一、利用紫外光譜測定黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)大多數(shù)黃酮類化合物在甲醇中的紫外吸收光譜由兩個主要吸收帶組成。出現(xiàn)在300400nm之間的吸收帶稱為帶，出現(xiàn)在240280nm之間的吸收帶稱為帶。不同類型的黃酮化合物的帶或帶的峰位、峰形和吸收強(qiáng)度不同，因此從紫外光譜可以推測黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)類型。結(jié)構(gòu)類型峰位（nm）組內(nèi)區(qū)別組間區(qū)別帶帶（峰位）（峰強(qiáng)）黃酮310350250280帶不同、皆強(qiáng)黃酮醇350385250280異黃酮310330（肩峰）245275帶不同弱強(qiáng)二氫黃酮（醇）300330（肩峰）275295查耳酮340390230270（低強(qiáng)度）帶不同強(qiáng)弱橙酮380430230270（低強(qiáng)度）當(dāng)向黃酮類化合物的甲醇（或乙醇）溶液中分別加入甲醇鈉（naome）、乙酸鈉（naoac）、乙酸鈉-硼酸（naoac-h3bo3）、三氯化鋁或三氯化鋁-鹽酸（alcl3/hcl）試劑能使黃酮的酚羥基離解或形成絡(luò)合物等，導(dǎo)致光譜發(fā)生變化。據(jù)此變化可以判斷各類化合物的結(jié)構(gòu)，這些試劑對結(jié)構(gòu)具有診斷意義，稱為診斷試劑。黃酮和黃酮醇類（一）黃酮、黃酮醇類在甲醇中的uv光譜特征黃酮或黃酮醇的帶是由b環(huán)桂皮?；到y(tǒng)的電子躍遷所引起的吸收，帶是由a環(huán)的苯甲?；到y(tǒng)的電子躍遷所引起的吸收。黃酮和黃酮醇的uv光譜圖形相似，僅帶位置不同，黃酮帶位于304350nm，黃酮醇帶位于358385nm。利用帶的峰位不同，可以區(qū)別這兩類化合物。黃酮、黃酮醇的b環(huán)或a環(huán)上取代基的性質(zhì)和位置不同將影響帶或帶的峰位和形狀。例如，7和4位引入羥基、甲氧基等含氧取代基，可引起相應(yīng)吸收帶向紅位移。又如3-或5-位引入羥基，因能與c4o形成氫鍵締合，前者使帶向紅位移，后者使帶、帶均向紅位移。b環(huán)上的含氧取代基逐漸增加時，帶向紅位移值（nm）也逐漸增加，但不能使帶產(chǎn)生位移。有時（例如3，4-位有2個羥基或2個甲氧基或亞甲二氧基）僅可能影響帶的形狀，使帶歧分為雙峰或1個主峰（b位于短波處）和1個肩峰（sh）或彎曲（a位于長波處）。a環(huán)上的含氧取代基增加時，使帶向紅位移，而對帶無影響，或影響甚微（但5-羥基例外）。黃酮或黃酮醇的3-，5-或4-羥基被甲基化或苷化后，可使帶向紫位移，3-oh甲基化或苷化使帶（328357nm）與黃酮的帶的波長范圍重疊（且光譜曲線的形狀也相似），5-oh甲基化使帶和帶都向紫位移515nm，4-oh甲基化或苷化，使帶向紫位移310nm。其他位置上的羥基取代對甲醇中的紫外光譜幾乎沒有影響。（二）利用診斷試劑對黃酮、黃酮醇類化合物uv光譜的影響檢出羥基位置1甲醇鈉（naome），主要是判斷是否有4-oh，3、4二oh或3、3、4三oh。2乙酸鈉，較為突出的是判斷是否有7-oh。舉例說明3乙酸鈉/硼酸主要判斷a環(huán)或b環(huán)是否有鄰二酚羥基（5，6-二oh除外）。舉例說明4三氯化鋁及三氯化鋁/鹽酸，為判斷有無鄰二酚羥基，3-oh、5-oh提供信息。（三）異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類在甲醇中的uv光譜特征這三類化合物都有苯甲酰系統(tǒng)，而無桂皮酰結(jié)構(gòu)，所以它們的紫外光譜都有強(qiáng)的帶吸收，異黃酮帶吸收在245270nm，而二氫黃酮和二氫黃酮醇的帶在270295nm，一般只受a環(huán)的含氧取代基的影響，a環(huán)含氧取代基數(shù)增加，吸收峰向紅位移。（四）利用診斷試劑對異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類化合物的uv光譜的影響判斷羥基位置1甲醇鈉帶向紅位移，示a環(huán)上有羥基。如有5，6，7-或5，7，8-三羥基或3，4-二羥基，則吸收帶將隨放置的延長而逐漸衰退。二氫黃酮、二氫黃酮醇帶向紅位移的大小取決于是否有游離的5-oh。2乙醇鈉乙醇鈉使7-羥基異黃酮的帶向紅位移620nm，但6-位有含氧取代基時，乙醇鈉幾乎不能使帶產(chǎn)生移動。4，5，6，7-四羥基異黃酮的紫外光譜隨時間延長而衰退。乙醇鈉使5，7-二羥基二氫黃酮和5，7-二羥基二氫黃酮醇帶向紅位移3437nm，而其相應(yīng)的5-去氧化合物則移動5158nm。5，6，7-三羥基二氫黃酮的紫外光譜隨時間延長而衰退。3乙醇鈉/硼酸不能用naoac/h3bo3對異黃酮、二氫黃酮和二氫黃酮醇類的紫外光譜的影響來檢查b環(huán)鄰位二羥基，因?yàn)樗鼈兊腷環(huán)與主要發(fā)色團(tuán)缺少有效的共軛。但它們中的a環(huán)有6，7-二羥基時，加入naoac/h3bo3后使帶向紅位移1015nm。4三氯化鋁和三氯化鋁/鹽酸異黃酮、二氫黃酮（可能也包括二氫黃酮醇）的a環(huán)如有鄰二羥基（6，7-或7，8-，不包括5，6-），則帶在alcl3中比在alcl3/hcl中向紅位移1130nm。有5-羥基的異黃酮，其帶在alcl3/hcl存在下與在甲醇中的光譜相比，向紅位移1014nm，而有5-羥基的二氫黃酮和有5-羥基的二氫黃酮醇類的帶在同樣情況下向紅位移2026nm。目標(biāo)檢測：黃酮類化合物的鑒別與結(jié)構(gòu)測定現(xiàn)在多依賴于譜學(xué)的綜合解析，而化學(xué)方法和色譜方法已降至輔助地位。未知黃酮類化合物的鑒定，多在測定分子式的基礎(chǔ)上，利用ppc或tlc得到的rf值或hrf值與文獻(xiàn)比較或分析對比樣品在甲醇溶液中及加入各種診斷試劑后得到的紫外及可見光譜進(jìn)行剖析。同時，對于化合物的顏色反應(yīng)，以及在提取分離過程中所表現(xiàn)的行為（如溶解度、酸或堿中的溶解情況、鉛鹽沉淀等）也應(yīng)注意分析。但這些方法均有一定局限性，并曾導(dǎo)致得出過一些錯誤結(jié)論。質(zhì)子核磁共振（1hnmr）因?yàn)榭啥繙y定h的個數(shù)，以及根據(jù)質(zhì)子的化學(xué)位移和芳香氫核之間的自旋偶合所提供的信息（裂分?jǐn)?shù)目及偶合常數(shù)大?。纱_定黃酮母核上的取代模式。近來由于儀器分辨率的不斷改進(jìn)，加以同核去偶、溶劑位移以及核磁共振技術(shù)的使用，1hnmr譜的測定對分析天然黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)已經(jīng)成為一種非常重要的手段。但是正如以后談到的那樣，在黃酮類化合物的1h-nmr譜上，有時要想確切指認(rèn)每個信號并不是一件容易的事情。例如當(dāng)黃酮類母核的a-環(huán)上只有一個芳香氫核時，要想與h-3信號區(qū)別，就是十分困難的問題。解決這種問題，13c核磁共振(13cnmr)技術(shù)有很大的優(yōu)勢。加上各種取代基位移及苷化位移效應(yīng)的發(fā)現(xiàn)，使得圖譜的解析工作大大簡化。因此，13c-nmr技術(shù)在黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定中發(fā)揮著越來越重要的作用。質(zhì)譜（ms）技術(shù)，尤其場解析質(zhì)譜（fdms）與快速原子轟擊質(zhì)譜（fabms