密級： 論文編號： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 枯草芽孢桿菌 株及其抗菌物質(zhì)對稻瘟病的生防作用研究 I 摘 要 水稻稻瘟?。?一種世界性真菌病害， 對全球水稻生產(chǎn)造成極大危害。 尋求 對 病害的生物 防治 方法對人類社會的可持續(xù)發(fā)展有著特殊的意義。 本論文 以 枯草芽孢桿菌 (B. 株 （以下簡稱 及其產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)為研究對象， 通過從室內(nèi)到田間的一系列實(shí) （試） 驗(yàn)， 對 該菌株對稻瘟病 （菌） 的 生防作用 和抑菌機(jī)理進(jìn)行 了 較為 系統(tǒng) 地 研究 。 結(jié)果如下： 1、 在離體條件下， 對稻瘟病菌的菌絲生長、孢子萌發(fā)和致畸作用等 方面 進(jìn)行 了 研究 ，結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 稻瘟病菌表現(xiàn)出了強(qiáng)烈的抑制作用。抑菌帶寬平均可達(dá) 酵上清液稀釋 5和 10時(shí)對菌絲生長的抑制率在 92%以上 ； 5、 10和 20稀釋液對病菌分生孢子萌發(fā)的抑制率為100%。 在發(fā)現(xiàn)對芽管有致畸作用后， 對致畸率 進(jìn)行了 測定 。發(fā)現(xiàn) 發(fā)酵上清液 稀釋至 100 200時(shí)對芽管的致畸率最高，在 70%以上，至 2000時(shí)仍有致畸作用 。 2、 盆栽水稻活體生物測定中， 芽孢菌體懸浮液及發(fā)酵上清液均表現(xiàn)出較好的防治效果（ 50%以上）； 當(dāng)菌液 與 上清混合后其防治效果 有加和作用； 該菌株對稻瘟病的防治作用主要在預(yù) 防， 其預(yù)防葉瘟的效果與接種稻瘟病菌時(shí)葉面已定殖的 株的數(shù) 量有關(guān)； 在人工大量引入的情況下，該菌能夠在水稻葉 面 上有效定殖， 第 21 天還能夠檢測到 一定量 的活菌，并且在葉面有 10%病斑的情況下，菌量會更多 。 田間試驗(yàn)結(jié)果表明， 芽孢濃度在 1108 ， 該菌株對水稻 穗 頸瘟的防治效果達(dá) 增產(chǎn)率達(dá) 且 濃度在 5108 對螃蟹 乃 無毒性 。 3、 通過顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)， 株 對稻瘟病菌的抑制作用主要表現(xiàn)在對芽管及菌絲體 的 致畸作用， 經(jīng)上清液處理的 芽管和菌絲 成 球形膨大 狀， 最 終導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)外泄 、 細(xì)胞 崩潰。 這種致畸作用導(dǎo)致 的 畸形 芽管， 進(jìn)而 不能形成正常的附著胞。 透射電鏡觀察進(jìn)一步 發(fā)現(xiàn) ，經(jīng)上清處理后，稻瘟病菌的細(xì) 胞外壁 有被 溶解 的現(xiàn)象。 4、 對 株發(fā)酵上清液中的抑菌物質(zhì) 進(jìn)行了 粗提 。 粗提物在濃度為 即對稻瘟病菌有明顯的抑制作用， 并且有很好的熱穩(wěn)定性 。粗提物 5濃縮液對稻瘟病的實(shí)際防治效果 好于對照藥劑三環(huán)唑 。 關(guān)鍵詞 枯草芽孢桿菌，稻瘟病菌， 生防作用 ， 定殖作用， 作用機(jī)理 by to is to a on to in of of on as (1) B. . in of DA A of 800 0 ; 0 , 00 200 , 0% of (2) In 0%) of of by is on of on . on be 1 on 0% In of 108 no to 108 (3) . at to of of . by At is to (4) M. by of in of 錄 摘 要 . I . 一章 緒 論 . 1 瘟病對水稻的危害 . 1 瘟病的防治研究進(jìn)展 . 1 草芽孢桿菌用于植病防治的研究概況 . 8 草芽孢桿菌用于稻瘟病防治的研究進(jìn)展 . 9 草芽孢桿菌拮抗作用機(jī)理研究進(jìn)展 . 10 研究的目的和意義 . 12 第二章 枯草芽孢桿菌 稻瘟病菌的抑制作用 .料和方法 . 14 驗(yàn)材料 . 14 驗(yàn)方法 . 15 果與分析 . 16 株對稻瘟病菌的平板拮抗作用 . 16 酵上清液對稻瘟病菌菌絲生長的抑制作用 . 16 酵上清液對稻瘟病菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用 . 17 酵上清液對稻瘟病菌分生孢子芽管的致畸作用 . 18 結(jié)與討論 . 19 第三章 枯草芽孢桿菌 稻瘟病的防治效果評價(jià) .料和方法 . 21 驗(yàn)材料 . 21 驗(yàn)方法 . 21 果與分析 . 24 養(yǎng)物在室內(nèi)盆栽水稻上對稻瘟病的實(shí)際防治效果 . 24 養(yǎng)物在室內(nèi)盆栽水稻上對稻瘟病的混合防治效果 . 25 治稻瘟病的最佳時(shí)期 . 25 株在田間小區(qū)對稻瘟病的防治效果 . 26 株對螃蟹的毒性 . 26 結(jié)與討論 . 26 第四章 枯草芽孢桿菌 水稻上的定殖作用 .料和方法 . 28 驗(yàn)材料 . 28 驗(yàn)方法 . 28 果與分析 . 29 種稻瘟病菌時(shí)稻葉初始定殖菌量與最終的防治效果 . 29 株在水稻葉面上的定殖情況 . 29 結(jié)與討論 . 30 第五章 枯草芽孢桿菌 稻瘟病菌的作用機(jī)理研究 .料和方法 . 31 驗(yàn)材料 . 31 驗(yàn)方法 . 31 果與分析 . 32 分生孢子畸形芽管的顯微跟蹤觀察結(jié)果 . 32 成熟菌絲體的致畸作用 . 33 酵上清處理的稻瘟病菌的透射電鏡觀察結(jié)果 . 33 結(jié)與討論 . 34 第六章 枯草芽孢桿菌 株抗菌物質(zhì)的初步研究 .料和方法 . 35 驗(yàn)材料 . 35 驗(yàn)方法 . 35 果與分析 . 36 株發(fā)酵上清中初提物質(zhì)的抑菌活性 . 36 酵上清中初提物的抑菌活性與濃度關(guān)系回歸分析 . 37 酵上清中拮抗初提物的熱穩(wěn)定性 . 37 酵上清中拮抗初提物濃縮液的活體防治效果 . 38 結(jié)與討論 . 38 第七章 結(jié)論與討論 .論 . 40 論 . 41 參考文獻(xiàn) . 謝 .者簡歷 .國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒 論 瘟病 對水稻的 危害 水稻提供世界食物能量的 20%，而小麥和玉米分別占 19%和 5%1。我國是世界上最大的稻谷生產(chǎn)國 ， 年均生產(chǎn)稻谷 噸，約占世界稻谷總產(chǎn)的 35，為世界第一 2。我們用占世界 9的耕地養(yǎng)活了占世界 22的人口，而水稻種植面積約占全國耕地面積的 26%，年產(chǎn)量 約占全國糧食總產(chǎn)量的 43%3。 水稻與其它農(nóng)作物一樣，也受到自然界各種病害的侵?jǐn)_。在全世界范圍內(nèi)，稻瘟病 (紋枯病 (和白葉枯?。?公認(rèn)的水稻三大病害 48。另外還有水稻惡苗病 (水稻細(xì)菌性條斑病 (也很嚴(yán)重 9。 水稻稻瘟病 又稱稻熱病、叩頭瘟等10， 是世界性真菌病害，曾被列為水稻三大病害之首 11。該病病菌屬于半知菌亞門、絲孢目、梨形孢屬，使水稻從秧苗至抽穗后期都可能發(fā)病，并可侵染植株的葉、苗、穗、頸、節(jié)、粒等多個(gè)部位。因此根據(jù)稻株受害時(shí)期和部位的不同可分為：苗瘟、葉瘟、節(jié)瘟、葉枕瘟、穗頸瘟和谷粒瘟。特別是造成的葉瘟、苗瘟、穗頸瘟常會危害成災(zāi) 12。 稻瘟病分布廣泛，全球 80 余個(gè)國家均有發(fā)生，危害嚴(yán)重。僅稻瘟病在日本，就占全部稻谷產(chǎn)量損失的 50。在菲律賓等東南亞國家，稻瘟病被認(rèn)為是分布最廣和最具毀滅性的病害，每年都造成嚴(yán)重?fù)p失， 1975 2000 年間全世界 11% 30%的水稻因稻瘟病而顆粒無收，據(jù)統(tǒng)計(jì)， 19751990 年由稻瘟病引起的全球糧食損失高達(dá) 。并且它也是我國南北稻區(qū)危害最嚴(yán)重的水稻病害之一，每年均有不同程度的發(fā)生，流行年份，重病地區(qū)一般減產(chǎn) 10% 20%，重的達(dá) 40%50%，局部田塊甚至顆粒無收 3, 1216。 瘟病的防治研究進(jìn)展 多年來，科學(xué)工作者在對稻瘟病菌進(jìn)行深入了解的同時(shí)也在不斷加強(qiáng)防治方法的研究 。 目前防治稻瘟病主要是在 “ 綜合防治 ” 的指導(dǎo)思想下以選育抗病品種為主，同時(shí)加強(qiáng)肥水管理以增強(qiáng)水稻的抗病能力，并在發(fā)病期間及時(shí)輔以藥劑防治，其中以抗病品種應(yīng)用，合理利用抗病性如抗性品種輪作、品種多樣性及抗藥性并與化學(xué)農(nóng)藥和生防藥劑相結(jié)合、多種藥劑交替使用等為最重要的措施 35, 37, 38。 瘟病 菌的 特性 病菌以分生孢子或菌絲體在病谷和病稻草上越冬。種子上的病菌在溫室或薄膜育秧的條 件下容易誘發(fā)苗瘟；露天堆放的稻草為第二年發(fā)病的主要侵染源。來年春，當(dāng)旬平均氣溫達(dá) 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 2 15 ，遇到雨濕，稻草上的 病菌開始活動，不斷產(chǎn)生分生孢子，借風(fēng)雨傳播使稻株感病，長出后繼續(xù)產(chǎn)生分生孢子進(jìn)行再侵染。病菌發(fā)育最適溫度為 25 28 。高濕度有利于分生孢子的形成和萌發(fā)，而高濕度持續(xù)達(dá)一晝夜以上，則有利于病害的發(fā)生與流行。該病原菌具有如下特點(diǎn)： （ 1）生理小種多樣性。病原菌 (半知菌梨孢屬，其有性階段為 (子囊菌 。該病菌 寄主范圍很廣，涉及到 15 科、 66 個(gè)屬、 118 個(gè)種、 3 個(gè)亞種，并且存在致病分化變異性 17, 18。 1922 年日本學(xué)者佐佐木首 次報(bào)道了稻瘟病菌存在致病性不同的兩個(gè)生理小種 A 和 B19。二十世紀(jì) 50 年代以后，病菌的生理小種得到了廣泛的研究。以日本為首，各國開始紛紛建立由多個(gè)水稻鑒別品種組成的稻瘟病菌生理小種鑒別品系。至今，世界上產(chǎn)稻國家或地區(qū)建立和利用的鑒別品種達(dá) 10 多套 20。我國在 1976 1979 年經(jīng) 全國稻瘟病菌生理小種聯(lián)合試驗(yàn)組 的研究，提出了全國統(tǒng)一的鑒別方法和 7 個(gè)鑒別品種，并對在來自全國 23 個(gè)省 (市 )、自治區(qū)的稻瘟病標(biāo)樣上分離獲得的 1197 個(gè)菌株進(jìn)行了鑒定，共鑒定出 7 群 43 個(gè)小種。又據(jù)羅耀光匯總?cè)珖疚敛】蒲袇f(xié)作 組研究的資料， 1976 1987 年我國 25 個(gè)省 (市 )、自治區(qū)共測定 13000 余個(gè)稻瘟病菌株，鑒定出 8 群 85 個(gè)生理小種，除 “ 全國稻瘟病菌生理小種聯(lián)合試驗(yàn)組 ” 已報(bào)道的 43 個(gè)小種外，又新增加 42 個(gè)小種 21。日本根據(jù) 基因?qū)驅(qū)W說 22，通過對水稻品種進(jìn)行抗病性分析，于 1976 年建立了一套具有已知抗病 “ 單基因 ” 的 9 個(gè)粳型品種組成的鑒別品系 23。中國農(nóng)科院作物所采用近等位基因系的育成及 將 其 用于 稻瘟病生理小種 的 鑒別，也取得了一定的進(jìn)展24。但是，迄今為止，國際上還沒有一套鑒別品種適合于世界各稻區(qū) 共同利用。同時(shí)隨著參試菌株的增多，各國發(fā)現(xiàn)的生理小種數(shù)也在不斷增加 25。 （ 2）較高的變異能力。關(guān)于稻瘟病的變異能力，曾有很多報(bào)道。有人認(rèn)為，菌株的生理小種是極不穩(wěn)定的。 曾報(bào)道過在菲律賓采集的生理小種多達(dá) 250 個(gè)，而且不穩(wěn)定，可以繼續(xù)分化成大量新的生理小種 26。單個(gè)病斑上分離的單孢菌株的致病性也不相同；菌株繼代培養(yǎng)也可改變致病力 27。不過，也有人報(bào)道生理小種是相對穩(wěn)定的。大部分生理小種繼代培養(yǎng)了 10 20 年后仍然保存了原有的產(chǎn)孢能力，生長特性以及致病力 28, 29。 對 研究過的菌株 進(jìn)行 再鑒定，結(jié)果與原來的結(jié)論不一致，認(rèn)為是由于接種的環(huán)境條件不穩(wěn)定影響菌株高度變異 30。國內(nèi)也有人同意 的觀點(diǎn)， 但 關(guān)于稻瘟病菌群體多樣性和易于發(fā)生變異的 性質(zhì) ，所有稻瘟病專家 是認(rèn)同的 ，并對其變異機(jī)制進(jìn)行了廣泛的研究 31。有人認(rèn)為寄主的定向選擇對稻瘟病菌的進(jìn)化作用最大，這也是抗性品種為什么最終會喪失抗性的一個(gè)重要原因 31, 32。 （ 3）特異的侵染途徑。稻瘟病菌的孢子是主要的侵染器官，孢子成熟后產(chǎn)生芽管，附著胞附在表面，芽管從自然孔口或以侵染栓從表皮直接進(jìn)入。侵入過程 ： 病 菌的分生孢子接觸寄主表皮上的機(jī)動細(xì)胞后，其尖端釋放出粘液 (發(fā)芽使得孢子緊密地粘著在寄主表面； 芽管繼而分化成特殊的侵染機(jī)構(gòu) 附著胞 ( 附著胞產(chǎn)生侵染栓穿透角質(zhì)層和表皮細(xì)胞壁； 病菌分化成次生菌絲在寄主細(xì)胞中生長，侵染臨近表皮細(xì)胞并能深入細(xì)胞壁； 5 7 天后出現(xiàn)癥狀，分生孢子梗分化出大量新的分生孢子并從病斑中釋放出來； 這些新形成的分生孢子可重新侵染寄主。后期即以菌絲體和分生孢子在稻草、稻谷上越冬，完成侵染循環(huán)。其中，附著胞的形成是成功侵入的 關(guān)鍵步驟之一，它必須產(chǎn)生足夠的壓力才能夠機(jī)械穿透寄主角質(zhì)層完成侵入過中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 3 程，而黑色素就是產(chǎn)生附著胞壓力的前提，附著胞與寄主表面接觸一側(cè)非常小的區(qū)域內(nèi)沉積黑色素，最后形附著胞孔，完成侵入過程 3336。 用抗病品種防治稻瘟病 選用抗性品種是控制病害的關(guān)鍵，稻瘟病抗性的研究已有很長的歷史。國內(nèi)外學(xué)者主要從廣譜抗性、田間抗性、垂直抗性、水平抗性、慢瘟性及數(shù)量抗性 (部分抗性 )等方面評價(jià)品種的抗性 39。我國的育種專家通過對廣泛的抗源篩選，選育出一批具有抗多個(gè)生理小種的品種 (組合 )。如汕優(yōu)多系 1 號、岡 優(yōu)多系 1 號、岡優(yōu) 22、粳秈 89、優(yōu) 3 號、 5 號、 7 號，鎮(zhèn)稻 2 號、 88 ，有的已成為主栽品種， 為 控制病害 做出了一定的貢獻(xiàn) 。同時(shí)，篩選出對稻瘟病具有相對持久抗性(10 年以上 )的材料，如二九豐、丙 1067、小粒野生稻、谷梅 2、 3 號等，為抗病育種提供了種質(zhì)資源。此外，還研究了品種使用技術(shù)，明確了抗、感品種合理布局，可有效減輕病害，為科學(xué)利用抗性品種提供了依據(jù)。 通過傳統(tǒng)的雜交育種方法培育一個(gè)新 抗病 品種至少需要 7 10 年的時(shí)間，而一個(gè)抗病品種種植 3 5 年往往又會隨著稻瘟病菌群內(nèi)新的生理小種的出現(xiàn)或是原生理小 種致病性的變化而使其抗性喪失 40。并且一個(gè)抗性品種一般只能對幾個(gè)稻瘟病生理小種表現(xiàn)出高度抗性，同時(shí)水稻從苗期到成熟期的各個(gè)階段都能發(fā)病，抗葉瘟的品種不一定能抗穗瘟，反過來也是如此?，F(xiàn)代生物技術(shù)育種給人們帶來了希望，但目前沒有多少成功的例子，要想成為主流還需要一定的時(shí)間。因而近年來，植物病理學(xué)家在嘗試?yán)盟酒贩N多樣性來解決這一問題，并且取得了一定的成績 41。 用化學(xué)農(nóng)藥防治稻瘟病 防治稻瘟病過去的常用藥劑有稻瘟凈、異稻瘟凈、克瘟散等，目前北方地區(qū)多在使用的有：施?？巳橛?、多菌靈微粒劑、 多菌靈膠懸劑、多菌靈可濕性粉劑、 三環(huán)唑、比艷可濕性粉劑、富士一號乳油等。南方稻區(qū)常用的化學(xué)防治主要有：三環(huán)唑可濕性粉劑、稻瘟靈（富士一號）乳油、多菌靈可濕性粉劑等。富士一號（稻瘟靈）和三環(huán)唑是從八十年代開始推廣的。近年的研究表明，眾多藥劑中，三環(huán)唑最好，對稻瘟病防治效果在 90%以上 42。三環(huán)唑的作用機(jī)理主要是通過抑制病原菌體黑色素合成而不能形成附著胞阻止病菌侵入 43。江蘇省通州植保站采用 雷霉素加四氯膠懸劑 1500 倍對水稻葉瘟病的防效達(dá) 90%以上，對穗瘟病的防效達(dá) 80%左右，與三環(huán)唑的效 果相仿，增產(chǎn)作用明顯，優(yōu)于三環(huán)唑。除此之外，還研制出對苗、葉瘟有良好防效的種子處理劑，如水稻水育秧和旱育秧種衣劑，播種后 30 天防治葉瘟效果為 比對照三環(huán)唑浸種(提高防效 基本上控制了苗床死苗問題。復(fù)配劑也有發(fā)展，比如加收熱比、瘟克、施稻靈等。 雖然化學(xué)防治增加 水稻 種植成本，但是當(dāng)?shù)疚敛〈蟀l(fā)生和流行的時(shí)候，施用防治稻瘟病的農(nóng)藥目前還是必不可少的措施，是保證水稻豐收的必要條件。目前這些藥劑雖然防治效果較好，可是容易使病菌產(chǎn)生抗藥性。最近浙江報(bào)道，發(fā)現(xiàn)該菌有些生理小種對三環(huán)唑 已產(chǎn)生抗性；而在臨海和麗水等地，發(fā)現(xiàn)該菌對稻瘟凈和異稻瘟凈也已產(chǎn)生抗性。更重要的是化學(xué)農(nóng)藥不僅會損害人體健康還造成環(huán)境污染和生態(tài)平衡的破壞，使人類受到更大的威脅。因此，植物病害的生物防治中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 4 被認(rèn)為是最具有發(fā)展?jié)摿Φ姆乐畏椒?，而化學(xué)農(nóng)藥的使用會越來越受到限制。 瘟病生物防治研究進(jìn)展 稻瘟病的生物防治是從 20 世紀(jì) 50 年代開始的 44。 70 年代初首先在發(fā)達(dá)國家廣泛開展了綜合防治的理論和應(yīng)用研究，為此 1976 年聯(lián)合國糧農(nóng)組織 (專家規(guī)范了綜合防治的定義，以推動病蟲害綜合防治在世界范圍內(nèi)的廣泛研究 ，并逐步在多種作物上應(yīng)用，取得了較大進(jìn)展。近年來國際上在探討 21 世紀(jì)植?？萍记熬爸刑岢?“ 的新思想，意即生物強(qiáng)化 有害生物 綜合治理，其研究內(nèi)容包含作物抗性、天敵保護(hù)利用、栽培制度、生物農(nóng)藥的利用等，使研究工作不斷引向深入和實(shí)用化。病蟲害防治的發(fā)展趨勢是保護(hù)農(nóng)田生態(tài)平衡，以 “ 自然控制 ” 為主，輔之以必要的人工措施，將病蟲的損失控制在允許的經(jīng)濟(jì)閡值之下。 用微生物農(nóng)藥防治稻瘟病 近年來，對農(nóng)藥的要求除了安全無毒外，還應(yīng)對環(huán)境有較小的選擇壓力。微生物農(nóng)藥最能體現(xiàn)生物防 治的特點(diǎn)，它的作用靶標(biāo)或?qū)Σ≡淖饔靡话愣际嵌嘁蜃拥?，或稱多效的，故不易使靶標(biāo)菌產(chǎn)生抗藥性。隨著人們生活水平的提高，人們對食物的安全性和品質(zhì)的要求也越來越高，在這種情況下，不僅要求水稻的產(chǎn)量，更要求稻米的質(zhì)量，因而生物農(nóng)藥的使用是不可缺少的。 （ 1）生防微生物 國外先后研究過的用于稻瘟病的生防微生物包括 44, 46， 47， 48， 93， 47, 50, 51， 52 等。 木霉屬 (菌在生物防治中扮演著重要角色。 A 研究報(bào)道，一株木霉菌在 28 、 6 條件下，抑制 稻瘟病菌 的效果最佳 53。 等 54的研究也表明，幾種木霉屬的真菌對 稻瘟病菌 的抗生效果可達(dá) 89% 100%，是有開發(fā)應(yīng)用價(jià)值的生物防治真菌。 是真菌 生的一種新的幾丁質(zhì)酶合成 抑制劑，其分子量為 358 子式為 化合物對 稻瘟病菌 有強(qiáng)抑制活性 55。放線菌也是人們研究的重點(diǎn)對象， 得了 5 株放線菌，其發(fā)酵物對稻瘟病菌分生孢子的萌發(fā)、生長和附著孢的產(chǎn)生有較強(qiáng)抑制作用，其中 菌株的發(fā)酵液能顯著減少溫室的葉瘟病斑 56。據(jù)報(bào)道，來自 96一種新的環(huán)肽抗生素 稻瘟病菌有效 57。 目前 對拮抗菌的研究主要集中在抗稻瘟病菌菌株的分離和篩選以及拮抗物質(zhì)的提取及活性的研究上。在利用拮抗作用這一生防機(jī)理篩選拮抗物質(zhì)或其它生理活性物質(zhì)時(shí)，以前多以放線菌為主要對象，后來，越來越多的科研工作者把目光轉(zhuǎn)向了細(xì)菌。用細(xì)菌作為拮抗菌來防治植物病害有著很多優(yōu)勢，如種類多存在廣、繁殖快、易培養(yǎng)、抗逆性強(qiáng)、作用方式廣等 58。對稻瘟病菌有明顯抑制作用的生防細(xì)菌多為芽孢桿菌 (假單胞桿菌 (59，近年來對這兩種菌的研究占有相當(dāng)大的比例，并篩選出了一些有生 防潛力的菌株 45, 60。芽孢桿菌中用于防治稻瘟病的主要有枯草芽孢桿菌 (B. 短小芽孢桿菌 (B. 蠟狀芽孢桿菌 (B. 。 日本學(xué)者在將 株用于稻瘟病的防治研究中，經(jīng)兩年的室內(nèi)拮抗測定及田中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 5 間防治試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其對稻瘟病菌的生長、孢子萌發(fā)及附著孢的形成都有極強(qiáng)的抑制作用。用1108 5108菌懸浮液，田間防治效果分別為 但對病斑的治療和控制效果不佳 60。此菌作為稻瘟病 的防治產(chǎn)品，值得進(jìn)一步研究。 陳衛(wèi)良等從水稻葉圍分離得到的 B. 30 菌株，對稻瘟病菌有很好的抑制效果，同時(shí)還對水稻白葉枯病、紋枯病、惡苗病等多種病原真菌、病原細(xì)菌具有拮抗作用，表現(xiàn)出廣譜抗性 61。游春平等發(fā)現(xiàn)一株短小芽孢桿菌，其發(fā)酵液稀釋 100 倍后還可對稻瘟病菌的孢子萌發(fā)有明顯的抑制效果（ 97%），比枯草芽孢桿菌還高（ 62, 63。彭化賢等，從水稻作物根際分離篩選得到一株蠟狀芽孢桿菌 一株枯草芽孢桿菌 連續(xù)兩年分別在室內(nèi)和田間進(jìn)行稻瘟病防治實(shí)驗(yàn)， 其防效可達(dá) 50%以上， 有較好的促生效果 64。 國內(nèi)近幾年得到了一些在抑菌能力上較好的菌株，但 其 離應(yīng)用尚須時(shí)日。如 株（ B. 離體條件下及溫室中對稻瘟病菌有很強(qiáng)抑制作用，同時(shí)在離體條件下對其它幾種主要的水稻病原菌也有很強(qiáng)的抑制作用，表現(xiàn)出很好的廣譜抗性。然而，在相同的濃度下， 株與國外 深入 研究的 株 (P. 比，在水稻植株上的定殖能力較弱 65，田間效果差。 假單胞桿菌用于稻瘟病的防治主要有熒光假單胞桿菌（ P. 66、惡臭假單胞桿菌（ P. 67等。國外近幾年研究得比較深入，不但選育出如 P. 7種 既強(qiáng)烈抑制稻瘟病菌又對其它多種病害有效的高效菌株，而且以其作為基因工程菌進(jìn)行研究，取得了一定的成果 68，而我國在此方面的研究才剛剛起步。通過分步篩選，林福呈等獲得 2 株假單胞桿菌，對稻瘟病菌孢子芽管生長和附著胞形成有抑制作用，初步鑒定為 ： P. 在離體條件 下，對葉瘟的防治效果分別為 和 69。肖炎農(nóng)等也得到一株假單胞桿菌 稻瘟病菌孢子萌發(fā)和菌絲生長有很強(qiáng)的抑制作用，田間防效也達(dá)到 45%左右 70，這與 株 71在室外的防治效果相當(dāng)。另外 株發(fā)酵液的抑菌活性有良好的熱穩(wěn)定性和耐稀釋性能 70。國內(nèi)也有人對假單胞菌株 泌鐵載體與抑菌活性的關(guān)系進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn) 株在無鐵條件下分泌的鐵載體，能在低鐵條件下抑制稻瘟病菌的生長，說明抑菌作用的發(fā)生與鐵載體有關(guān) 72。 （ 2）農(nóng)用抗生素 滅瘟素 又叫 “ 稻瘟散 ” 、 “ 勃拉益斯 ” ，是一種從放線菌培養(yǎng)液中提取出來的抗生素， 1958 年由 人首先分離得到，并在 1961 年大面積應(yīng)用于稻瘟病的防治 73，它是第一個(gè)廣泛應(yīng)用的農(nóng)用抗生素，對稻瘟病菌引起水稻苗瘟、葉瘟、穗頸瘟等都有很高的治療效果。我 國 在 1959 年 從 廣 東 花 縣 土 壤 中 也 分 離 到 一 株 灰 色 產(chǎn) 色 鏈 霉 菌 (產(chǎn)生滅瘟素 的