1、微生物標(biāo)本采集、送檢及處理原則一、標(biāo)本采集的一般原則：1、病程早期、急性期或癥狀典型時(shí)，使用抗生素前。2、無(wú)菌采集應(yīng)無(wú)污染，嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。3、根據(jù)目的菌的特性用不同的方法采集適量標(biāo)本，采集量不應(yīng)過(guò)少。4、注意在不同病程采集不同部位標(biāo)本。5、采集標(biāo)本時(shí)要防止傳播和自身感染。二、標(biāo)本的處理：1、標(biāo)本保存在4環(huán)境中，在2h之內(nèi)送檢。腦脊液則要在25保存，用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本保存時(shí)間不應(yīng)超過(guò)24h。對(duì)環(huán)境敏感的細(xì)菌應(yīng)保溫并立即送檢。2、標(biāo)本中可能含有致病菌，必須注意安全防護(hù)。切勿污染環(huán)境。對(duì)于烈性傳染病標(biāo)本運(yùn)送時(shí)更要由專人運(yùn)送，嚴(yán)格按規(guī)定包裝。3、厭氧性標(biāo)本應(yīng)放在專門的運(yùn)送瓶或試管內(nèi)運(yùn)送，有時(shí)可直接

2、用抽取標(biāo)本的注射器運(yùn)送。I血液及骨髓標(biāo)本：血液標(biāo)本的細(xì)菌培養(yǎng)是診斷菌血癥或敗血癥的基本方法。如從患者血液中檢出細(xì)菌，一般應(yīng)視為病原菌。常見(jiàn)的病原菌主要有金黃色或表皮葡萄球菌、鏈球菌（A、B群、肺炎鏈球菌等）、腸球菌、產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌、腦膜炎奈瑟菌、傷寒及副傷寒沙門菌和厭氧菌等。1、采血時(shí)間及次數(shù)2、抽血部位及抽血量3、報(bào)告方式：培養(yǎng)5d無(wú)菌生長(zhǎng)者報(bào)告“培養(yǎng)5d無(wú)菌生長(zhǎng)”。查見(jiàn)細(xì)菌報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。4、菌血癥、敗血癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)：1）兩次培養(yǎng)均出現(xiàn)同一種細(xì)菌（可排除污染）；2）發(fā)病星期后血中抗體滴度上升。n腦脊液標(biāo)本：腦脊液的細(xì)菌學(xué)檢查對(duì)于細(xì)菌性腦膜炎的診斷有重要價(jià)值。正常人的腦脊液是無(wú)菌的，

3、檢出細(xì)菌提示有細(xì)菌性（急性化膿性、結(jié)核性等）腦膜炎。常見(jiàn)的病原菌主要有腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、鏈球菌（A、B群和肺炎鏈球菌）、葡萄球菌、產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌、結(jié)核分枝桿菌等。1、涂片檢查：（1）一般細(xì)菌涂片檢查：例如：革蘭陰性、凹面相對(duì)的球菌，可能是腦膜炎奈瑟菌；鏈狀排列的革蘭陽(yáng)性球菌；長(zhǎng)絲狀等多形態(tài)性的革蘭陰性桿菌，可能是流感嗜血桿菌。(2) 結(jié)核分枝桿菌涂片檢查(3) 新生隱球菌涂片檢查2、分離培養(yǎng)3、報(bào)告方式：培養(yǎng)48小時(shí)，仍無(wú)菌生長(zhǎng)者報(bào)告“培養(yǎng)2天無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。查見(jiàn)細(xì)菌報(bào)告細(xì)菌，報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。m呼吸系統(tǒng)標(biāo)本：(一)痰標(biāo)本下呼吸道的痰液是無(wú)細(xì)菌的，而經(jīng)口腔咳出的痰帶有多種上呼吸道

4、的正常寄生菌(如草綠色鏈球菌)。若從患者痰標(biāo)本中查見(jiàn)致病菌或條件致病菌，提示有上呼吸道感染。常見(jiàn)的病原菌主要有肺炎鏈球菌、A群鏈球菌、金黃色葡萄球菌、卡他布蘭漢菌、白喉棒狀桿菌、結(jié)核分枝桿菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、腸桿菌和軍團(tuán)菌。1、標(biāo)本的采集時(shí)間2、 標(biāo)本采集方法：(1)自然咳痰法(2)氣管鏡下采集法(3)氣管穿刺法(4)結(jié)核分枝桿菌標(biāo)本收集法：收集24h痰液以提高陽(yáng)性檢出率。1）一般細(xì)菌涂片（2）結(jié)核分枝桿菌涂片（3）放線菌及諾卡菌涂片4、培養(yǎng)：（1）培養(yǎng)標(biāo)本的選擇：應(yīng)選擇粘液痰作涂片。（2）痰標(biāo)本培養(yǎng)前處理：用無(wú)菌鹽水將痰洗滌3次，加入等量的1%胰酶溶液（PH7.6）,37oC水浴

5、90min,使痰液均質(zhì)化后備用。（3）分離培養(yǎng)5、報(bào)告方式：痰標(biāo)本培養(yǎng)24小時(shí)后僅有草綠色鏈球菌生長(zhǎng)而無(wú)致病菌生長(zhǎng)，報(bào)告“正常菌群”。查出的致病菌，報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果，同時(shí)報(bào)告細(xì)菌的量化指標(biāo)。（二）咽拭標(biāo)本正常咽拭有多種上呼吸道的正常菌群（如草綠色鏈球菌）。若從患者標(biāo)本中查出致病菌提示上呼吸道有細(xì)菌感染（如急、慢性扁桃體炎，咽炎，喉炎等）常見(jiàn)的病原菌主要有金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、化膿性鏈球菌、微球菌和棒狀桿菌等）。1、涂片檢查（先培養(yǎng)后涂片）。02、分離培養(yǎng)3、報(bào)告方式：同痰標(biāo)本檢查。IV穿刺液標(biāo)本穿刺液包括胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等。正常穿刺液是無(wú)菌的，若從患者穿刺液中查見(jiàn)致

6、病菌或條件致病菌提示該部位有細(xì)菌感染。胸腔感染的病原菌以結(jié)核分枝桿菌多見(jiàn)；腹腔感染的病原菌以腸道細(xì)菌如大腸挨希菌、糞腸球菌，以及結(jié)核分枝桿菌多見(jiàn)；心包炎和關(guān)節(jié)腔液以金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和銅綠假單胞菌多見(jiàn)。1、涂片檢查（先接種后涂片）2、分離培養(yǎng)：（1）普通培養(yǎng)（2）厭氧培養(yǎng)（3）結(jié)核菌培養(yǎng)3、報(bào)告方式：培養(yǎng)24h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，報(bào)告“培養(yǎng)24h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。查見(jiàn)細(xì)菌，報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。V泌尿、生殖道標(biāo)本（一）尿液標(biāo)本中段尿培養(yǎng)加計(jì)數(shù)對(duì)于泌尿道感染的診斷有重要價(jià)值。細(xì)菌培養(yǎng)必須結(jié)合菌落計(jì)數(shù)辨別是否為病原菌。3）結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)有致病菌或條件致病菌生長(zhǎng)，菌落計(jì)數(shù)>105/m

7、l，提示感染（膀胱炎，腎盂腎炎、腎或膀胱結(jié)核等）。常見(jiàn)病原菌主要有大腸埃希菌、葡萄球菌、鏈球菌、變形桿菌和傷寒沙門菌等。1、中段尿標(biāo)本采集法2、涂片檢查：（1）一般細(xì)菌及淋病奈瑟菌（2）念珠菌（3）結(jié)核分枝桿菌3、一般細(xì)菌培養(yǎng)：如培養(yǎng)2d無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，即可棄去。（1）傾注平板法（2）平板接種環(huán)法（3）標(biāo)準(zhǔn)接種環(huán)法：若定量接種環(huán)含量為.001ml，則整個(gè)平板菌落數(shù)超過(guò)100個(gè)，可報(bào)告“菌落數(shù)>105/ml”。4、特殊培養(yǎng)：（1）淋病奈瑟菌培養(yǎng)（2）厭氧菌培養(yǎng)5、報(bào)告方式：培養(yǎng)24h細(xì)菌生長(zhǎng)，報(bào)告“24h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)”。查見(jiàn)細(xì)菌，報(bào)告菌名及其菌落計(jì)數(shù)（菌落數(shù)/ml）和藥敏結(jié)果。（二）生殖道標(biāo)本正

8、常的內(nèi)生殖器是無(wú)菌的，而外生殖器（包括男性尿道口和女性陰道）有多種細(xì)菌寄生。查見(jiàn)病原菌提示有細(xì)菌感染。常見(jiàn)的病原菌主要有葡萄球菌、腸球菌、鏈球菌、淋病奈瑟菌、大腸埃細(xì)菌、變形桿菌等。1、涂片檢查：革蘭染色鏡檢2、分離培養(yǎng)：（ 1）普通培養(yǎng)（ 2）淋病奈瑟菌培養(yǎng)（ 3）陰道加特納菌培養(yǎng)（ 4）報(bào)告方式：如查見(jiàn)淋病奈瑟菌、陰道加特納菌等病原菌，報(bào)告菌名和藥敏結(jié)果。VI糞便標(biāo)本正常情況下腸道中有多種細(xì)菌。引起感染性腹瀉的病原微生物有：（1）細(xì)菌性：產(chǎn)毒素型腹瀉、侵襲型腹瀉、食物中毒、慢性腹瀉；（2）真菌性；（3）病毒性。1、標(biāo)本采集：（1）自然排便采集；（2）直腸試子。2、涂片檢查：糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多，僅以染色性和形態(tài)無(wú)法分辯是否為病原菌。因此，糞便標(biāo)本一般不作涂片檢查。3、培養(yǎng)：（ 1）沙門-志賀菌培養(yǎng)（ 2）致病性大腸埃細(xì)菌培養(yǎng)（ 3）霍亂弧菌培養(yǎng)（ 4）副溶血弧菌培養(yǎng)（ 5）小腸結(jié)腸炎耶爾森菌培養(yǎng)（ 6）真菌培養(yǎng)（7）菌群失調(diào)的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)4、報(bào)告方式：vn膿液及創(chuàng)傷感染分泌物標(biāo)本化膿性感染可由單種或多種細(xì)菌引起。菌、變形桿菌和結(jié)核分枝桿菌、諾卡菌，以及梭桿菌和擬桿菌等。常見(jiàn)病原菌主要有金黃色葡萄球菌、化膿性鏈球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞1、標(biāo)本采集：（1）開(kāi)放性膿腫和膿性分泌物；（2）大面積燒傷的