1、專題一 基因工程高考真題試一試（3年9卷7考）1【2016課標卷】（15分）某一質粒載體如圖所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導致相應的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因,Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質粒載體用BamH酶切后,與用BamH酶切獲得的目的基因混合,加入DNA連接酶進行連接反應,用得到的混合物直接轉化大腸桿菌。結果大腸桿菌有的未被轉化,有的被轉化。被轉化的大腸桿菌有三種,分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質粒載體、含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}:(1)質粒載體作為基因工程的工具,應具備的基本條件有(答出兩點即可),而作為基因表達載體,除滿足

2、上述基本條件外,還需具有啟動子和終止子。 (2)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進行篩選,在上述四種大腸桿菌細胞中,未被轉化的和僅含環(huán)狀目的基因的細胞是不能區(qū)分的,其原因是;并且 和 的細胞也是不能區(qū)分的,其原因是。在上述篩選的基礎上,若要篩選含有插入了目的基因的重組質粒的大腸桿菌單菌落,還需使用含有的固體培養(yǎng)基。 (3)基因工程中,某些噬菌體經改造后可以作為載體,其DNA復制所需的原料來自于 。 2【2016課標卷】（15分）圖(a)中的三個DNA片段上依次表示出了EcoR、BamH和Sau3A三種限制性內切酶的識別序列與切割位點,圖(b)為某種表達載體的示意圖(載

3、體上的EcoR、Sau3A的切點是唯一的)。圖(a)圖(b)根據基因工程的有關知識,回答下列問題:(1)經BamH酶切后得到的目的基因可以與上述表達載體被酶切后的產物連接,理由是。 (2)若某人利用圖(b)所示的表達載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子,如圖(c)所示。這三種重組子中,不能在宿主細胞中表達目的基因產物的有,不能表達的原因是。 圖(c)(3)DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶,常見的有和,其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。3【2017課標卷】（15分）幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉

4、入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：在進行基因工程操作時，若要從植物體中提取幾丁質酶的mRNA，常選用嫩葉而不選用老葉作為實驗材料，原因是 。提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是 。以mRNA為材料可以獲得cDNA，其原理是 。若要使目的基因在受體細胞中表達，需要通過質粒載體而不能直接將目的基因導入受體細胞，原因是 （答出兩點即可）。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是 。若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是 。4【2017課標卷】（15分）真核生物基因中通常有

5、內含子，而原核生物基因中沒有，原核生物沒有真核生物所具有的切除內含子對應的RNA序列的機制。已知在人體中基因A（有內含子）可以表達出某種特定蛋白（簡稱蛋白A）?；卮鹣铝袉栴}：某同學從人的基因組文庫中獲得了基因A，以大腸桿菌作為受體細胞卻未得到蛋白A，其原因是 。若用家蠶作為表達基因A的載體，在噬菌體和昆蟲病毒兩種載體中，不選用 作為載體，其原因是 。若要高效地獲得蛋白A，可選用大腸桿菌作為受體，因為與家蠶相比，大腸桿菌具有 （答出兩點即可）等優(yōu)點。若要檢測基因A是否翻譯出蛋白A，可用的檢測物質是_（填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗體”）。艾弗里等人的肺炎雙球菌轉化實驗為證明DNA是遺傳物質做出

6、了重要貢獻，也可以說是基因工程的先導，如果說他們的工作為基因工程理論的建立提供了啟示，那么，這一啟示是 。 5【2018課標卷】（15分）回答下列問題：（1）博耶（HBoyer）和科恩（SCoben）將非洲爪蟾核糖體蛋白基因與質粒重組后導入大腸桿菌細胞中進行了表達。該研究除證明了質?？梢宰鳛檩d體外，還證明了_（答出亮點即可）。（2）體外重組的質?？赏ㄟ^Ca2+參與的_方法導入大腸桿菌細胞，而體外重組的噬菌體DNA通常需與_組裝成完整的噬菌體后，才能通過侵染的方法將重組的噬菌體DNA導入宿主細胞，在細菌、心肌細胞、葉肉細胞中，可作為重組噬菌體宿主細胞的是_。（3）真核生物基因（目的基因

7、）在大腸桿菌細胞內表達時，表達出的蛋白質可能會被降解。為防止蛋白質被降解，在實驗中應選用_的大腸桿菌作為受體細胞，在蛋白質純化的過程中因添加_的抑制劑。6【2018課標卷】（15分）某種熒光蛋白（GFP）在紫外線或藍光激發(fā)下會發(fā)出綠色熒光，這一特性可用于檢測細胞中目的基因的表達。某科研團隊將某種病毒的外殼蛋白（L1）基因連接在GFP基因的5末端，獲得了L1-GFP融合基因（簡稱為甲），并將其插入質粒P0，構建了真核表達載體P1其部分結構和酶切位點的示意圖如下，圖中E1E4四種限制酶產生的黏性末端各不相同?；卮鹣铝袉栴}：（1）據圖推斷，該團隊在將甲插入質粒P0時，使用了兩種限制酶，這兩種酶是_。

8、使用這兩種酶進行酶切是為了保證_，也是為了保證_。（2）將P1轉入體外培養(yǎng)的牛皮膚細胞后，若在該細胞中觀察到了綠色熒光，則說明L1基因在牛的皮膚細胞中完成了_和_過程。（3）為了獲得含有甲的牛，該團隊需要做的工作包括：將能夠產生綠色熒光細胞的_移入牛的_中，體外培養(yǎng)、胚胎移植等。（4）為了檢測甲是否存在于克隆牛的不同組織細胞中，某同學用PCR方法進行鑒定，在鑒定時應分別以該牛不同組織細胞的_（填“mRNA”“總RNA”或“核DNA”）作為PCR模板。基因工程思維導圖（把握知識框架，提高記憶效率）核心考點強化一、與DNA有關的幾種酶的辨析（從底物、作用部位、產物來比較）限制酶DNA連接酶DNA聚

9、合酶熱穩(wěn)定DNA聚合酶DNA酶解旋酶二、基因組文庫和部分基因組（如cDNA）文庫的比較3、 PCR的原理、條件和過程（關鍵詞：擴增）原理：PCR反應體系：3步過程：結果：例題：P243(2)四、基因表達載體構建的有關問題1.目的？2.方法？3.限制酶的選擇原則目的基因：內部無、兩端有質粒：也要有、一標記特殊情況：限制酶具有特異性，一般情況下，不同限制酶形成的黏性末端不同。但也有不同限制酶形成的黏性末端相同，可以用DNA連接酶進行連接。如GGATCC和GATC識別的序列不同，但處理后的黏性末端相同。為了避免目的基因和質粒的自身環(huán)化和隨意連接，也可使用相同的兩種限制酶分別切割目的基因和質粒，提高連

10、接效率。例：P356（8）例：科學家將人的生長激素基因與pBR322質粒進行重組，得到的重組質粒導入牛的受精卵，使其發(fā)育為轉基因牛，再通過細胞工程培育為轉基因克隆牛pBR322質粒含有兩個抗生素抗性基因和5個限制酶切點（如圖2）將重組質粒導入大腸桿菌，并成功地在大腸桿菌中得以表達請據圖回答問題（1） 圖1中顯示的人的生長激素基因是通過人工合成的，圖中過程需要的酶是_該過程所依據的堿基互補配對原則是_（用字母和箭頭表示）（2）圖1中的mRNA是從人體的哪些細胞中獲取的？_（3）重組質粒形成與否需要鑒定和篩選，方法是將重組質粒的DNA分子導入大腸桿菌，通過含抗生素的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，觀察大腸桿菌的生長、繁殖情況進行判斷，如圖3所示：如果受體菌在培養(yǎng)基A上能生長、繁殖形成菌落，而不能在培養(yǎng)基B上生長、繁殖，則使用限制酶a的切點是圖2中的_，即目的基因插入了_中如果受體菌在培養(yǎng)基A上不能生長、繁殖形成菌落，而在培養(yǎng)基B上能生長、繁殖，則使用限制酶a的切點是圖2中的_，即目的基因插入了_中如果受體菌在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B上都能生長、繁殖形成菌落，則使用限圖2中的制酶a的切點是_五、受體細胞的選擇及對