1、金思維對(duì)散發(fā)性老年性癡呆模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響         11-05-11 09:51:00     編輯：studa20           作者：陳玉靜 田金洲 王蓉 盛樹力 時(shí)晶 尹軍祥 李樂軍 張雷明 宋崇順 任映【摘要】  ：目的 觀察中藥復(fù)方金思維對(duì)散發(fā)性老年性癡呆(SAD)大鼠模型學(xué)習(xí)記憶的影響。方法 采用雙側(cè)腦室注射微量鏈脲佐菌素(

2、STZ)建立散發(fā)性AD大鼠模型,金思維分為3個(gè)不同劑量對(duì)模型大鼠進(jìn)行3個(gè)月的治療。利用Morris水迷宮檢測(cè)大鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力并與鹽酸多奈哌齊進(jìn)行比較。結(jié)果 定位航行實(shí)驗(yàn)中,模型組大鼠平均逃避潛伏期和游泳距離較假手術(shù)組明顯延長(zhǎng)(P<0.05或P<0.01)；金思維各劑量組和多奈哌齊組平均逃避潛伏期和游泳距離較模型組明顯縮短(P<0.05或P<0.01)?？臻g探索實(shí)驗(yàn)中,模型組與假手術(shù)組比較,原平臺(tái)象限活動(dòng)時(shí)間明顯縮短(P<0.01)；金思維各劑量組與模型組比較,原站臺(tái)象限活動(dòng)時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.01)；與多奈哌齊組相比無顯著差異。結(jié)論 金思維能夠顯著改善

3、散發(fā)性SAD模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能。 【關(guān)鍵詞】  金思維阿爾茨海默病胰島素大鼠Abstract：Objective To establish rat models with Sporadic Alzheimers disease (SAD) induced by intracerebroventricular administration of streptozotocin (ic-STZ), and observe the effects of compound Jinsiwei (GETO) on learning and memorizing ability of rats.

4、 Methods To establish the Sporadic Alzheimers disease model by intracerebroventricular micro-injection of STZ bilaterally. GETO groups were treated with gastric perfusion of GETO in three different dosage for 3 months. Learning and memorizing ability of the rats were inspected through Morris water m

5、aze test. The effects of GETO and Donepezil were observed and compared. Results In place navigation test, the escape latency and swimming distance were significantly longer in the model group than that in the sham group (P<0.05 or P<0.01), but shorter in GETO groups and Donepezil group (P<0

6、.05 or P<0.01). In spatial probe test, compared with the sham group, swimming time in the platform of previous quadrant was significantly shorter in model group (P<0.01), but significantly longer in GETO groups (P<0.01), and there was no difference between Donepezil group and GETO groups. C

7、onclusion GETO can remarkably improved the learning and memorizing ability of SAD model rats.Key words：GETO；Alzheimers Disease；insulin；rat阿爾茨海默病(Alzheimers Disease,AD)是一種發(fā)病率高、危害性大的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病,其主要病理特征是腦細(xì)胞外以-淀粉樣蛋白(amyloidprotein,A)為中心的老年斑(senile plaques,SP)、腦細(xì)胞內(nèi)由高度磷酸化的微管相關(guān)蛋白tau蛋白構(gòu)成的神經(jīng)原纖維纏結(jié)(neurofibril

8、lary tangles,NFT)和腦內(nèi)由神經(jīng)細(xì)胞凋亡引起的區(qū)域性神經(jīng)細(xì)胞死亡。AD絕大多數(shù)為散發(fā)性(SAD),其病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,近年來發(fā)現(xiàn)其與2型糖尿病風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān),胰島素在其中起著重要作用。側(cè)腦室內(nèi)注射鏈脲佐菌素(Intracerebralstreptozotocin,ic-STZ)導(dǎo)致胰島素信號(hào)傳導(dǎo)障礙,可以引起AD樣的認(rèn)知功能障礙和神經(jīng)退行性改變1。本實(shí)驗(yàn)觀察大鼠經(jīng)側(cè)腦室注射微量STZ后引起的學(xué)習(xí)記憶變化情況,采用具有補(bǔ)腎益氣、活血化痰作用的中藥提取物金思維進(jìn)行治療,并用Morris水迷宮檢測(cè)治療后的改善情況。1  材料與方法1.1  動(dòng)物與分組

9、0;   清潔級(jí)健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠78只,體重250300 g,購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,合格證號(hào)：SCXK(京)20060008。實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物自由攝食和飲水(術(shù)前禁食),室溫2226 ,濕度28%30%。78只大鼠隨機(jī)分成假手術(shù)組(A組)、STZ側(cè)腦室注射組(B組)、STZ側(cè)腦室注射加多奈哌齊組(C組)及STZ側(cè)腦室注射加金思維大、中、小劑量組(D、E、F組),每組13只。1.2  藥物與試劑    STZ購自默克公司；金思維主要由人參莖葉皂苷、淫羊藿黃酮苷等組成,由河南宛西制藥有限公司提供(批號(hào)

10、20010923)；鹽酸多奈哌齊購自衛(wèi)材(中國)藥業(yè)有限公司(批號(hào)060307A)。其它試劑均為分析純。1.3  模型制備    參考文獻(xiàn)2方法,除A組外,所有大鼠經(jīng)10%水合氯醛(3 mL/kg)麻醉后,固定于江灣型C大鼠立體定位儀上,常規(guī)消毒皮膚,正中矢狀切口,分離骨膜,錐顱器鉆開顱骨,暴露硬腦膜。以微量注射器于每側(cè)側(cè)腦室各注射STZ約18 L(3 mg/kg,注射前將STZ溶于生理鹽水,濃度為25 mg/mL)。坐標(biāo)參考文獻(xiàn)3制訂：前囟后1.5 mm,矢狀縫左右旁開1.5 mm,腦表面下3.5 mm。第3天重復(fù)注射,劑量同前。假手術(shù)組操作同前,以等

11、量生理鹽水替代STZ。術(shù)后常規(guī)飼養(yǎng)至21 d,隨后應(yīng)用DigBehv動(dòng)物行為分析系統(tǒng)(上海吉量軟件科技有限公司)對(duì)所有大鼠進(jìn)行測(cè)試,觀察5 min內(nèi)其在暗箱中的活動(dòng)情況,將B組與A組進(jìn)行比較,以剔除未成模的動(dòng)物。1.4  給藥    于第2次造模后第22日開始按7 mL/kg劑量進(jìn)行治療,金思維以大0.3 g/(kg·d)、中0.15 g/(kg·d)、小劑量0.075g/(kg·d)配制成不同濃度；多奈哌齊按0.92 mg/kg劑量灌胃；A、B組給予等體積雙蒸水,均每日1次,共3個(gè)月。1.5  外周血糖檢測(cè)

12、60;   分別于術(shù)前和術(shù)后尾靜脈采血,微量血糖儀(Roche)測(cè)定外周血糖。1.6  Morris水迷宮行為學(xué)測(cè)試    Morris迷宮(由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供)為一個(gè)不銹鋼的圓柱形水池,水池底部及內(nèi)壁均涂成黑色,直徑為120 cm,高50 cm,水池壁標(biāo)明4個(gè)入水點(diǎn),由此將水池等分為4個(gè)象限(按逆時(shí)針方向定義為、),盛水后水深約30 cm,水溫控制在2225 。將一直徑11 cm、高29 cm的平臺(tái)固定于其中一象限,平臺(tái)在水平面下1 cm。迷宮上方安裝有攝像頭并與計(jì)算機(jī)相連接,自動(dòng)錄入大鼠游泳軌跡進(jìn)行分析。定位航行實(shí)驗(yàn)：

13、共5 d,將大鼠面向池壁分別從兩個(gè)象限的入水點(diǎn)放入水中,記錄其在120 s內(nèi)尋找到平臺(tái)的時(shí)間,即為逃避潛伏期。如果大鼠120 s內(nèi)不能找到平臺(tái)則由實(shí)驗(yàn)者用手牽引其到平臺(tái)上停留30 s,再放回到籠中。此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)反映大鼠的學(xué)習(xí)能力?？臻g探索實(shí)驗(yàn)：測(cè)量動(dòng)物對(duì)平臺(tái)空間位置的準(zhǔn)確記憶,即記憶保持能力。實(shí)驗(yàn)第6天,撤除平臺(tái),將大鼠任意選1個(gè)入水點(diǎn)放入水中,記錄120 s內(nèi)在目標(biāo)象限(原平臺(tái)所在象限)和其它各象限的游泳時(shí)間以及游泳距離；撤除平臺(tái)后,動(dòng)物在原目標(biāo)象限游泳時(shí)間。1.7  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法    應(yīng)用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)與分析。各組數(shù)據(jù)以x&#

14、177;s表示,組間均數(shù)比較采用方差分析檢驗(yàn),P<0.05或P<0.01為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2  結(jié)果2.1  Morris 水迷宮結(jié)果(見圖1、表1表3)表1  各組大鼠在定位航行實(shí)驗(yàn)中的平均逃避潛伏期(略)注：與A組比較,*P<0.05,*P<0.01；與B組比較,P<0.05,P<0.01(下同)表2  各組大鼠在定位航行實(shí)驗(yàn)中的游泳距離(略)表3  各組大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)第象限活動(dòng)時(shí)間(略)2.2  動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)    DigBehv動(dòng)物行為分析系統(tǒng)是觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在自然狀態(tài)下的活動(dòng)情況,用于評(píng)價(jià)藥物