生物安全手冊(cè)1目的預(yù)防各種感染因素對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境的污染。2適用范圍整個(gè)微生物實(shí)驗(yàn)室。3崗位承擔(dān)人員職責(zé)微生物實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人督促執(zhí)行，相關(guān)工作人員負(fù)責(zé)執(zhí)行。4具體工作程序4.1微生物危害評(píng)估4.1.1感染性微生物危險(xiǎn)度等級(jí)分類4.1.1.1危險(xiǎn)度1級(jí)：無(wú)或極低的個(gè)體和群體危險(xiǎn)。不太可能引起人或動(dòng)物致病的微生物。4.1.1.2危險(xiǎn)度2級(jí)：個(gè)體危險(xiǎn)中等，群體危險(xiǎn)低。病原體能夠?qū)θ嘶騽?dòng)物致病，對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導(dǎo)致嚴(yán)重危害。實(shí)驗(yàn)室暴露也許會(huì)引起嚴(yán)重感染，但對(duì)感染有有效的預(yù)防和治療措施，并且疾病傳播的危險(xiǎn)有限。4.1.1.3危險(xiǎn)度3級(jí)：個(gè)體危險(xiǎn)高，群體危險(xiǎn)低。病原體通常能引起人或動(dòng)物的嚴(yán)重疾病，但一般不會(huì)發(fā)生感染個(gè)體向其他個(gè)體的傳播，并且對(duì)感染有有效的預(yù)防和治療措施。4.1.1.4危險(xiǎn)度4級(jí)：個(gè)體和群體的危險(xiǎn)均高。病原體通常能引起人或動(dòng)物的嚴(yán)重疾病，并且很容易發(fā)生個(gè)體之間的直接或間接傳播，對(duì)感染一般沒(méi)有有效的預(yù)防和治療措施。4.1.2實(shí)驗(yàn)室分級(jí)：4.1.2.1根據(jù)處理的微生物及其毒素的危害程度將實(shí)驗(yàn)室各分為四級(jí)。各級(jí)實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)要求依次為：一級(jí)最低，四級(jí)最高。4.1.2.2一級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對(duì)健康成年人已知無(wú)致病作用的微生物。4.1.2.3二級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對(duì)人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。4.1.2.4三級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過(guò)呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有預(yù)防傳染的疫苗。4.1.2.5四級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室：實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對(duì)人體具有高度的危險(xiǎn)性，通過(guò)氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無(wú)有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。與上述情況類似的不明微生物，也必須在四級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。待有充分?jǐn)?shù)據(jù)后再?zèng)Q定此種微生物或毒素應(yīng)在四級(jí)還是再較低級(jí)別的實(shí)驗(yàn)室中處理。4.2微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)程序4.2.1總則4.2.1.1微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)微生物可能給人或環(huán)境帶來(lái)的危害進(jìn)行評(píng)估。4.2.1.2工作人員所處理的實(shí)驗(yàn)對(duì)象含有致病的微生物及其毒素時(shí)，通過(guò)在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建造、使用個(gè)體防護(hù)設(shè)置、嚴(yán)格遵從標(biāo)準(zhǔn)化的工作及操作程序規(guī)程等方面采取綜合措施，確保實(shí)驗(yàn)室工作人員不受實(shí)驗(yàn)對(duì)象危害，確保周圍環(huán)境免受其污染。4.2.1.3實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)的內(nèi)容包括安全設(shè)備、個(gè)體防護(hù)裝置和措施，實(shí)驗(yàn)室的特殊設(shè)計(jì)和建設(shè)要求，嚴(yán)格的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序及規(guī)程。4.2.1.4實(shí)驗(yàn)室根據(jù)不同的微生物和防護(hù)要求進(jìn)行相對(duì)應(yīng)的生物安全等級(jí)防護(hù)。4.2.2實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)4.2.2.1工作空間設(shè)置：標(biāo)本接種室、細(xì)菌鑒定室、培養(yǎng)基室（包括培養(yǎng)基配制室和無(wú)菌室）及儀器室。其中：4.2.2.1.1孢子的真菌或疑有生物危害34級(jí)微生物生長(zhǎng)等應(yīng)嚴(yán)格在生物安全柜中進(jìn)行。4.2.2.2各實(shí)驗(yàn)室分區(qū)依照生物安全防護(hù)等級(jí)進(jìn)行生物防護(hù)。4.2.3微生物實(shí)驗(yàn)室總體要求4.2.3.1有需要時(shí)，應(yīng)配備保護(hù)性裝置或呼吸保護(hù)性設(shè)備供員工預(yù)防使用。4.2.3.2應(yīng)設(shè)置洗眼裝置。4.2.3.3實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備移液輔助器避免用口吸的方式移液。4.2.3.4實(shí)驗(yàn)室可配備一次性接種環(huán)在生物安全柜中接種，以減少氣溶膠的生成。4.2.3.5應(yīng)設(shè)置實(shí)施各種消毒方法的設(shè)施，如高壓滅菌鍋、化學(xué)消毒裝置等對(duì)廢棄物進(jìn)行處理。4.2.4標(biāo)本接種室的設(shè)計(jì)4.2.4.1標(biāo)本接種室是工作人員直接接觸病人標(biāo)本處，可能含高度空氣傳播性危險(xiǎn) 的標(biāo)本和微生物或引起氣溶膠，因此應(yīng)有以下設(shè)置：4.2.4.2實(shí)驗(yàn)室負(fù)壓：4.2.4.2.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)處于負(fù)壓防止污染氣體外逸。4.2.4.2.2并有一定的通風(fēng)換氣系統(tǒng)保持室內(nèi)空氣流通。4.2.4.3緩沖間：4.2.4.3.1進(jìn)入標(biāo)本接種室前有一個(gè)在實(shí)驗(yàn)室和鄰近空間保持壓差的緩沖區(qū)。4.2.4.3.2門自帶鎖，可自動(dòng)關(guān)閉。4.2.4.3.3緩沖區(qū)禁止同時(shí)開(kāi)啟兩扇門，門配備自動(dòng)報(bào)警鈴，當(dāng)開(kāi)啟其中一扇門時(shí)，警報(bào)鈴將自動(dòng)響起以提醒不要開(kāi)啟另一扇門。4.2.4.3.4工作人員進(jìn)入接種室后應(yīng)保持門緊閉，不得隨意開(kāi)啟。4.2.4.4標(biāo)本的傳遞：4.2.4.4.1微生物標(biāo)本應(yīng)從緩沖區(qū)左側(cè)的傳遞窗內(nèi)傳送至接種室內(nèi)，不得直接開(kāi)啟接種室門傳遞。4.2.4.5生物安全柜：4.2.4.5.1根據(jù)中華人民共和國(guó)生物安全通用準(zhǔn)則，牛型分枝桿菌為分枝桿菌中生物危害最高型三級(jí)，必須在級(jí)或級(jí)以上生物安全柜中操作，本實(shí)驗(yàn)室配備B級(jí)生物安全柜。4.2.4.5.2生物安全柜含有高效空氣過(guò)濾網(wǎng)對(duì)排氣進(jìn)行凈化，工作空間為高效過(guò)濾網(wǎng)凈化的無(wú)渦流的單向流空氣。4.2.4.5.3工作時(shí)正面玻璃推拉窗打開(kāi)一半，上部為觀察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗口吸進(jìn)，而不可能由操作窗口逸出。4.2.4.5.4工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程時(shí)保證工作人員不受侵害，也保證實(shí)驗(yàn)對(duì)象不受污染。4.2.4.5.5所有可能使致病微生物及其毒素外濺或產(chǎn)生氣溶膠的標(biāo)本，如如痰、腦脊液、分枝桿菌培養(yǎng)及抗酸涂片檢查、懷疑有生物危害34級(jí)微生物生長(zhǎng)或懷疑有產(chǎn)生氣生性孢子的真菌標(biāo)本等的操作，須在生物安全柜中進(jìn)行。4.2.4.5.6生物安全柜應(yīng)至少每年進(jìn)行一次檢查，以保證安全柜濾網(wǎng)工作正常，空氣濾過(guò)率達(dá)標(biāo)。4.2.4.6封閉的離心機(jī)：4.2.4.6.1實(shí)驗(yàn)室對(duì)分枝桿菌培養(yǎng)及抗酸涂片檢查的標(biāo)本應(yīng)放入帶有螺旋封口帽的安全離心杯中。4.2.4.6.2并放入帶氣密性內(nèi)蓋的離心機(jī)內(nèi)進(jìn)行離心，以防生物危害。4.2.4.6.3離心完畢后應(yīng)將整個(gè)轉(zhuǎn)子拔下，直接放入生物安全柜中進(jìn)行處理。4.3生物安全防護(hù)細(xì)則4.3.1分析前生物防護(hù)4.3.1.1工作人員采集標(biāo)本應(yīng)穿著工作服及配戴手套。4.3.1.2標(biāo)本容器4.3.1.2.1應(yīng)是防水、防漏的無(wú)菌密閉容器。4.3.1.2.2保證標(biāo)本采集后用蓋子或塞子蓋好后無(wú)泄漏。4.3.1.2.3在容器外部不能留有殘留物。4.3.1.2.4容器上應(yīng)正確粘貼標(biāo)簽以便于識(shí)別。4.3.1.2.5檢測(cè)申請(qǐng)單不能卷在容器外面，而要分開(kāi)放置。4.3.1.3標(biāo)本運(yùn)送4.3.1.3.1為避免意外泄漏或溢出，應(yīng)使用二級(jí)容器。4.3.1.3.2二級(jí)容器應(yīng)是防水、防漏的密閉容器，可以是金屬或塑料制品，可耐高壓滅菌或耐受化學(xué)消毒劑的作用。4.3.1.3.3將含標(biāo)本的容器固定在架子上使其直立。4.3.1.3.4運(yùn)送途中，應(yīng)保持平穩(wěn)，避免不必要的晃動(dòng)。4.3.1.3.5標(biāo)本運(yùn)送工作人員應(yīng)穿著工作服及配戴手套，嚴(yán)禁打開(kāi)容器，避免生物危害。4.3.1.4標(biāo)本的接收4.3.1.4.1微生物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本的接收由樣本接收室負(fù)責(zé)。接收中，工作人員應(yīng)穿著工作服及配戴手套。4.3.2分析中生物防護(hù)4.3.2.1只有工作人員才得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域，非工作人員未經(jīng)允許不得入內(nèi)。參觀實(shí)驗(yàn)室等特殊情況須經(jīng)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后方可進(jìn)入。4.3.2.2實(shí)驗(yàn)室門應(yīng)保持關(guān)閉，以防外部污濁氣體、節(jié)肢動(dòng)物、嚙齒動(dòng)物等進(jìn)入污染環(huán)境。4.3.2.3室內(nèi)禁止用電風(fēng)扇，以避免加速氣體流動(dòng)，造成細(xì)菌播散。4.3.2.4進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)，必須穿工作服，不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾的鞋子。4.3.2.5實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不可放置任何私人物件或用品，禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化妝、處理隱形眼鏡及儲(chǔ)存食物等。4.3.2.6養(yǎng)成在室內(nèi)手不觸及口、臉、頭發(fā)及軀體的習(xí)慣。4.3.2.7在進(jìn)行可能直接或意外接觸到血液、體液及其他具有潛在感染性材料操作時(shí)，應(yīng)戴上手套。如可能發(fā)生感染性材料溢出或?yàn)R出，宜戴兩副。4.3.2.8對(duì)可能濺出標(biāo)本或培養(yǎng)物時(shí)，工作人員應(yīng)戴面罩。4.3.2.9不得戴著手套離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室。工作結(jié)束后應(yīng)除去手套，洗手液流水洗手。4.3.2.10一次性手套不得清洗和再次使用。4.3.2.11嚴(yán)禁穿著工作服離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室（如去會(huì)議室、辦公室、餐廳），更不能攜帶回家，用過(guò)的工作服應(yīng)由勤雜人員統(tǒng)一消毒洗滌。4.3.2.12實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)避免危險(xiǎn)材料飛濺，避免嗅危險(xiǎn)的平板。4.3.2.13在使用注射器和針頭時(shí)應(yīng)避免刺傷皮膚。4.3.2.14使用過(guò)的注射器應(yīng)不能重復(fù)使用，不能從注射器上取下、截?cái)唷⒄蹚濁橆^，回套針頭護(hù)套等，應(yīng)將其完整地置于盛放含1000mg/L有效氯消毒液的銳器容器中，由勤雜人員收集交由醫(yī)院統(tǒng)一處理。4.3.2.15有生物危害的材料應(yīng)有特別警示標(biāo)志，具體參見(jiàn)科里安全守則，員工在操作前應(yīng)仔細(xì)閱讀。4.3.2.16對(duì)于可能產(chǎn)生致病性微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的標(biāo)本操作（如痰、腦脊液、分枝桿菌培養(yǎng)及抗酸涂片檢查等），工作人員應(yīng)戴口罩并且應(yīng)在生物安全柜內(nèi)操作。4.3.2.17凡發(fā)生溢漏事故或接觸傳染性物質(zhì)后，應(yīng)立即向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人或檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心安全負(fù)責(zé)人報(bào)告，并做好書(shū)面記錄及采取相應(yīng)措施。4.3.2.18以移液器吸取液體，禁止口吸。4.3.2.19禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄前必須消毒。4.3.2.20每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后均應(yīng)按消毒標(biāo)準(zhǔn)操作程序要求清潔、消毒實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面。4.3.2.21感染性物質(zhì)濺出應(yīng)立即消毒。4.3.2.22所有培養(yǎng)物、組織、體液及其他具有潛在危險(xiǎn)性廢棄物都需放在防漏的容器中儲(chǔ)存、運(yùn)輸及消毒滅菌。4.3.2.23實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)接受必要的免疫接種（如卡介苗、乙肝疫苗等）。4.3.2.24工作人員應(yīng)掌握預(yù)防結(jié)核暴露以及暴露后的處理程序。4.3.2.25實(shí)驗(yàn)設(shè)備在運(yùn)出修理或維護(hù)前必須進(jìn)行消毒。4.3.2.26實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有不同微生物的生物安全等級(jí)的處理方法和程序以降低暴露于微生物實(shí)驗(yàn)室處理的危險(xiǎn)材料風(fēng)險(xiǎn)。4.3.2.27對(duì)于生長(zhǎng)有氣生性孢子的扔入紅色生物危害垃圾袋中，裝入密封、防泄漏的密閉容器中交由勤雜人員做高壓滅菌處理。4.3.2.28一次性注射器使用后不應(yīng)再重復(fù)使用，包括不能將針頭從注射器上取下、截?cái)噌橆^，回套針頭護(hù)套等，應(yīng)將其完整地置于盛放銳器的一次性容器中。4.4生物安全應(yīng)急程序4.4.1刺傷、切割傷或擦傷：4.4.1.1受傷人員應(yīng)當(dāng)脫下防護(hù)服，清洗雙手和受傷部位，使用適當(dāng)?shù)钠つw消毒劑，必要時(shí)進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理。4.4.1.2要記錄受傷原因和相關(guān)的微生物，并應(yīng)保留完整適當(dāng)?shù)尼t(yī)療記錄。4.4.2潛在感染性物質(zhì)的食入：4.4.2.1應(yīng)脫下受害人的防護(hù)服并進(jìn)行醫(yī)學(xué)處理。4.4.2.2要報(bào)告食入材料的鑒定和事故發(fā)生細(xì)節(jié)，并保留完整適當(dāng)?shù)尼t(yī)療記錄。4.4.3潛在危害性氣溶膠的釋放（在生物安全柜以外）：4.4.3.1所有人員必須立即撤離相關(guān)區(qū)域，任何暴露人員都應(yīng)接受醫(yī)學(xué)咨詢。4.4.3.2應(yīng)當(dāng)立即通知微生物實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心安全負(fù)責(zé)人。4.4.3.3為了使氣溶膠排出和使較大的粒子沉降，在一定時(shí)間內(nèi)（例如1h內(nèi)）嚴(yán)格禁止人員入內(nèi)。4.4.3.4應(yīng)張貼“禁止入內(nèi)”的標(biāo)志，過(guò)了相應(yīng)時(shí)間后，來(lái)清除污染。4.4.3.5應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)服和呼吸性保護(hù)設(shè)備。4.4.4容器破碎及感染性物質(zhì)的溢出：4.4.4.1參見(jiàn)消毒滅菌的管理程序溢出清除程序。4.4.5在可封閉的離心桶內(nèi)蓋離心管發(fā)生破裂：4.4.5.1如果機(jī)器正在運(yùn)行時(shí)發(fā)生破裂或懷疑發(fā)生破裂，應(yīng)關(guān)閉機(jī)器電源，讓機(jī)器密閉（例如30min）讓氣溶膠沉積。4.4.5.2如果機(jī)器停止后發(fā)現(xiàn)破裂，應(yīng)立即將內(nèi)外蓋子蓋上，并密閉（例如30min）。4.4.5.3發(fā)生上述兩種情況都應(yīng)通知安全負(fù)責(zé)人