1、 丹參單身的多種鑒別方法【摘要】:通過檢索相關(guān)的文獻(xiàn),分別從植物形態(tài)、植物分類,顯微特征,以及薄層層析法、紫外光譜鑒別法及指紋圖譜、分子生物學(xué)等方面對(duì)丹參進(jìn)行鑒別區(qū)分,進(jìn)而對(duì)丹參進(jìn)行質(zhì)量控制?！娟P(guān)鍵詞】:丹參;鑒別 【Abstract】:In recent years differentplantswhose roots are the same likeSalviamiltiorrhizaBge roots are being used confusedly.The authors summarized the recent research on distinguishingSalviam

2、iltiorrhizaBge roots in differentkinds ofways. Themethodsinclude: plantmorphology, plant classification, root trait identification, water logging identification, powdermicroidentification,thin layer chromatography, ultravioletspectrum identification, fingerprint identification, DNA geneticmarker ide

3、ntification aswellasRAPD identification. Thesemethods have been used in differentiating the realSage roots and the false ones. After the processitmay easily control the quality of the Sage roots.【Key words】:Salvia miltiorrhizaBge;Identification丹參Salvia miltiorrhizaBge.為唇形科(Labiatae)鼠尾草屬(Salvia)植物,是常

4、用中藥之一。藥用其根,因其根皮赤而肉紫且形狀似參而得名“丹參”。丹參作為傳統(tǒng)中藥在我國沿用已久,我國最早的藥書神農(nóng)本草經(jīng)即收載有丹參,列為上品,中醫(yī)理論認(rèn)為丹參有祛淤止痛,活血通經(jīng),清心除煩之功效。1丹參形態(tài)學(xué)鑒別1. 1植物學(xué)特性鑒別 傳統(tǒng)方法大多根據(jù)丹參的形態(tài)方面對(duì)藥材的真?zhèn)芜M(jìn)行別。丹參為多年生草本,根磚紅色,莖高4080 cm,多分枝,被長柔毛。葉常為奇數(shù)羽狀復(fù)葉。葉柄長17 cm,小葉37,頂端小葉較大。小葉卵形或橢圓狀卵形。長1. 58 cm,寬0. 85cm,先端鈍,邊緣具圓鋸齒,兩面被柔毛,下面較密,花序頂生或腋生輪傘花序有花6至多花,組成假總狀花序,密被腺毛及長柔毛;小苞片披針

5、形;花萼鐘狀,長11. 3 cm,先端二唇形,萼筒喉部密被白色柔毛;花冠藍(lán)紫色,二唇形,長22. 7 cm,花冠筒外伸,彎曲,上長達(dá)2 cm,筒內(nèi)有毛環(huán);雄蕊2,藥隔長,花絲短,上臂藥室發(fā)育, 2下臂的藥室不育且聯(lián)合;小堅(jiān)果4,橢圓形,花期58月,果期89月。根據(jù)丹參的植物學(xué)特征可以將丹參與混用的藥材進(jìn)行區(qū)分。1. 2丹參藥材根部性狀鑒別 丹參及其親緣種類的藥用植物甚多,以根部特征區(qū)別各類丹參也是沿用很久的經(jīng)典方法。丹參根的特征為:丹參多為帶根莖的根,根莖粗短,有莖基殘余,下著生多數(shù)細(xì)長的根。根呈圓柱形,稍彎曲,表面呈磚紅色,粗糙,具多數(shù)縱溝或皺紋,有須根痕,外部栓皮常鱗片狀剝落,皮層有時(shí)開裂

6、,長822 cm,直徑512 mm,質(zhì)堅(jiān)脆,易折斷,斷面不平,疏松有裂隙,皮部棕渴色或磚紅色,韌皮部狹。形成層明顯,淡棕色,木質(zhì)部導(dǎo)管束灰黃色或黃白色,放射狀排列。氣微,味微苦、澀,以條粗壯、色紫紅者為佳。1. 3水試鑒別法：用水浸泡丹參根的方法對(duì)丹參進(jìn)行鑒別,正品丹參根浸泡后的溶液無色,藥材稍膨脹,顏色稍微變淺。偽品丹參溶液顯紅色藥材變?yōu)榈t色。水浸后續(xù)斷會(huì)被染成紅色,粉末中有草酸鈣簇晶;丹參水浸不染成紅色,粉末中無草酸鈣簇晶,但有石細(xì)胞及紅棕色物為丹參。從而將兩者進(jìn)行區(qū)分。2顯微結(jié)構(gòu)鑒別2. 1根的橫切面顯微結(jié)構(gòu)鑒別 根據(jù)丹參橫切面顯微結(jié)構(gòu)特征與紫丹參進(jìn)行區(qū)分,丹參(Salvia milt

7、iorrhizaBge. )木栓層37列,木栓細(xì)胞長方形,切向延長,壁非木化或微木化;外側(cè)有時(shí)可見落皮層。皮層窄,纖維單個(gè)散在或26個(gè)成群,孔溝放射狀,層紋細(xì)密。韌皮部較窄,由篩管群和薄壁細(xì)胞組成。形成層明顯成環(huán)。木質(zhì)部寬廣, 412 mm呈放射狀排列。有些相鄰的束在內(nèi)側(cè)合并,導(dǎo)管類圓形或多角形,有的沿徑向延長,直徑1565 mm,單個(gè)散在或212個(gè)成群,徑向排列或切向排列;木纖維發(fā)達(dá),多成群分布于大導(dǎo)管周圍;有的本質(zhì)部束內(nèi)有12群木化薄壁細(xì)胞;木射線寬廣,射線細(xì)胞多木質(zhì)化增厚。紫丹參根莖表皮細(xì)胞1列,內(nèi)含紫紅色物質(zhì);皮質(zhì)薄壁細(xì)胞有的具紋孔;髓部薄壁細(xì)胞壁呈連珠狀增厚或稍增厚,具紋孔。根本質(zhì)部

8、束常較小,導(dǎo)管也少。2. 2根粉末的顯微結(jié)構(gòu)鑒別丹參粉末呈紅棕色。木栓細(xì)胞黃棕色,表面觀呈類方形或多角形,壁稍厚,胞腔內(nèi)常含紅棕色色素,色素溶解后,斷面觀細(xì)胞類長方形,排列較整齊。木纖維多成束,長梭形,紋孔斜裂縫狀或十字狀,孔溝稀。導(dǎo)管主要為網(wǎng)紋和具斜紋孔導(dǎo)管。石細(xì)胞呈類圓形、類三角形、類梭形、類長方形或不規(guī)則形,也有延長呈纖維狀,有的胞腔內(nèi)含棕色。2. 3花粉形態(tài)學(xué)特征對(duì)丹參及同屬藥用植物的鑒別 一定的植物具有一定形態(tài)的花粉,因此花粉形態(tài)研究也是植物分類鑒別的依據(jù)之一。丹參的花粉以外壁較薄、紋飾網(wǎng)眼較淺、網(wǎng)脊較粗、溝較寬、溝底具顆粒而區(qū)別于其他種。3理化學(xué)方法鑒別3. 1根據(jù)丹參所含的化學(xué)成

9、分進(jìn)行鑒別 經(jīng)過大量分析研究說明丹參所含化學(xué)成分中二萜醌成分與系統(tǒng)發(fā)育有密切關(guān)系,二萜醌類化合物組成的不同可以作為種類鑒別的依據(jù),根據(jù)二萜醌成分含量的多少對(duì)丹參組作丹參的藥用植物的親緣關(guān)系進(jìn)行劃分。3. 2薄層色譜鑒別林佳等采用薄層色譜定性鑒別的方法比較后指出在同一展開系統(tǒng)的條件下,無論是野生還是栽培品種,丹參的一些主要成分相同,以此可以作為識(shí)別丹參藥材真?zhèn)蔚膮⒖家罁?jù)。樣品名稱S.丹酚酸 B 1,2.丹參（產(chǎn)于河北）3.丹參（產(chǎn)于陜西）4-6.丹參（產(chǎn)于山東）7,8.丹參（產(chǎn)于安徽） 相關(guān)條件 供試品溶液：取丹參粉末0.2g，加75%甲醇25ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，濾過，濾液濃縮至1ml對(duì)

10、照品溶液：取丹酚酸B對(duì)照品，加75%甲醇制成每1ml含2mg的溶液。薄  層  板：高效硅膠GF254,預(yù)制薄層板(HPTLC-plate Nano-DLRASIL-20，UV254，MN)。點(diǎn)      樣：2l；條帶狀點(diǎn)樣，條帶寬度為1Omm.條帶間距為5mm，原點(diǎn)距底邊1Omm展  開  劑：甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2:3:4:0.5:2)，20ml。展  開  缸：雙槽展開缸,20cm×10cm。展    

11、0; 開：展開缸一側(cè)槽中加入展開劑，預(yù)平衡15分鐘，上行展開，展距為8cm。檢      視：置紫外光燈(254nm)下檢視。3. 3紫外吸收光譜鑒別丹參在253, 277 nm兩處有吸收特征峰,而甘西鼠尾在264,248, 218, 203 nm 4處有吸收特征峰。作丹參使用的藥材紫外吸收光譜的范圍不同,據(jù)此可以對(duì)兩者進(jìn)行鑒別。丹參粉末處理后置紫外燈(365nm)下現(xiàn)察顯亮藍(lán)灰色熒光3. 4紫外導(dǎo)數(shù)光譜：李海鷹等研究認(rèn)為丹參與番薯根的石油醚、甲醇及氯仿提取物的零階和二階導(dǎo)數(shù)光譜均可用于二者的鑒別。3. 5丹參藥材的近紅外漫反射光譜模式識(shí)別法鑒

12、別 劉沭華等近紅外漫反射光譜(NIRTDRS)模式識(shí)別法可以有效地應(yīng)用于中藥材自動(dòng)鑒別、遞歸支持向量機(jī)等方法可以有效地完成自動(dòng)分類和特征譜段選擇。不同種丹參藥材的NIRTDRS丹參及屬內(nèi)植物為根莖類藥材,其根莖中除含有大量的纖維素、淀粉等外,其他化學(xué)成分主要分脂溶性的其結(jié)果與化學(xué)成分測(cè)定一致。NIRTDRS用于不同種丹參藥材的鑒別,方法簡便、結(jié)果可靠。3.6指紋圖譜鑒別(HPLC法) 高效液相色譜(HPLC)具有色譜穩(wěn)定性好、柱效高、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn),是中藥指紋圖譜研究中常用的手段。對(duì)丹參等幾種中藥指紋圖譜與代謝指紋圖譜研究的結(jié)果,指出不同產(chǎn)地的藥材在指紋圖譜上存在較大差異。4分子生物學(xué)鑒別方

13、法RAPD鑒別法：隨機(jī)擴(kuò)增的多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于物種鑒別。4.1丹參主要居群DNA指紋圖譜的建立基因組DNA的提取表1實(shí)驗(yàn)所用材料4.1.2 RAPD一PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系及擴(kuò)增程序的優(yōu)化分別設(shè)計(jì)M擴(kuò)+、Taq酶、模板DNA的濃度及退火溫度等單因子試驗(yàn)，同時(shí)保持?jǐn)U增體系的其它成分濃度及擴(kuò)增程序其它環(huán)節(jié)不變，以優(yōu)化、確證適宜的M擴(kuò)+、Taq酶、模板DNA的濃度及退火溫度。結(jié)果如下：1.3鑒別丹參與其近緣和遠(yuǎn)緣植物的特征引物及其DNA指紋圖譜 引物s2035、s222擴(kuò)增結(jié)果不僅穩(wěn)定、條帶明亮，而且采用引物s2035、s232建立的指紋圖譜丹參主產(chǎn)區(qū)的n個(gè)居群丹參的PCR擴(kuò)增

14、帶型幾乎相同(1一n泳道)，其中有200一1100bp的七條共同的特異條帶，即圖6的條帶Cl、CZ、C3、C4、圖7的CS、C6、C7，各丹參居群完全相同。結(jié)果驗(yàn)證：結(jié)果驗(yàn)證顯示，PCR擴(kuò)增重復(fù)性較好，取樣合理，能夠代表各居群。4.2丹參EST序列中SSR信息的分析及建立丹參EST序列中SSR信息的分析 微衛(wèi)星（Microsatellite）又稱簡單重復(fù)序列(Simplesequence repeat)，指的是基因組中由 16 個(gè)核苷酸組成的基本單位重復(fù)多次構(gòu)成的一段 DNA，廣泛分布于基因組的不同位置，長度一般在 200bp 以下SsR 分子標(biāo)記具有數(shù)量豐富，多性高，多等位基因，共顯性，重復(fù)

15、性高等優(yōu)點(diǎn)。根據(jù)建立 SSR 標(biāo)記的序列性質(zhì)不同可分為基因組 SSR （Genomic SSR,gSSR） 和表達(dá)序列標(biāo)簽 SSR（Expressed sequence tag SSR，EST-SSR）。EST 及表達(dá)序列標(biāo)簽是通過從 cDNA 文庫中隨機(jī)挑選的克隆進(jìn)行大規(guī)模測(cè)序所獲得的 5或 3端序列，長度一般在 150500bp。4.2.2丹參EST序列中SSR信息的分析及建立表2 丹參 EST-SSR 引物情況表從NCBI數(shù)據(jù) 庫 下 載 鼠 尾草 屬 EST 序 列11747條，其中包 括 丹 參 EST序 列 10228 條和 Salvia fruticosa 1519 條，應(yīng)用 Active Perl對(duì) 含有SSR的 序 列進(jìn)行搜索。搜索參數(shù)設(shè)置為：單核苷酸、二核苷酸、三核苷酸、四核苷酸、五核苷 酸 和 六 核 苷酸 最 少 重 復(fù) 次數(shù) 分 別 為18次、6 次、5 次、4 次、4 次、3 次丹參的 EST-SSR 分布頻