1、實驗三球菌的培養(yǎng)和鑒定I球菌的檢驗程序球菌的檢驗程序標(biāo)本標(biāo)本直接檢查直接檢查（涂片、染色、鏡檢）（涂片、染色、鏡檢）分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)可疑菌落可疑菌落菌落特點菌落特點鑒定試驗鑒定試驗第第一一次次第第二二次次生化結(jié)果觀察生化結(jié)果觀察莢膜染色莢膜染色結(jié)果討論與分析結(jié)果討論與分析第三次形態(tài)、色素、溶血形態(tài)、色素、溶血血漿凝固酶、血漿凝固酶、觸酶、菊糖發(fā)酵、觸酶、菊糖發(fā)酵、甘露醇發(fā)酵、膽汁溶菌、甘露醇發(fā)酵、膽汁溶菌、小白鼠毒力試驗小白鼠毒力試驗教學(xué)目標(biāo)與要求教學(xué)目標(biāo)與要求v了解：了解： 腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形態(tài)和染色特性腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形態(tài)和染色特性v理解：理解： 葡萄球菌屬和鏈球菌屬的

2、主要生化反應(yīng)原理葡萄球菌屬和鏈球菌屬的主要生化反應(yīng)原理v掌握：掌握： 1. 1.葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序 2. 2.葡萄球菌屬、鏈球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法葡萄球菌屬、鏈球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法重點與難點重點與難點v重點：重點： 葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序和鑒定方法葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序和鑒定方法 v難點：難點： 葡萄球菌屬、鏈球菌屬的鑒別要點葡萄球菌屬、鏈球菌屬的鑒別要點 本次實驗內(nèi)容本次實驗內(nèi)容v1.1.標(biāo)本的直接鏡檢標(biāo)本的直接鏡檢 （細(xì)菌革蘭染色和形態(tài)觀察）（細(xì)菌革蘭染色和形態(tài)觀察）v2.2.細(xì)菌的分離培養(yǎng)細(xì)菌的分離培養(yǎng) （普通瓊脂平板、

3、血瓊脂平板接種）（普通瓊脂平板、血瓊脂平板接種）標(biāo)本標(biāo)本5 5株待測標(biāo)本株待測標(biāo)本培養(yǎng)基培養(yǎng)基普通瓊脂平板、血瓊脂平板普通瓊脂平板、血瓊脂平板試劑試劑革蘭染色液、生理鹽水革蘭染色液、生理鹽水其他其他接種環(huán)、接種針、載玻片、酒精燈等接種環(huán)、接種針、載玻片、酒精燈等實驗器材一、直接檢查一、直接檢查 5 5個標(biāo)本分別涂片并革蘭染色鏡檢個標(biāo)本分別涂片并革蘭染色鏡檢實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容 一一涂片涂片生理鹽生理鹽水水接種環(huán)接種環(huán)結(jié)晶紫結(jié)晶紫碘液碘液95%95%乙乙醇醇復(fù)紅復(fù)紅自然干燥自然干燥媒染媒染1min1min脫色脫色30s30s復(fù)染復(fù)染30s30s干燥干燥鏡檢鏡檢固定固定初染初染1min1min干燥干燥

4、鏡檢鏡檢常見致病性球菌染色特點常見致病性球菌染色特點葡萄球菌鏈球菌雙球菌 革蘭陽性革蘭陽性 革蘭陽性革蘭陽性 革蘭陽性革蘭陽性不規(guī)則成堆排列不規(guī)則成堆排列鏈狀排列鏈狀排列 矛頭狀成雙排列矛頭狀成雙排列腦膜炎奈瑟球菌腦膜炎奈瑟球菌 淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 革蘭陰性球菌革蘭陰性球菌奈瑟菌染色特點：腎形或豆形，成雙排列、奈瑟菌染色特點：腎形或豆形，成雙排列、凹面相對的革蘭陰性球菌凹面相對的革蘭陰性球菌實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容 二二細(xì)菌分離培養(yǎng)細(xì)菌分離培養(yǎng):( :(分區(qū)劃線分離法分區(qū)劃線分離法) ) v標(biāo)本分別接種至普通瓊脂和血平板標(biāo)本分別接種至普通瓊脂和血平板乙型鏈球菌， 溶血環(huán)溶血環(huán)肺炎鏈球菌，草綠色 溶血

5、環(huán)溶血環(huán)第第 2 2區(qū)劃線區(qū)劃線第第1 1區(qū)劃線區(qū)劃線 第第 3 3區(qū)劃線區(qū)劃線分區(qū)劃線分離法（三線法）分區(qū)劃線分離法（三線法）實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容 二二學(xué)員實驗操作與討論：學(xué)員實驗操作與討論：55min55min 分別進行涂片染色和鏡檢、細(xì)菌接種，并對分別進行涂片染色和鏡檢、細(xì)菌接種，并對結(jié)果進行討論。結(jié)果進行討論。操作內(nèi)容操作內(nèi)容初染初染1min1min涂片涂片生理生理鹽水鹽水接種環(huán)接種環(huán)結(jié)晶紫結(jié)晶紫碘液碘液95%95%乙醇乙醇復(fù)紅復(fù)紅自然干燥自然干燥媒染媒染1min1min脫色脫色30s30s復(fù)染復(fù)染30s30s干燥干燥鏡檢鏡檢固定固定干燥干燥鏡檢鏡檢一、五個標(biāo)本的涂片、染色一、五個標(biāo)本的涂

6、片、染色二、將五個標(biāo)本分別接種至血平板二、將五個標(biāo)本分別接種至血平板 （分區(qū)劃線法）（分區(qū)劃線法）五株待測菌的主要鑒定結(jié)果五株待測菌的主要鑒定結(jié)果性狀性狀革蘭染色革蘭染色菌落、溶血環(huán)菌落、溶血環(huán)觸酶觸酶甘露醇發(fā)酵甘露醇發(fā)酵1 12 23 34 45 5血漿凝固酶血漿凝固酶菊糖發(fā)酵菊糖發(fā)酵膽汁溶菌膽汁溶菌診斷診斷小結(jié)小結(jié)+，球狀，不規(guī)則+，球狀，不規(guī)則+，成雙或呈鏈狀+，成雙或呈鏈狀+，矛頭狀成雙排列1. 1. 致病性球菌的鑒定流程？致病性球菌的鑒定流程？2. 2. 葡萄球菌屬和鏈球菌屬的細(xì)菌染色和形態(tài)葡萄球菌屬和鏈球菌屬的細(xì)菌染色和形態(tài)區(qū)別？區(qū)別？復(fù)習(xí)思考題復(fù)習(xí)思考題臨床微生物學(xué)和微生物檢驗臨

7、床微生物學(xué)和微生物檢驗實驗三實驗三 球菌的培養(yǎng)和鑒定球菌的培養(yǎng)和鑒定 教教 員：員： 顧顧 江江 單單 位：位： 臨床微生物學(xué)教研室臨床微生物學(xué)教研室 E-mail: jianggu2012163 E-mail: jianggu2012163 球菌的檢驗程序球菌的檢驗程序標(biāo)本標(biāo)本直接檢查直接檢查（涂片、染色、鏡檢）（涂片、染色、鏡檢）分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)可疑菌落可疑菌落菌落特點菌落特點鑒定試驗鑒定試驗第第一一次次第第二二次次生化結(jié)果觀察生化結(jié)果觀察莢膜染色莢膜染色結(jié)果討論與分析結(jié)果討論與分析第三次形態(tài)、色素、溶血形態(tài)、色素、溶血血漿凝固酶、血漿凝固酶、觸酶、菊糖發(fā)觸酶、菊糖發(fā)酵、酵、甘露醇發(fā)酵、膽

8、汁溶菌、甘露醇發(fā)酵、膽汁溶菌、小白鼠毒力試驗小白鼠毒力試驗教學(xué)目標(biāo)與要求教學(xué)目標(biāo)與要求v了解：了解： 腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形態(tài)和染色特性腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形態(tài)和染色特性v理解：理解： 葡萄球菌屬和鏈球菌屬的主要生化反應(yīng)原理葡萄球菌屬和鏈球菌屬的主要生化反應(yīng)原理v掌握：掌握： 1. 1.葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序 2. 2.葡萄球菌屬、鏈球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法葡萄球菌屬、鏈球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法重點與難點重點與難點v重點：重點： 葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序和鑒定方法葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序和鑒定方法 v難點：難點： 葡萄球菌屬、鏈

9、球菌屬的鑒別要點葡萄球菌屬、鏈球菌屬的鑒別要點 本次課實驗內(nèi)容本次課實驗內(nèi)容v細(xì)菌菌落特征觀察細(xì)菌菌落特征觀察v細(xì)菌革蘭染色細(xì)菌革蘭染色v生化反應(yīng)鑒定生化反應(yīng)鑒定標(biāo)本標(biāo)本5 5個檢驗標(biāo)本的培養(yǎng)物個檢驗標(biāo)本的培養(yǎng)物培養(yǎng)基培養(yǎng)基甘露醇發(fā)酵管、菊糖發(fā)酵管、肉湯培養(yǎng)基甘露醇發(fā)酵管、菊糖發(fā)酵管、肉湯培養(yǎng)基試劑試劑革蘭染色液、革蘭染色液、HH2 2OO2 2、血漿、生理鹽水、血漿、生理鹽水器材器材接種環(huán)、載玻片、酒精燈、顯微鏡等接種環(huán)、載玻片、酒精燈、顯微鏡等實驗器材實驗內(nèi)容一實驗內(nèi)容一 細(xì)菌菌落特征觀察細(xì)菌菌落特征觀察v大小大小v形狀形狀v突起突起v邊緣邊緣v表面表面v溶血溶血v色素色素v氣味氣味完全完

10、全溶血溶血表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌乙型鏈球菌乙型鏈球菌白色菌落白色菌落無溶血環(huán)無溶血環(huán)葡萄球菌鏈球菌肺炎鏈球菌 革蘭陽性革蘭陽性 革蘭陽性革蘭陽性 革蘭陽性革蘭陽性不規(guī)則成堆排列不規(guī)則成堆排列鏈狀排列鏈狀排列矛頭狀成雙排列矛頭狀成雙排列實驗內(nèi)容二實驗內(nèi)容二 細(xì)菌革蘭染色細(xì)菌革蘭染色 球菌球菌 球菌球菌 球菌球菌v革蘭染色革蘭染色水 洗水洗水 洗水 洗實驗內(nèi)容二實驗內(nèi)容二 細(xì)菌革蘭染色細(xì)菌革蘭染色觸酶試驗觸酶試驗甘露醇發(fā)酵試驗甘露醇發(fā)酵試驗菊糖發(fā)酵試驗菊糖發(fā)酵試驗?zāi)懼芫囼災(zāi)懼芫囼炑獫{凝固酶試驗血漿凝固酶試驗實驗內(nèi)容三實驗內(nèi)容三 生化反應(yīng)鑒定生化反應(yīng)鑒定1.1.

11、觸酶試驗觸酶試驗【原理原理】 H H2 2OO2 2 H H2 2O + OO + O2 2【操作操作】取潔凈玻片一張，滴加取潔凈玻片一張，滴加3 3 HH2 20 02 2一滴，以接種環(huán)分別取待一滴，以接種環(huán)分別取待檢細(xì)菌培養(yǎng)物少許，在檢細(xì)菌培養(yǎng)物少許，在HH2 20 02 2中磨勻，立即觀察結(jié)果中磨勻，立即觀察結(jié)果【結(jié)果結(jié)果】陽性為半分種內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡。葡萄球菌為陽性，鏈球菌為陰性。陽性為半分種內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡。葡萄球菌為陽性，鏈球菌為陰性?！疽饬x意義】 實驗內(nèi)容三實驗內(nèi)容三 生化反應(yīng)鑒定生化反應(yīng)鑒定過氧化氫酶過氧化氫酶2. 2. 血漿凝固酶試驗血漿凝固酶試驗【原理原理】致病性葡萄球菌能產(chǎn)生

12、血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原變?yōu)椴恢虏⌒云咸亚蚓墚a(chǎn)生血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白，附于細(xì)胞表面生成凝塊。溶性纖維蛋白，附于細(xì)胞表面生成凝塊?！静僮鞑僮鳌咳⊥醚獫{和生理鹽水各取兔血漿和生理鹽水各1 1滴分別滴于載玻片上，用接種環(huán)滴分別滴于載玻片上，用接種環(huán)挑取細(xì)菌，混合后觀察。挑取細(xì)菌，混合后觀察。【結(jié)果結(jié)果】金黃色葡萄球菌為陽性，表皮葡萄球菌為陰性金黃色葡萄球菌為陽性，表皮葡萄球菌為陰性【意義意義】實驗內(nèi)容三實驗內(nèi)容三 生化反應(yīng)鑒定生化反應(yīng)鑒定3. 3. 甘露醇發(fā)酵試驗甘露醇發(fā)酵試驗【原理原理】致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶類，能發(fā)酵甘露致病性葡萄球菌多含有分解甘露

13、醇的酶類，能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色。醇產(chǎn)酸，培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色?！静僮鞑僮鳌考?xì)菌分別接種甘露醇單糖發(fā)酵管，經(jīng)細(xì)菌分別接種甘露醇單糖發(fā)酵管，經(jīng)3737孵育孵育18-24h18-24h觀察結(jié)果。觀察結(jié)果?！窘Y(jié)果結(jié)果】金黃色葡萄球菌為陽性，表皮葡萄球菌為陰性金黃色葡萄球菌為陽性，表皮葡萄球菌為陰性實驗內(nèi)容三實驗內(nèi)容三 生化反應(yīng)鑒定生化反應(yīng)鑒定4.4.菊糖發(fā)酵試驗菊糖發(fā)酵試驗【原理原理】大多數(shù)肺炎鏈球菌可以分解菊糖，菊糖發(fā)酵產(chǎn)酸，指大多數(shù)肺炎鏈球菌可以分解菊糖，菊糖發(fā)酵產(chǎn)酸，指示劑呈酸性反應(yīng)，發(fā)酵管由黃色變?yōu)樽霞t色。示劑呈酸性反應(yīng)，發(fā)酵管由黃色變?yōu)樽霞t色?！静僮鞑僮鳌考?xì)菌分別接種菊糖發(fā)

14、酵管，經(jīng)細(xì)菌分別接種菊糖發(fā)酵管，經(jīng)3737孵育孵育18-24h18-24h觀察觀察結(jié)果。結(jié)果。【結(jié)果結(jié)果】用以區(qū)分肺炎鏈球菌和甲型鏈球菌，肺炎鏈球菌為陽性，用以區(qū)分肺炎鏈球菌和甲型鏈球菌，肺炎鏈球菌為陽性，甲型鏈球菌為陰性。甲型鏈球菌為陰性。實驗內(nèi)容三實驗內(nèi)容三 生化反應(yīng)鑒定生化反應(yīng)鑒定5.5.膽汁溶菌試驗?zāi)懼芫囼灐驹碓怼糠窝祖溓蚓僧a(chǎn)生一種自溶酶，膽鹽能活化肺炎鏈球菌可產(chǎn)生一種自溶酶，膽鹽能活化 自溶酶，加自溶酶，加速自溶過程，引起細(xì)胞自溶。速自溶過程，引起細(xì)胞自溶?！静僮鞑僮鳌繉嶒瀮?nèi)容三實驗內(nèi)容三 生化反應(yīng)鑒定生化反應(yīng)鑒定37，24 h+ 膽鹽（膽鹽（0.1 ml）37，0.5 h

15、【結(jié)果結(jié)果】液體由混濁變透明為陽性，肺炎鏈球菌為陽性，甲型鏈液體由混濁變透明為陽性，肺炎鏈球菌為陽性，甲型鏈球菌為陰性。球菌為陰性?！疽饬x意義】接種細(xì)菌接種細(xì)菌【注意事項注意事項】 無菌操作無菌操作 挑取細(xì)菌培養(yǎng)平板上的單個菌落進行生化鑒定。挑取細(xì)菌培養(yǎng)平板上的單個菌落進行生化鑒定。實驗內(nèi)容三實驗內(nèi)容三 生化反應(yīng)鑒定生化反應(yīng)鑒定本次課實驗操作內(nèi)容本次課實驗操作內(nèi)容1.51.5株細(xì)菌的菌落特征觀察株細(xì)菌的菌落特征觀察2.52.5株細(xì)菌的革蘭染色株細(xì)菌的革蘭染色3.53.5株細(xì)菌的生化反應(yīng)鑒定株細(xì)菌的生化反應(yīng)鑒定 觸酶試驗觸酶試驗 血漿凝固酶血漿凝固酶 甘露醇發(fā)酵試驗甘露醇發(fā)酵試驗 菊糖發(fā)酵試驗菊

16、糖發(fā)酵試驗 膽汁溶菌試驗?zāi)懼芫囼? 5種球菌的主要生物學(xué)性狀種球菌的主要生物學(xué)性狀鑒別要點鑒別要點革蘭染色革蘭染色觸酶觸酶1 1號號2 2號號3 3號號4 4號號5 5號號血漿凝固酶血漿凝固酶膽汁溶菌試驗?zāi)懼芫囼烆伾伾苎苎涮卣骶涮卣魃磻?yīng)生化反應(yīng)結(jié)結(jié) 論論甘露醇發(fā)酵試驗甘露醇發(fā)酵試驗菊糖發(fā)酵試驗菊糖發(fā)酵試驗重要的生化試驗重要的生化試驗v觸酶試驗可區(qū)分葡萄球菌和鏈球菌。觸酶試驗可區(qū)分葡萄球菌和鏈球菌。v血漿凝固酶試驗和甘露醇發(fā)酵試驗是區(qū)分致病血漿凝固酶試驗和甘露醇發(fā)酵試驗是區(qū)分致病性和非致病性葡萄球菌。性和非致病性葡萄球菌。v膽汁溶菌試驗可區(qū)分甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌。膽汁溶

17、菌試驗可區(qū)分甲型鏈球菌和肺炎鏈球菌。小 結(jié)v葡萄球菌屬和鏈球菌屬的主要菌落特征？葡萄球菌屬和鏈球菌屬的主要菌落特征？v區(qū)分葡萄球菌屬和鏈球菌屬的主要生化反應(yīng)區(qū)分葡萄球菌屬和鏈球菌屬的主要生化反應(yīng)是什么？是什么？v區(qū)分肺炎鏈球菌和甲型鏈球菌的生化反應(yīng)是區(qū)分肺炎鏈球菌和甲型鏈球菌的生化反應(yīng)是什么？什么？復(fù)習(xí)思考題復(fù)習(xí)思考題臨床微生物學(xué)和微生物檢驗臨床微生物學(xué)和微生物檢驗實驗三實驗三 球菌的培養(yǎng)和鑒定球菌的培養(yǎng)和鑒定IIIIII 教教 員：員： 顧顧 江江 單單 位：位： 臨床微生物學(xué)教研室臨床微生物學(xué)教研室 球菌的檢驗程序球菌的檢驗程序標(biāo)本標(biāo)本直接檢查直接檢查（涂片、染色、鏡檢）（涂片、染色、鏡檢

18、）分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)可疑菌落可疑菌落菌落特點菌落特點鑒定試驗鑒定試驗第第一一次次第第二二次次生化結(jié)果觀察生化結(jié)果觀察莢膜染色莢膜染色結(jié)果討論與分析結(jié)果討論與分析第三次形態(tài)、色素、溶血形態(tài)、色素、溶血血漿凝固酶、血漿凝固酶、觸酶、菊糖發(fā)觸酶、菊糖發(fā)酵、酵、甘露醇發(fā)酵、膽汁溶菌、甘露醇發(fā)酵、膽汁溶菌、小白鼠毒力試驗小白鼠毒力試驗本次課實驗內(nèi)容本次課實驗內(nèi)容v生化結(jié)果觀察生化結(jié)果觀察v莢膜染色莢膜染色v結(jié)果討論與分析結(jié)果討論與分析教學(xué)目標(biāo)與要求教學(xué)目標(biāo)與要求v了解：了解： 腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形態(tài)和染色特性腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的形態(tài)和染色特性v理解：理解： 葡萄球菌屬和鏈球菌屬的主要生化反應(yīng)

19、原理葡萄球菌屬和鏈球菌屬的主要生化反應(yīng)原理v掌握：掌握： 1. 1.葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序 2. 2.葡萄球菌屬、鏈球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法葡萄球菌屬、鏈球菌屬的分離培養(yǎng)與鑒定方法重點與難點重點與難點v重點：重點： 葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序和鑒定方法葡萄球菌屬、鏈球菌屬的檢驗程序和鑒定方法 v難點：難點： 葡萄球菌屬、鏈球菌屬的鑒別要點葡萄球菌屬、鏈球菌屬的鑒別要點 標(biāo)本標(biāo)本5 5株待測細(xì)菌株待測細(xì)菌（金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型（金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型鏈球菌、甲型鏈球菌、肺炎鏈球菌）鏈球菌、甲型鏈球菌、肺炎鏈球菌）實驗動物實驗動

20、物感染肺炎鏈球菌的小白鼠感染肺炎鏈球菌的小白鼠試劑試劑10%10%去氧膽酸鈉溶液，結(jié)晶紫染液，去氧膽酸鈉溶液，結(jié)晶紫染液，20%20%硫酸銅溶液硫酸銅溶液器材器材接種環(huán)、載玻片、酒精燈、顯微鏡等接種環(huán)、載玻片、酒精燈、顯微鏡等實驗器材觸酶試驗觸酶試驗甘露醇發(fā)酵試驗甘露醇發(fā)酵試驗菊糖發(fā)酵試驗菊糖發(fā)酵試驗?zāi)懼芫囼災(zāi)懼芫囼炑獫{凝固酶試驗血漿凝固酶試驗實驗內(nèi)容一實驗內(nèi)容一 生化反應(yīng)結(jié)果觀察生化反應(yīng)結(jié)果觀察1. 1. 甘露醇發(fā)酵試驗甘露醇發(fā)酵試驗【操作操作】觀察第二次課接種的甘露醇發(fā)酵生化管的顏色變化，致病觀察第二次課接種的甘露醇發(fā)酵生化管的顏色變化，致病性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶類，能發(fā)酵

21、甘露醇產(chǎn)酸，培養(yǎng)性葡萄球菌多含有分解甘露醇的酶類，能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色為陽性?；勺仙?yōu)辄S色為陽性。 【結(jié)果結(jié)果】金黃色葡萄球菌為陽性，表皮葡萄球菌為陰性金黃色葡萄球菌為陽性，表皮葡萄球菌為陰性實驗內(nèi)容一實驗內(nèi)容一 生化反應(yīng)結(jié)果觀察生化反應(yīng)結(jié)果觀察2.2.菊糖發(fā)酵試驗菊糖發(fā)酵試驗【操作操作】觀察第二次課接種的菊糖發(fā)酵試驗生化管的顏色變觀察第二次課接種的菊糖發(fā)酵試驗生化管的顏色變化，大多數(shù)肺炎雙球菌可以分解菊糖，菊糖發(fā)酵產(chǎn)酸，指化，大多數(shù)肺炎雙球菌可以分解菊糖，菊糖發(fā)酵產(chǎn)酸，指示劑呈酸性反應(yīng)，發(fā)酵管由黃色變?yōu)樽霞t色為陽性。示劑呈酸性反應(yīng)，發(fā)酵管由黃色變?yōu)樽霞t色為陽性。 【結(jié)果

22、結(jié)果】用以區(qū)分肺炎鏈球菌和甲型鏈球菌，肺炎鏈球菌為陽性，甲用以區(qū)分肺炎鏈球菌和甲型鏈球菌，肺炎鏈球菌為陽性，甲型鏈球菌為陰性。型鏈球菌為陰性。實驗內(nèi)容一實驗內(nèi)容一 生化反應(yīng)結(jié)果觀察生化反應(yīng)結(jié)果觀察3.3.膽汁溶菌試驗?zāi)懼芫囼灐静僮鞑僮鳌?7，24 h+ 膽鹽（膽鹽（0.1 ml）37，0.5 h【結(jié)果結(jié)果】液體由混濁變透明為陽性，肺炎鏈球菌為陽性，甲型鏈液體由混濁變透明為陽性，肺炎鏈球菌為陽性，甲型鏈球菌為陰性。球菌為陰性?！疽饬x意義】接種細(xì)菌接種細(xì)菌實驗內(nèi)容一實驗內(nèi)容一 生化反應(yīng)結(jié)果觀察生化反應(yīng)結(jié)果觀察實驗內(nèi)容二實驗內(nèi)容二 莢膜染色莢膜染色【實驗原理實驗原理】 莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外的一

23、層粘液狀或膠質(zhì)狀物質(zhì)。莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外的一層粘液狀或膠質(zhì)狀物質(zhì)。由于莢膜與染料的親和力弱，不容易著色；而且可溶于由于莢膜與染料的親和力弱，不容易著色；而且可溶于水，易在用水沖洗時被除去。所以通常用襯托染色法水，易在用水沖洗時被除去。所以通常用襯托染色法( (負(fù)負(fù)染色法染色法) )染色，使菌體和背景著色，而莢膜不著色，從染色，使菌體和背景著色，而莢膜不著色，從而在菌體周圍形成一透明圈。而在菌體周圍形成一透明圈。實驗內(nèi)容二實驗內(nèi)容二 莢膜染色莢膜染色【操作步驟操作步驟】 v制片：解剖肺炎鏈球菌感染的小鼠，用棉簽蘸取腹制片：解剖肺炎鏈球菌感染的小鼠，用棉簽蘸取腹腔液印片，空氣自然干燥，無需加熱

24、固定。腔液印片，空氣自然干燥，無需加熱固定。v染色：滴加結(jié)晶紫液，于火焰上加溫染色，使冒蒸汽為染色：滴加結(jié)晶紫液，于火焰上加溫染色，使冒蒸汽為止。用止。用20%20%硫酸銅溶液沖洗，勿水洗，干后油鏡觀察。硫酸銅溶液沖洗，勿水洗，干后油鏡觀察?！緦嶒灲Y(jié)果實驗結(jié)果】 菌體紫色，莢膜淡紫色菌體紫色，莢膜淡紫色實驗內(nèi)容二實驗內(nèi)容二 莢膜染色莢膜染色【注意事項注意事項】 不加熱固定不加熱固定標(biāo)本經(jīng)染色后不可用水洗，必須用標(biāo)本經(jīng)染色后不可用水洗，必須用20% 20% CuSOCuSO4 4沖洗。沖洗。實驗內(nèi)容二實驗內(nèi)容二 莢膜染色莢膜染色本次課實驗操作內(nèi)容本次課實驗操作內(nèi)容v 觀察記錄觀察記錄5 5種球菌的生化反應(yīng)結(jié)果種球菌的生化