條件下，葡 萄糖和甘露糖的檢出限分別為o 1 2 5m e ：a 和2 0m e , q - ( 進樣體積2 0 ”l ，峰高定量) 。用2 0m g l 葡萄糖和甘露糖的混標溶液連續(xù)7 次進樣，兩種單糖峰高的相對標準偏差分別為5 7 9 和 1 4 1 5 ，保留時間的相對標準偏差分別為2 0 8 和2 1 9 。樣品測定的回收率為9 4 9 - 9 7 5 。 用所建立的方法快速、有效分離了綠茶茶葉多糖中的葡萄糖和甘露糖，同時確定了茶葉多糖的 最佳提取條件。 二離子色譜法測定各種茶葉中的茶多糖研究 建立了用高效陰離子交換分離一脈沖安培檢測分離測定不同種茶葉多糖中的半乳糖、葡萄 糖、甘露糖和果糖的分析方法。以m e t r o s e pc a r b1 ( 1 5 0 4 0m m ) 陰離子交換柱為分離 柱，以6 0m m o l l - n a o h 溶液為淋洗液在3 2 的條件下將4 種單糖從分離柱上洗脫，淋洗液 流速為1 0m l m i n ，總分析時間為4 5r a i n 。在優(yōu)化的分離條件下4 種單糖的檢出限為0 1 2 5m g l , - - 2 0m g l ( 進樣體積2 0 此，峰高定量) 。用2 0m g l 的半乳糖、葡萄糖、甘露糖和3 0m g l 的果糖混標溶液連續(xù)7 次進樣，峰高的相對標準偏差為5 8 2 - - 1 4 1 9 ，保留時間的相對標準 偏差為2 0 3 2 2 6 。樣品測定的回收率為9 1 8 9 9 3 。用所建立的方法快速、有效分析了 4 種常見茶葉多糖，得到了滿意的檢測結(jié)果。 三香菇多糖和山藥多糖的離子色譜檢測方法研究 建立了離子色譜法分離測定香菇多糖和山藥多糖的分析方法。以m e t r o s e pc a r bl ( 1 5 0 4 0m m ) 陰離子交換柱為分離柱，脈沖安培檢測，以7 0m m o l ln a o h 溶液為淋洗液， 淋洗液流速1 0m l m i n ，總分析時間為3 5m i n 。在優(yōu)化的分析條件下，3 種單糖的檢測限分別 為半乳糖0 1 2 5m g l ，葡萄糖0 5m g l ，甘露糖1 0 m e ：江( 進樣體積2 0 此，峰高定量) ，用3 0m g l 的標準樣品混合溶液連續(xù)進樣6 次，峰高的相對標準偏差為1 7 9 - - , 3 5 2 ，保留時間的r s d 為 3 0 7 3 2 9 ，樣品測定的回收率為9 6 3 - - 9 9 5 。運用上述方法分離檢測香菇多糖和山藥多 糖，得到了良好的分離效果和較高的檢測靈敏度，分析結(jié)果令人滿意。 四離子色譜法檢測多糖水解液中果糖的研究 建立了陰離子交換分離一脈沖安培檢測分析檢測多糖水解液中的果糖的離子色譜方法，并且 分別討論了峰高和峰面積兩種不同分析定量方法的準確度。用m e t r o s e pc a r b l ( 1 5 0 4 0 m m ) 陰離子交換柱為分離柱，以1 0 0m m o l l n a o h 溶液為淋洗液，流速為1 0 m l m i n ，總分析 時間為1 3m i n 。在優(yōu)化的色譜條件下，果糖的最低檢出限為0 4m g l ( 進樣體積2 0 止) 。用1 0 m e t 果糖標準溶液連續(xù)進樣7 次，峰高的相對標準偏差為1 6 4 。峰面積的r s d 為3 4 3 ，保留 時間的r s d 為0 3 6 。樣品的加標回收率為9 4 6 9 6 1 ( 峰高定量) 和9 3 2 9 5 6 ( 峰面積 定量) 。用所建立的方法快速、準確的分析了三種茶葉多糖水解液，分析結(jié)果令人滿意。 關(guān)鍵詞：離子色譜脈沖安培檢測多糖茶葉香菇山藥 i i a b s t r a c t 皇曼曼曼曼曼曼曼曼曼蔓曼曼曼皇曼曼曼曼曼i_ l l i i ! 鼉皇皇曼皇曼 s t u d i e so fd e t e c t i n gp o l v s a c c h a r i d e sw i t hi c s p e c i a l i t y ：a n a l y t i c a lc h e m i s t r y p o s t g r a d u a t e ：l i ut i n g t u t o r ：p r o f z h o ug u a n g m i n g a bs t r a c t i o nc h r o m a t o g r a p h yi sab r a n c ho ft h eh i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h ya n di t i sal i q u i d c h r o m a t o g r a p h ym e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no ft h ea n i o n sa n dc a t i o n s i ch a sg o o ds e l e c t i v i t y , h i 曲s e n s i t i v i t y , r a p i d i t y , s i m p l i c i t ya n dc a l l d e t e c tv a r i o u sc o m p o n e n t ss i m u l t a n e o u s l yf o rt h e d e t e r m i n a t i o no ft h ec o m m o nc a t i o n sa n da n i o n s ，t h eo r g a n i ca c i d sa n da m i n e sw h i c hw e r ed i f f i c u l t t od e t e c t e db yo t h e ra n a l y t i c a lm e t h o d s b a s e do nt h e s ea d v a n t a g e s ，s i n c e19 7 5i c h a sar a p i d d e v e l o p m e n ta n dh a sb e e nw i d l yu s e di nm a n yf i e l d s ，s u c ha se n v i r o n m e n t a lm o n i t o r i n g ，e l e c t r i c p o w e r , s e m i c o n d u c t o r , f o o d s ，p e t r o l e u ma n dc h e m i c a li n d u s t r y , m e d i c a la n dh e a l t h ，b i o c h e m i s t r y a n ds oo n a tt h em e a n t i m et h e r ea r ea k e a d yi nd o z e n so fi cm e t h o d sb e c o m et h es t a n d a r dm e t h o d f o rt h ea u t h o r i t y g r o u n do nt h es t a t eo fi o n i z a t i o ni na l k a l ia n dt h ee l e c t r o c h e m i c a la c t i v i t yo ft h e s u g a r s ，r o x k l i nh a dr c p o r t e dt h em e t h o dt h a t u s et h ea n i o ne x c h a n g ec o l u m na n dp u l s e d a m p e r e m e t r i cd e t e c t i o nt od e t e r m i n e dt h ep o l y s a c c h a r i d e si n1 9 8 3 d u et oi t ss i m p l ym a n i p u l a t ea n d a c c u r a t l yr e s u l t s ，u s i n gi cf o rd e t e r m i n i n gs u g a r sd e s e r v e sp e o p l e sc o n c e ma n ds t u d y t h et h e s i sc o n s i s t so ft w op a r t s o n ei sar e v i e wr e l a t e dt ot h ea p p l i c a t i o na n dt h ee x t r a c t i o no f t h ep o l y s a c c h a r i d e s ，a n dm a k e sa ne v a l u a t i o no nt h ed e v e l o p m e n to ft h ei cd e t e c t i o nt e c h n o l o g ya n d t h eo t h e rf i e l d s d e t e c t a t i o ni nr e c e n tt e ny e a r s t h eo t h e ri sar e s e a r c hr e p o r tw h i c hi sc o m p o s e do f f o u rc o m p o n e n t sa sf o l l o w s f i r s to fa l l ，d ot h er e s e a r c ho nt h ee x t r a c t i o na n dt h ed e t e r m i n a t i o no f g l u c o s ea n dm a n n o s ew h i c ha r et h et w ok i n d so ft e ap o l y s a c c h a r i d e si ng r e e nt e aw i t hi ct e c h n o l o g y af a s t ，s i m p l em e t h o dw a se s t a b l i s h e da n dt h eb e s te x t r a c t ec o n d i t i o nw a sc h o s e na tt h es a n l et i m e u s i n gt h ew a r n lw a t e rt od i s t i l lt h eg r e e nt e aa n du l t r a s o u n dc o m p n e n tw i t ht h eh a ct oh y d r o l y z e t h et e ap o l y s a c c h a r i d e s ，t a k et h em e t r o s e pc a r b i ( 1 5 0 x 4 0m m ) a n i o ne x c h a n g ec o l u m na st h e c h r o m a t o g r a p hi cs e p a r a t i o n ，a t3 29 cu s i n gt h e6 0 m m o l ln a o ha st h em o b i l ep h a s e t h eg l u c o s e a n dt h em a n n o s ew e r et o t a l l ys e p a r a t e da n dd e t e r m i n e d c o n s i d e r a t i o no ft h et o pr e s e a r c h ，a p p l y i n g t h i ss y s t e mt ot h ef o u rk i n d so ft e a s ，i m p r o v i n gt h ec o n d i t i o n ，i n l a r g et h ea p p l i c a t i o nf r o mt h eo n l y t w om o n o s a c c h a r i d e st of o u rk i n d so fm o n o s a c c h a r i d e s ，a f t e rt h a tg o o dr e s u l bw o r eb eg o a e n t h i s m e t h o db r o k et h eu s u a lm e t h o dt h a tn e e dg r a d i e n tm o b i l ep h a s e ，o n l yn e e do n ef i x e df l o wl i q u i d w h i c hc a ne a s i l y s e p a r a t e dt h ep o l y s a c c h a r i d e s t h e na p p l y t h i sm e t h o dt od e t e r m i n et h e p o l y s a c c h a r i d e sw h i c ha r ed i s t r a c t e df r o mt h em u s h r o o ma n dt h ec o m m o n y a nr h i z o m e ，g o o d i i i 兩南大學碩十學位論文 r e s u l t sw e r eg o r e na n dt h em e t h o dw a sb eo p t i m i z e d b u ti nt h e s er e s e a r c h e s ，t h e r ea r ea l s os o m e d i s a d v a n t a g e s ，s u c ha st h ed e t e r m i n a t i o no ft h ef r u c t o s e ，c l e a r l ym a n i f e s ta st h el o ws e n s i t i v i t ya n d t h el o n gd e t e r m i n et i m et h a tc o s t f o rt h ed e v e l o p m e n to ft h em e t h o d ，g oo nt o i m p r o v et h e c o n d i t i o n ，a n daf a s t ，a c c u r a t em e t h o df o rd e t e r m i n i n gf r u c t o s eb yi cw a se s t a b l i s h e dw i t hah i g h a c c u r a c ya n dl o wd e t e c t i o nl i m i t e 1 t h es t u d i e so ft h ee x t r a c t i o n a n da n dt h ei o nc h r o m a t o g r a p h yd e t e r m i n a t i o no ft e a p o i y s a c c h a r i d e si ng r e e nt e a am e t h o df o rd e t e r m i n et e ap o l y s a c c h a r i d e so fg l u c o s ea n dm a r m o s ei ng r e e nt e ab yh i g h p e r f o r m a n c ea n i o ne x c h a n g ew i t hp u l s e da m p e r e m e t r i cd e t e c t i o nw a se s t a b l i s h e d ，b a s e do nt h e d i f f e r e n td i s t i l lm e t h o d s t h ec h r o m a t o g r a p hs e p a r a t i o nw a se s t a b l i s h e do nm e t r o s e pc a r b1 ( 15 0 x 4 0m m ) a n i o ne x c h a n g ec o l u n m ，u s i n g6 0m m o l ln a o ha t1 0m l m i ni nf l o wr a t e t h e t o t a la n a l y s i st i m ei s3 5m i n t h ed e t e c t i o nl i m i t so fo 1 2 5m g l - 2 0m e c l ( 2 0 此i n j e c t i o n ，u s i n g t h ep e a kh e i g h tf o rt h eq u a n t i t a t i v ea n a l y s i s ) w e r ea c h i e v e du n d e rt h eo p t i m a lc o n d i t i o n s t h er s d s o fp e a kh e i g h tf o rt h es e v e nc o n s e c u t i v ed e t e r m i n a t i o n so f2 0m g lg l u c o s ea n dm a n n o s ew e r e 5 7 9 a n d1 4 15 r e s p e c t i v e l y , a n dt h er s d so fr e s e r v et i m ew e r e2 0 8 a n d2 1 9 t h er e c o v e r y p e r c e n t a g e so ft h es a m p l ed e t e c t i o nw e r e9 4 9 0 曠9 7 5 g l u c o s ea n di n a n n o s ew e r eb ed e t e r m i n e d f a s ta n de f f e c t i v e l y , a tt h em e a n t i m e ，t h eb e s td i s t i l lc o n d i t i o nw a sb ec h o s e n 2 t h ed e t e r m i n a t i o no ft e ap o i y s a c c h a r i d e sw i t hi o nc h r o m a t o g r a p h y am e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no ft e ap o l y s a c c h a r i d e so fg a l a c t o s e ，g l u c o s e ，m a n n o s ea n df r u c t o s e b yh i g hp e r f o r m a n c ea n i o ne x c h a n g ew i mp u l s e da m p e r e m e t r i cd e t e c t i o nw a se s t a b l i s h e d t h e c h r o m a t o g r a p hs e p a r a t i o nw a se s t a b l i s h e do nm e t r o s e pc a r b1 ( 1 5 0 x 4 0m m ) a n i o ne x c h a n g e c o l u m n ，u s i n g6 0m m o l ln a o ha t1 0m l m i ni nf l o wr a t ea n da t3 2 。c t h et o t a la n a l y s i st i m ei s 4 5m i n t h ed e t e c t i o nl i m i t so f0 12 5r a g l - - 2 0m g n ( 2 0 “l(fā)i n j e c t i o n ，u s i n gt h ep e a kh e i g h tf o rt h e q u a n t i t a t i v ea n a l y s i s ) w e r ea c h i e v e du n d e rt h eo p t i m a lc o n d i t i o n s t h er s d so fp e a kh e i g h tf o rt h e s e v e nc o n s e c u t i v ed e t e r m i n a t i o n so f2 0m g lg a l a c t o s e ，g l u c o s e ，n l a n l l o s ea n d3 0m g lf r u c t o s e w e r e5 8 2 0 曠1 4 1 9 a n dt h er s d so fr e s e r v et i m ew e r e2 0 3 0 曠2 2 6 t h er e c o v e r yp e r c e n t a g e s o ft h es a m p l ed e t e c t i o nw e r e9 1 8 9 9 3 f o u rk i n d so ft e ap o l y s a c c h a r i d e sw e r ef a s ta n d e f f e c t i v e l yd e t e r m i n e d ，a n dt h er e s u l t so ft h ed e t e r m i n a t i o nw e r es a t i s f y i n g 3 s t u d i e so ft h ed e t e r m i n a t i o no ft h el e n t i n a na n dt h ed i o s c o r e a o p p o s i t ap o l y s a c c h a r i d e sb y i c t h i sa r t i c l ea p p l i e st h eu s e do ft h ei ct e c h n o l o g yt ot h ef u n g u sa n dc h i n e s et r a d i t i o n a lm e d i c i n e s i v a b s t r a c t f i e l da n daf a s td e t e r m i n i n gm e t h o dh a sb e e ne s t a b l i s h e d n 豫c h r o m a t o g r a p hs e p a r a t i o nw a s e s t a b l i s h e dm e t r o s e pc a r b1 ( 1 5 0 x 4 0m m ) a n i o ne x c h a n g ec o l u m n ，w i t hp u l s e da m p e r e m e t r i c d e t e c t i o n u s i n g7 0m m o l ln a o ha t1 0m l m i ni nf l o wr a t e t h et o t a la n a l y s i st i m ei s3 5 m i n t h e d e t e c t i o nl i m i t sw a so 1 2 5 1 0m e l ( 2 0 此i n j e c t i o n ，u s i n gt h ep e a kh e i g h tf o r 齜q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s ) w e r ea c h i e v e du n d e rt h eo p t i m a lc o n d i t i o n s t h er s d so fp e a kh e i g h tf o rs i xc o n s e c u t i v e d e t e r m i n a t i o n so f3 0m g ls t a n d a r ds a m p l ew e r e1 7 9 3 5 2 ，a n dt h er s d so fr e r v et i m ew e r e 3 0 7 - 一3 2 9 t h er e c o v e r yp e r c e n t a g e so ft h es a m p l ed e t e c t i o nw e r e9 6 3 * o , - - 9 9 5 1 1 l es y s t e m w a sa p p l i e df o rt l l ed e t e r m i n a t i o no fl e n t i n a na n dd i o s c o r e a o p p o s i t a ，g o o ds e p a r a t i o na n dh i g h d e t e c t i o ns e n s i t i v i t yw e r ea c h i e v e d ，a n dt h er e s u l t so ft h ed e t e r m i n a t i o nw e r es a t i s f y i n g 4 t h ed e t e r m i n a t i o no f t h ef r u c t o s eb yi c am e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no ff r u c t o s ei nh y d r o l y z i n gp o l y s a c c h a r i d e sb yh i g hp e r f o r m a n c ea n i o n e x c h a n g ew i t hp u l s e da m p e r e m e t r i cd e t e c t i o nw a se s t a b l i s h e d a n dt h ea c c u r a c yt h a tu s et h ep e a k h e i g h ta n dp e a ka r e af o rq u a n t i t a t i v ea n a l y s i sw e r ed i s c u s s e d t h ec h r o m a t o g r a p hs e p a r a t i o nw a s e s t a b l i s h e do nm e t r o s e pc a r1 ( 1 5 0 x 4 0m m ) a n i o ne x c h a n g ec o l u m n ，u s i n g1 0 0m m o l ln a o h a t1 0m l m i ni nf l o wr a t e t h et o t a la n a l y s i st i m ei s13 m i n t h ed e t e c t i o nl i m i t so fo 4m g l ( 2 0 i t l i n j e c t i o n ) w a sa c h i e v e du n d e rt h eo p t i m a lc o n d i t i o n s t h er s d so fp e a kh e i g h tf o rs e v e n c o n s e c u t i v ed e t e r m i n a t i o no f1 0m j 班f r u c t o s ew a s1 6 4 ，t h er s d so fp e a ka r e a3 4 3 ，a n dt h e r s d so fr e s e r v e t i m e0 3 6 t h e r e c o v e r yp e r c e n t a g e s o f s a m p l e d e t e c t i o nw e r e 9 4 6 9 6 1 ( n s i n gp e a kh e i g h t ) a n d9 3 2 9 5 6 ( u s i n gp e a ka r e a ) t h r e ek i n d so ft e a p o l y s a c c h a r i d e sw e r ef a s ta n de f f e c t i v e l yd e t e r m i n e d ，a n dt h er e s u l t so ft h ed & e r m i n a t i o nw e r e s a t i s f y i n g k e y w o r d s ：a n i o ne x c h a n g e ，p u l s e da m p e r e m e t r i ed e t e c t i o n ，p o l y s a c c h a r i d e ，t e a ， m u s h r o o m , d i o s c o r e ao p p o s i t a v 獨創(chuàng)性聲明 學位論文題目：壘超婁塹廈數(shù)離壬魚譜拴測技盔盈究 本人提交的學位論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。論 文中引用他人已經(jīng)發(fā)表或出版過的研究成果，文中已加了標注。 學位論文版權(quán)使用授權(quán)書 本學位論文作者完全了解西南大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，有權(quán)保 留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。 本人授權(quán)西南大學研究生部可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進 行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存、匯編學位論文。 ( 保密的學位論文在解密后適用本授權(quán)書，本論文：口不保密， 口保密期限至年月止) 。 學位論文作者簽名：主、1 薅 導師簽名：協(xié)鉑 簽字日期： 壓印年爭月7 日 簽字日期：2 0 0 9 年4 月2 7 日 第一部分文獻綜述 皇曼曼皇曼皇曼曼曼曼蔓曼曼曼曼曼量曼曼鼉曼鼉曼曼曼曼曼! 蔓! ! 曼! 曼曼曼鼉曼曼皇鼉 i 曼i i 曼曼笪! 曼曼曼皇詈曼曼皇曼蔓曼曼曼曼曼曼皇曼篡皇曼寡 第一部分文獻綜述 - 。j l - - j l - 一j 予舌 糖類是自然界中存在最多的有機化合物，也是重要的生物高分子化合物和信息物質(zhì)。多糖 分布廣泛，在高等植物、細菌、真菌、藻類以及動物體內(nèi)含量豐富。2 0 世紀6 0 年代以來，人 們逐漸發(fā)現(xiàn)多糖具有復雜多樣的生物活性和功能【2 - 1 0 1 ，如多糖有免疫調(diào)節(jié)功能可作為廣譜免疫 促進劑，作為藥物可以治療風濕病，慢性病毒性肝炎，癌癥等；還具有抗病毒，抗感染，抗輻 射，抗凝血，降血糖，降血脂，消除氧化自由基，促進核酸與蛋白質(zhì)的生物合成等作用。多糖 的分析方法也有很多，且日益受到人們的關(guān)注和研究。 二多糖類的簡介及提取和分析方法 1 多糖類化合物的定義和分類 多糖是由多個單糖分子縮合、失水而成，是一類分子機構(gòu)復雜且龐大的糖類物質(zhì)。 凡符合高分子化合物概念的碳水化合物及其衍生物均稱為多糖。有由一種類型的單糖組 成的葡萄糖、甘露聚糖、半乳聚糖等。由二種以上的單糖組成的雜多糖，含有氨基糖的 葡糖胺葡聚糖等，在化學結(jié)構(gòu)上實屬多種多樣。就分子量而論，有從0 5 萬個分子組成 的到超過1 0 6 個的多糖。由糖苷鍵結(jié)合的糖鏈，至少要超過1 0 個以上的單糖組成的聚 合糖才稱為多糖。比1 0 個少的短鏈的稱為寡糖。不過，就糖鏈而論即使是寡糖，在寡 糖上結(jié)合了蛋白質(zhì)和脂類的，就整個分子而論，如果是屬于高分子，則從廣義上來看也 屬于多糖，因此特稱為復合多糖或復合糖質(zhì)。 2 多糖的提取方法 多糖為大分子化合物，易溶于水，通常采用水提醇沉法 1 1 】，但耗時較長，且提取效率不 高。為了提高多糖的提取效率，在水提醇沉法的基礎(chǔ)上發(fā)展了堿提取法1 0 1 ，酸提取法【1 舶。此 兩種方法在大大提高多糖提取率的同時，由于多糖不耐酸堿，因此會使部分多糖分解，也存在 著一定的不足。 謝紅蒯1 3 】等，利用酶法提取香菇多糖，將香菇5 0 0g ，粉碎，加適量水，加入1 5 中性蛋 白酶在5 0 c 和p h 4 8 條件下酶解6 0m i n ，加水至1 0l ，然后升溫至9 5 c ，使生物酶失活，在 9 5 。c 溫度下藥物提取器中恒溫提取2h ，濾布過濾，收集濾液。酶解法可以大大提高多糖的提 取效率，并且降低蛋白質(zhì)含量。但藥品價格較貴，溫度控制嚴格，操作成本較高。 現(xiàn)發(fā)展出用超聲波和微波輔助多糖提取法。李俊【1 4 】等，利用超聲波輔助提取羅漢果多糖， 取干燥、粉碎的羅漢果1 0 0g 根據(jù)實驗條件加入5 0 c 熱水，超聲波提取3 次，每次5m i n ，合 并各次提取液，減壓濃縮；往濃縮液中加入9 5 乙醇使羅漢果多糖沉淀，高速離心1 5m i n 得 到沉淀，用丙酮洗滌5 次，在5 0 c 下冷凍干燥，得羅漢果粗多糖。經(jīng)過實驗證明，超聲波輔 兩南大學碩十學位論文 量曼曼曼曼鼉曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼! ! 曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼! 曼曼曼曼曼曼曼曼! ! 曼! 曼曼曼曼曼曼! 皇! 曼曼曼曼曼曼曼皇曼曼皇曼曼曼量曼曼皇曼曼曼曼鼉曼皇曼曼曼量! 曼曼曼皇曼曼曼曼曼曼! 曼曼曼曼曼曼篁 助提取多糖明顯提高多糖的提取率。微波輔助提取是利用微波能的加熱效應來加速溶劑對嘲體 樣品中目標化合物的提取的新技術(shù)。鄧永智【1 5 】等利用微波輔助提取法通過正交實驗法從海水 小球藻中提取多糖，在7 0 。c ，功率為6 0 0w ，提取時間為3 0m i n 的條件下海水小球藻中的多 糖可以得到較好的提取。超聲波和微波輔助提取多糖操作簡單，且不會引入雜質(zhì)，是很好的多 糖提取方法。 3 多糖的分析方法 3 1 多糖的含量分析 由于糖類具有還原性，在多糖的定量測定方面可以根據(jù)糖的還原性進行測定，也可將糖轉(zhuǎn) 化成為糖醛衍生物進行測定。 經(jīng)典的多糖測定方法為苯酚一硫酸法1 6 1 和葸酮一硫酸法【1 7 1 ，均以無水葡萄糖為對照品，分 光光度法測定，計算含量。這兩種方法快速、方便、準確，但這兩種測定方法對有色樣品都不 理想，苯酚一硫酸法受樣品顏色的影響更大，因此常多用蒽酮一硫酸法測定有色樣品的總糖含量。 汪東風n 胡利用葸酮一硫酸法測定同一品種的紅茶、綠茶和烏龍茶的多糖含量，結(jié)果分別為 o 8 5 0 o ：t ：0 0 1 ，1 4 l 士o 0 6 ，和2 6 3 - - 0 2 7 ，傅博強掣1 9 1 認為這一結(jié)果偏低，主要是以葡 萄糖作標準曲線的原因，并提出以校正因子修正測定結(jié)果，同時測定了江西獒源的紅茶、綠茶 和烏龍茶的茶多糖含量。分別為3 一3 5 、4 1 7 - 6 3 5 、3 1 0 - - - 3 5 3 。比較兩種計算方法 的結(jié)果，相差很大，一方面是因品種、加工方法等的差異導致的，另一方面是因為用作計算校 正因子的茶多糖為非純品，使得校正因子偏大而導致的。 最近有學者比較研究了苯酚一硫酸法和間接碘量法晗們測定靈芝多糖，間接碘量法可分別測 定樣品中總糖和還原糖的含量，消除了樣品還原性雜質(zhì)的干擾，所測結(jié)果更接近實際多糖含量。 通過改進間接碘量法，使滴定過程不需要在沸騰狀態(tài)下進行，從而除去了溫度條件對滴定結(jié)果 的干擾，使反應更易控制。間接碘量法具有干擾少準確度高的特點，但與苯酚一硫酸法相比， 操作過程較為煩瑣。 多糖含量的測定還有3 ，5 一二硝基水楊酸( d i n s ) 比色法，該方法操作簡單，快速，靈敏度 高，雜質(zhì)干擾較小。王紅英2 u 等利用該法測定麥冬多塘含量，精確度高，重現(xiàn)性好。是一種 可取的多糖常規(guī)測定方法。 3 2 多糖的組分分析 多糖組分的分離測定方法目前主要有高效液相色譜法( h p l c ) ，氣相色譜法( g c ) ，薄層 色譜法( t l c ) ，高效毛細管電泳法( h p c e ) 等。 楊興斌【2 2 】等采用卜苯基一3 甲基一5 一吡唑啉酮( p m p ) 柱前衍生化反相高效液相色譜法法， 建立了9 種常見單糖的分離模式，并成功地用于當歸多糖的單糖組成分析，具有良好的重現(xiàn)性， 結(jié)果表明，當歸多糖由甘露糖，鼠李糖，葡萄糖醛酸，半乳糖醛酸，葡萄糖，半乳糖及阿拉伯 2 第一部分文獻綜述 糖7 種單糖組成，其摩爾比為0 5 7 ：1 0 0 - o 1 3 ：3 0 6 ：8 1 6 ：7 1 7 ：1 2 6 9 。該方法靈敏快速， 準確，方便，可在線大批量分析。 鄧永智【1 5 1 等，在m s 參數(shù)v f 5 m s 毛細管色譜柱( 3 0m x 0 2 5m m 美國v a r i a n 公司) ；進 樣口溫度2 8 0 ；柱箱起始溫度1 2 0 ，3 c m i n 至2 1 0 ，保持4r a i n ；載氣為高純氦氣，流 速1 0m l m i m 離子化模式為e i - a u t o ，離子化能量7 0e v 離子阱溫度1 8 0 c ；接口溫度2 8 0 c ； 質(zhì)量掃描范圍4 0 5 5 0a m l l 的條件下，利用氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法分析了海水小球藻多糖的單糖 組成。 顏軍 2 3 】等通過斑點分離度，清晰度，有無拖尾現(xiàn)象及展層時間等方面，利用薄層色譜法 快速分析了多糖的單糖組成，通過實驗確定了適合的展開劑為展開系統(tǒng)( 乙酸乙脂：吡啶：無 水乙醇：水= 8 ：2 ：1 ：2 ) ，合適的顯色劑為苯胺一二苯胺磷酸顯色劑。 耿越 2 4 1 等采用高效毛細管電泳法測定玉米花粉多糖中單糖的組成，樣品經(jīng)水解后，經(jīng)儀一 萘胺衍生化，電泳條件為：緩沖液為7 5m m o l l 硼砂溶