1、 蚓激酶 Yinjimei Lumbrokinase 本品系人工養(yǎng)殖的赤子愛(ài)勝蚓（Eisenia Foetida Savigny）中提取制備的一組蛋白水解酶。按干燥品計(jì)算，每1mg效價(jià)應(yīng)不得少于12000單位。每1mg蛋白中蚓激酶比活力不得少于20000單位?！拘誀睢?本品為淡黃色至黃褐色粉末；味腥，有引濕性?！捐b別】 （1）取本品適量，加水制成每1ml中含0.5mg的溶液，照分光光度法（中國(guó)藥典2000年版二部附錄IV A）測(cè)定，在278nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。（2）取本品適量，加0.9氯化鈉溶液制成每1ml中含10mg的溶液，作為供試品溶液；用6號(hào)針頭取動(dòng)物血1滴于試管底部，30分鐘后，加

2、供試品溶液1ml置試管中，輕輕搖動(dòng)，血凝塊應(yīng)在60分鐘內(nèi)溶解。以0.9氯化鈉溶液1ml為空白，同法操作，血凝塊應(yīng)不溶解?！緳z查】 酸堿度 取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，依法測(cè)定（中國(guó)藥典2000年版二部附錄VI H），pH值應(yīng)為6.08.0。溶液的澄清度與顏色 取本品適量，加水制成每1ml中含1mg的溶液，溶液應(yīng)澄清；如顯色，與黃色2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液（中國(guó)藥典2000年版二部附錄IX A第一法）比較，不得更深。 干燥失重 取本品適量，以五氧化二磷為干燥劑，在60減壓干燥至恒重，減失重量不得超過(guò)5.0（中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIII L）?！颈然盍y(cè)定】 效價(jià)測(cè)定 （1）試劑 0.

3、01mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.8） 取磷酸氫二鈉3.58g，加水使溶解并稀釋至1000ml為A液；取磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）0.78g，加水使溶解并稀釋至500ml為B液；將A、B兩液混合至pH值為7.8。工作溶液 取0.01mol/L磷酸鹽緩沖液（pH7.8）與0.9氯化鈉溶液（1:17）混合。1.5%瓊脂糖溶液 取瓊脂糖1.5g，加工作溶液100ml加熱溶解。纖維蛋白原溶液 取纖維蛋白原適量，加工作溶液制成每1ml中含1.5mg的可凝蛋白溶液。凝血酶溶液 取凝血酶，加0.9氯化鈉溶液制成每1ml中含1BP單位的溶液。標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 取蚓激酶標(biāo)準(zhǔn)品，用0.9氯

4、化鈉溶液制成濃度分別為每1ml中含10000，8000，6000，4000，2000蚓激酶單位的溶液。供試品溶液的制備 取本品適量，加0.9氯化鈉溶液使溶解并稀釋成標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)的濃度。（2）測(cè)定法 取纖維蛋白原溶液39ml，置燒杯中，邊攪拌邊加入55瓊脂糖溶液39ml、凝血酶溶液3.0ml，立即混勻，快速倒入直徑14cm塑料培養(yǎng)皿中，室溫水平放置1小時(shí)，打孔。精密量取不同濃度的蚓激酶標(biāo)準(zhǔn)品溶液及供試品溶液各10ml，分別點(diǎn)在同一平皿中，加蓋，置37恒溫箱中反應(yīng)18小時(shí)。取出后用卡尺測(cè)量溶圈垂直兩直徑，以蚓激酶標(biāo)準(zhǔn)品單位數(shù)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，垂直兩直徑乘積的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，計(jì)算回歸方程，將供試品垂直

5、兩直徑乘積的對(duì)數(shù)代入回歸方程，計(jì)算供試品效價(jià)單位數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)品與供試品應(yīng)各做兩點(diǎn)，以平均值計(jì)算。蛋白含量 取本品約20mg，精密稱定，照氮測(cè)定法（中國(guó)藥典2000年版二部附錄VII D第二法）測(cè)定，將結(jié)果乘以6.25，即為供試品中蛋白含量，并計(jì)算每1mg供試品中的蛋白毫克數(shù)。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局 發(fā)布 國(guó)家藥典委員會(huì) 審定比活力 按下式計(jì)算比活力： 每1mg供試品中效價(jià)單位數(shù) 比活力 每1mg供試品中蛋白的毫克數(shù)【類別】 蛋白水解酶?！举A藏】 密封保存?！局苿?蚓激酶腸溶膠囊 中國(guó)藥典2000年版二部附錄IV A A 紫外分光光度法 1.儀器的校正和檢定 由于溫度變化對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波

6、長(zhǎng)經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)，因此除應(yīng)定期對(duì)所用的儀器進(jìn)行全面校正檢定外，還應(yīng)于測(cè)定前校正測(cè)定波長(zhǎng)。常用汞燈中的較強(qiáng)譜線237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm與576.96nm，或用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線進(jìn)行校正，鈥玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm與637.5nm波長(zhǎng)處有尖銳吸收峰，也可作波長(zhǎng)校正用，但因來(lái)源不同會(huì)有微小的差別，使用時(shí)應(yīng)注意。

7、 吸收度的準(zhǔn)確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較，如下表，相對(duì)偏差可在±1以內(nèi)。 波 長(zhǎng)/nm 235(最小) 257(最大) 313(最小) 350(最大) 吸收系數(shù)E1% 1cm 124.5 144.0 48.62 106.6 雜散光的檢查可按下頁(yè)表的試劑和濃度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中,在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定透光率，應(yīng)符合表中的規(guī)定。 試 劑 濃度 (g/ml) 測(cè)定用波長(zhǎng)(nm) 透光率 碘 化 鈉 1.0

8、0 220 0.8 亞 硝 酸 鈉 5.00 340 0.8 2.對(duì)溶劑的要求 測(cè)定供試品前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長(zhǎng)附近是否符合要求，即用1cm石英吸收池盛溶劑,以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質(zhì))測(cè)定其吸收度。溶劑和吸收池的吸收度，在220240nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.40，在241250nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.20，在251300nm范圍內(nèi)不得超過(guò)0.10，在300nm以上時(shí)不得超過(guò) 0.05。 3.測(cè)定法 測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)

9、位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)±2nm以內(nèi)；否則應(yīng)考慮該試樣的真?zhèn)?、純度以及儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度,并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.30.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度會(huì)偏低；狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。 用作鑒別和檢查項(xiàng)目的方法，分別按各品種項(xiàng)下的方法進(jìn)行。鑒別項(xiàng)下吸收度讀數(shù)的范圍可根據(jù)制劑的實(shí)際含量和供試液的稀釋倍數(shù)估算。 用于含量測(cè)定的方法一般有

10、以下幾種。 (1) 對(duì)照品比較法 按各品種項(xiàng)下的方法，分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的100±10,所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后，按下式計(jì)算供試品中被測(cè)溶液的濃度： C<X>(A<X>/A<R>)C<R> 式中 C<X>為供試品溶液的濃度； A<X>為供試品溶液的吸收度； C<R>為對(duì)照品溶液的濃度； A<R>為對(duì)照品溶液的吸收度。 (2) 吸收系數(shù)法 按各品種項(xiàng)下的方法配制供試品溶液，在

11、規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。用本法測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。 (3) 計(jì)算分光光度法 采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。本法有多種，使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí)，波長(zhǎng)的微小變化可能對(duì)測(cè)定結(jié)果造成顯著影響，故對(duì)照品和供試品測(cè)試條件應(yīng)盡可能一致。若測(cè)定時(shí)不用對(duì)照品，如維生素A測(cè)定法，則應(yīng)在測(cè)定時(shí)對(duì)儀器作仔細(xì)的校正和檢定。中國(guó)藥典2000年版二部附錄VI H H pH值測(cè)定法 除另有規(guī)定外，水溶液的pH值應(yīng)以玻璃電極為指示電極，用酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。酸度計(jì)應(yīng)定期檢定，使精密度和準(zhǔn)確度符合要求。 一、儀器校正用

12、的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)緩沖物質(zhì)配制，配制方法如下。 (1)草酸三氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 精密稱取在54±3干燥45小時(shí)的草酸三氫鉀KH3(C2O4)2·2H2O12.61g，加水使溶解并稀釋至1000ml。 (2)鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 精密稱取在115±5干燥23小時(shí)的鄰苯二甲酸氫鉀KHC8H4O410.12g，加水使溶解并稀釋至1000ml。 (3)磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(pH6.8) 精密稱取在115±5干燥23小時(shí)的無(wú)水磷酸氫二鈉3.533g與磷酸二氫鉀3.387g，加水使溶解并稀釋至1000ml。 (4)磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液(pH7.4) 精密稱取在115&

13、#177;5干燥23小時(shí)的無(wú)水磷酸氫二鈉4.303g與磷酸二氫鉀1.179g，加水使溶解并稀釋至1000ml。 (5)硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 精密稱取硼砂Na2B4O7·10H2O3.80g(注意避免風(fēng)化)，加水使溶解并稀釋至1000ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免與空氣中二氧化碳接觸。 不同溫度時(shí)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的pH值如下表。 溫 度 草酸三氫鉀 鄰苯二甲酸氫鉀 標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 0 167 401 5 167 400 10 167 400 15 167 400 20 168 400 25 168 400 30 168 401 35 169 402 40 169 403 45 170

14、404 50 171 406 溫 度 磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 硼 砂 （pH6.8） （pH7.4） 標(biāo)準(zhǔn)緩沖液 0 698 752 946 5 695 749 939 10 692 747 933 15 690 744 928 20 688 743 923 25 686 741 918 30 685 740 914 35 684 739 910 40 684 738 907 45 683 738 904 50 683 738 902 測(cè)定pH值時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格按儀器的使用說(shuō)明書(shū)操作，并注意下列事項(xiàng)。 二、注意事項(xiàng) (1)測(cè)定前，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，選擇二種pH值約相差3個(gè)單位的標(biāo)準(zhǔn)緩沖

15、液，使供試液的pH值處于二者之間。 (2)取與供試液pH值較接近的第一種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液對(duì)儀器進(jìn)行校正（定位）,使儀器示值與表列數(shù)值一致。 (3)儀器定位時(shí)，再用第二種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液核對(duì)儀器示值,誤差應(yīng)不大于±0.02pH值單位。若大于此偏差，則應(yīng)小心調(diào)節(jié)斜率，使示值與第二種標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的表列數(shù)值相符。重復(fù)上述定位與斜率調(diào)節(jié)操作，至儀器示值與標(biāo)準(zhǔn)緩沖液的規(guī)定數(shù)值相差不大于0.02pH單位。否則，須檢查儀器或更換電極后，再行校正至符合要求。 (4)每次更換標(biāo)準(zhǔn)緩沖液或供試液前，應(yīng)用純化水充分洗滌電極,然后將水吸盡，也可用所換的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液或供試液洗滌。 (5)在測(cè)定高pH值的供試品時(shí)，應(yīng)注意堿誤差的

16、問(wèn)題,必要時(shí)選用適用的玻璃電極測(cè)定。 (6)對(duì)弱緩沖液（如水）的pH值測(cè)定,先用鄰苯二甲酸氫鉀標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正儀器后測(cè)定供試液，并重取供試液再測(cè),直至pH值的讀數(shù)在1分鐘內(nèi)改變不超過(guò)±0.05為止；然后再用硼砂標(biāo)準(zhǔn)緩沖液校正儀器，再如上法測(cè)定；二次pH值的讀數(shù)相差應(yīng)不超過(guò)0.1,取二次讀數(shù)的平均值為其pH值。 (7)配制標(biāo)準(zhǔn)緩沖液與溶解供試品的水，應(yīng)是新沸過(guò)的冷蒸餾水，其pH值應(yīng)為5.57.0。 (8)標(biāo)準(zhǔn)緩沖液一般可保存23個(gè)月，但發(fā)現(xiàn)有渾濁、發(fā)霉或沉淀等現(xiàn)象時(shí),不能繼續(xù)使用。 中國(guó)藥典2000年版二部附錄IX A第一法 溶液顏色檢查法 第一法 除另有規(guī)定外，取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試

17、品，加水溶解，置于25ml的納氏比色管中，加水稀釋至10ml。另取規(guī)定色調(diào)和色號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)比色液10ml，置于納氏比色管中，兩管同置白色背景上，自上向下透視，或同置白色背景前，平視觀察；供試品管呈現(xiàn)的顏色與對(duì)照管比較，不得更深。 比色用重鉻酸鉀液 取重鉻酸鉀，研細(xì)后，在120干燥至恒重,精密稱取0.4000g,置500ml量瓶中， 加適量水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。每1ml溶液中含0.800mg的K2Cr2O7。 比色用硫酸銅液 取硫酸銅約32.5g,加適量的鹽酸溶液(140)使溶解成500ml，精密量取10ml，置碘量瓶中,加水50ml、醋酸4ml與碘化鉀2g,用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mo

18、l/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液2ml,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失。每1ml硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于24.97mg的CuSO4·5H2O。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，在剩余的原溶液中加適量的鹽酸溶液(140)，使每1ml溶液中適含62.4mg的CuSO4·5H2O，即得。 比色用氯化鈷液 取氯化鈷約32.5g，加適量的鹽酸溶液(140)使溶解成500ml,精密量取2ml，置錐形瓶中，加水200ml，搖勻，加氨試液至溶液由淺紅色轉(zhuǎn)變至綠色后，加醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH6.0)10ml，加熱至60，再加二甲酚橙指示液5滴,用乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05mol/L)滴定

19、至溶液顯黃色.每1ml乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于11.90mg的CoCl2·6H2O。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，在剩余的原溶液中加適量的鹽酸溶液(140)，使每1ml溶液中適含59.5mgCoCl2·6H2O，即得。 各種色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備 按下表量取比色用氯化鈷液、比色用重鉻酸鉀液、比色用硫酸銅液與水，搖勻，即得。 各種色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制表 色 調(diào) 比色用氯化鈷液比色用重鉻酸鉀液比色用硫酸銅液 水 ml ml ml ml 黃綠色 12 228 72 688 黃 色 40 233 0 727 橙黃色 106 190 40 664 橙紅色 120 200

20、0 680 棕紅色 225 125 200 450 各種色調(diào)色號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的制備 按下表量取各色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液與水，搖勻，即得。 各種色調(diào)色號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的配制表 色 號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 貯備液 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 4.5 6.0 7.5 10.0 (ml) 加水量 9.5 9.0 8.5 8.0 7.5 7.0 5.5 4.0 2.5 0 (ml) 中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIII L干燥失重測(cè)定法 取供試品，混合均勻(如為較大的結(jié)晶,應(yīng)先迅速搗碎使成2mm以下的小粒)。取約1g或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的重量，置與供試品同樣條件下干燥至恒重的扁形

21、稱瓶中，精密稱定，除另有規(guī)定外，照各藥品項(xiàng)下規(guī)定的條件干燥至恒重。從減失的重量和取樣量計(jì)算供試品的干燥失重。 供試品干燥時(shí)，應(yīng)平鋪在扁形稱量瓶中，厚度不可超過(guò)5mm,如為疏松物質(zhì)，厚度不可超過(guò)10mm。放入烘箱或干燥器進(jìn)行干燥時(shí)，應(yīng)將瓶蓋取下，置稱量瓶旁，或?qū)⑵可w半開(kāi)進(jìn)行干燥；取出時(shí)，須將稱量瓶蓋好。置烘箱內(nèi)干燥的供試品，應(yīng)在干燥后取出置干燥器中放冷至室溫，然后稱定重量。 供試品如未達(dá)規(guī)定的干燥溫度即融化時(shí)，應(yīng)先將供試品于較低的溫度下干燥至大部分水分除去后，再按規(guī)定條件干燥。 當(dāng)用減壓干燥器或恒溫減壓干燥器時(shí),除另有規(guī)定外，壓力應(yīng)在2.67kPa(20mmHg)以下；干燥器中常用的干燥劑為無(wú)水氯化鈣、硅膠或五氧化二磷，恒溫減壓干燥器中常用的干燥劑為五氧化二磷。干燥劑應(yīng)保持在有效狀態(tài)。中國(guó)藥典2000年版二部附錄VII D第二法 第二法（半微量法） 蒸餾裝置如圖。圖中A為1000ml圓底燒瓶，B為安全瓶,C為連有氮?dú)馇虻恼麴s器，D為漏斗,E為直形冷凝管，F(xiàn)為100ml錐形瓶，G、H為橡皮管夾。 連接蒸餾裝置，A瓶中加水適量與甲基紅