1、醫(yī)學生物學實驗醫(yī)學生物學實驗醫(yī)學微生物教研室醫(yī)學微生物教研室 2011年6月實驗八實驗八膿汁標本中金黃色葡萄球菌的鑒定實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容l膿汁標本中金黃色葡萄球菌的鑒定膿汁標本中金黃色葡萄球菌的鑒定 目的目的l熟悉臨床標本中常見化膿性細菌的分離鑒定程熟悉臨床標本中常見化膿性細菌的分離鑒定程序；掌握細菌分離培養(yǎng)的基本技術。序；掌握細菌分離培養(yǎng)的基本技術。實驗器材實驗器材l標本：膿拭子、感染分泌物或模擬膿汁標本l菌種：金黃色葡萄球菌培養(yǎng)物、表皮葡萄球菌l培養(yǎng)基：血瓊脂平板、甘露醇發(fā)酵管l其他：血漿、生理鹽水、革蘭染液、玻片、滴管 培養(yǎng)箱、 酒精燈、接種環(huán)等檢查原則檢查原則l 在膿汁標本中，以化膿性球

2、菌最為常見，本實 驗主要檢測金黃色葡萄球菌 l用藥前采集標本 l無菌操作標本檢測程序標本檢測程序 膿汁、膿性分泌物（未知菌液/固體培養(yǎng)物）涂 片革蘭染色鏡 檢血瓊脂平板接種直接菌落觀察血漿凝固酶試驗甘露醇發(fā)酵診斷報告檢查方法和結果報告檢查方法和結果報告 l直接顯微鏡檢查：取標本直接涂片，均勻涂成菌膜，自然干燥，固定后革蘭染色，油鏡觀察。l注：若染色后未發(fā)現(xiàn)細菌，可報告“直接鏡檢未發(fā)現(xiàn)細菌” 革蘭染色鏡檢革蘭染色鏡檢 形態(tài)形態(tài) 排列排列 染色性染色性 金黃色金黃色 葡萄球菌葡萄球菌檢查方法和結果報告檢查方法和結果報告 l細菌分離培養(yǎng)：取膿液或創(chuàng)傷分泌物接種于血瓊脂平板上（接種后4保存），劃線分離

3、，37培養(yǎng)1824h后，觀察菌落特征，取單個菌落進行革蘭染色鏡檢。l注：第2天觀察記錄結果；如培養(yǎng)4872h后仍然無菌生長，則報告“無細菌生長”。 血平板培養(yǎng)結果觀察血平板培養(yǎng)結果觀察 菌落特點菌落特點 溶血性溶血性 菌落顏色菌落顏色金黃色金黃色葡萄球菌葡萄球菌檢查方法和結果報告檢查方法和結果報告l血漿凝固酶試驗（玻片法）： l用滅菌接種環(huán)取標本和白葡菌（陰性對照）培養(yǎng)物少許，分別與玻片左右二側(cè)的生理鹽水制成均勻菌懸l于玻片玻片左右二側(cè)菌懸液中各加血漿一滴并輕輕搖勻l13分鐘內(nèi)觀察結果，出現(xiàn)顆粒狀凝集為血漿凝固酶試驗陽性，否則為陰性結果報告： 標本標本+ +血漿血漿 白葡菌白葡菌+ +血漿血漿陽性（陽性（+ +）/ /陰性（陰性（）檢查方法和結果報告檢查方法和結果報告l甘露醇發(fā)酵試驗：無菌操作取標本和白葡菌（陰性對照）培養(yǎng)物分別接種于甘露醇發(fā)酵管，其上覆蓋無菌液體石蠟油，37培養(yǎng)1824小時，觀察結果。金葡菌發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基變混濁，顏色由紫色變黃色，是為甘露醇發(fā)酵試驗陽性，而白葡菌相反。l注：第2天觀察記錄結果 標本標本+ +甘露醇甘露醇 白葡菌白葡菌+ +甘露醇甘露醇 陽性（陽性（+ +