1、微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室【基本要求基本要求】 1. 上實驗課時，把個人的書包和衣物放在衣柜上實驗課時，把個人的書包和衣物放在衣柜內(nèi)，穿好白大衣。隨身只帶必要的實習(xí)指導(dǎo)、內(nèi)，穿好白大衣。隨身只帶必要的實習(xí)指導(dǎo)、筆記本和文具。實驗室內(nèi)禁止飲食。筆記本和文具。實驗室內(nèi)禁止飲食。 2. 用過的實驗材料，放于指定地點，不得隨意用過的實驗材料，放于指定地點，不得隨意拋置。拋置。 3. 注意節(jié)約實驗試劑，愛護(hù)實驗器材。損壞器注意節(jié)約實驗試劑，愛護(hù)實驗器材。損壞器材時，應(yīng)立即報告指導(dǎo)教師，聽候處理。材時，應(yīng)立即報告指導(dǎo)教師，聽候處理。 4. 實驗結(jié)束后，將實驗臺整理清潔，方可離開實驗結(jié)束后，將實驗臺整理清潔，方

2、可離開實驗室。值日同學(xué)打掃好室內(nèi)衛(wèi)生并檢查水、實驗室。值日同學(xué)打掃好室內(nèi)衛(wèi)生并檢查水、電、等開關(guān)是否關(guān)好，防止意外事故發(fā)生。電、等開關(guān)是否關(guān)好，防止意外事故發(fā)生。2 指抗原Ag與相應(yīng)抗體Ab之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。可發(fā)生于體內(nèi)，也可發(fā)生于體外。 3解離解離Ag + AbAg Ab一定條件一定條件（動態(tài)平衡）（動態(tài)平衡）一、抗原抗體反應(yīng)的定義及用途一、抗原抗體反應(yīng)的定義及用途體內(nèi)反應(yīng)可介導(dǎo)殺菌、溶菌、調(diào)理、中和毒體內(nèi)反應(yīng)可介導(dǎo)殺菌、溶菌、調(diào)理、中和毒素等作用素等作用免疫病理損傷免疫病理損傷超敏反應(yīng)、免疫性疾病等超敏反應(yīng)、免疫性疾病等43D模型模型 IgG1IgIg：存在于血：存在于血清（占血

3、清免疫球清（占血清免疫球蛋白總量的蛋白總量的80%80%）和組織液中。和組織液中。5IgAIgM二、血清學(xué)反應(yīng)的特點：二、血清學(xué)反應(yīng)的特點：1、特異性特異性：抗原抗體在體外的結(jié)合與在體內(nèi)一樣，也具有專一性，即特異性。6分子基礎(chǔ)：分子基礎(chǔ)：Ag-ADAg-ADHVR-AbHVR-Ab空間結(jié)構(gòu)高度互補空間結(jié)構(gòu)高度互補V VH H和和V VL L各具三個各具三個HVRHVR與與ADAD互補互補應(yīng)用：應(yīng)用： 由于抗原抗體反應(yīng)具有高度特異性，故由于抗原抗體反應(yīng)具有高度特異性，故可用已知的抗原（抗體）來檢測相應(yīng)未知可用已知的抗原（抗體）來檢測相應(yīng)未知的抗體（或抗原）。的抗體（或抗原）。2、可逆性可逆性：抗

4、原與抗體的結(jié)合是非共價鍵結(jié)合，在一定條件下又可解離為游離狀態(tài)，反應(yīng)具有可逆性。7靜電引力靜電引力（electrostatic forces）范德華引力范德華引力:作用最小作用最?。╲an der Waals interactions）氫鍵氫鍵:最具特異性最具特異性（hydrogen bond ）疏水作用力疏水作用力:作用最大作用最大 （hydrophobic interactions） 3、可見性：反應(yīng)體系中抗原抗體的比例適當(dāng)，就能形成較大的抗原抗原抗體復(fù)合物抗體復(fù)合物，在有一定量電解質(zhì)或適宜pH等條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集、沉淀等可見反應(yīng)。89親水膠體親水膠體疏水膠體疏水膠體轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化NaCl

5、NaCl可見反應(yīng)可見反應(yīng)血清學(xué)反應(yīng)條件下，抗原抗體均帶負(fù)電荷，使極化的水分子在其周圍形成水化層，成為親水膠體。 當(dāng)抗原與抗體結(jié)合使表面電荷減少，水化層變薄，失去親水性能，抗原抗體復(fù)合物成為疏水膠體在電解質(zhì)作用下，中和膠體粒子表面的電荷，使各疏水膠體之間靠攏，形成可見的抗原抗體復(fù)合物親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體 4、階段性：抗原抗體反應(yīng)分兩個階段： 抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，反應(yīng)抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，反應(yīng)快，幾秒或幾分鐘，不可見快，幾秒或幾分鐘，不可見可見階段，短至數(shù)分、數(shù)小時，長至數(shù)可見階段，短至數(shù)分、數(shù)小時，長至數(shù)日，出現(xiàn)凝集、日，出現(xiàn)凝集、 沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象

6、沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象 10概念：兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)概念：兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)。構(gòu)的抗原表位，可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)。交叉反應(yīng)（交叉反應(yīng)（cross reactionscross reactions）抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖B親緣關(guān)系親緣關(guān)系越近，交叉反應(yīng)的程度也越高越近，交叉反應(yīng)的程度也越高 11三、血清學(xué)反應(yīng)的影響因素三、血清學(xué)反應(yīng)的影響因素121 1、反應(yīng)物自身因素、反應(yīng)物自身因素 * *抗原：理化特性、抗原：理化特性、AgAg決定簇數(shù)量和種類。決定簇數(shù)量和種類。 * *抗體：抗體：1

7、 1、來源、來源 2 2、特異性與親和力、特異性與親和力 3 3、濃度、濃度 比例要合適比例要合適13（1 1）電解質(zhì)）電解質(zhì) 作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層，作用：中和膠體表面電荷，破壞水化層， 使使AgAgAbAb聚集。聚集。 常用：常用：0.85%NaCl0.85%NaCl溶液溶液、緩沖液、緩沖液、CaCa2+2+、MgMg2+2+等。等。 注意：鹽析（注意：鹽析（saltingsalting）即電解質(zhì)濃度過高）即電解質(zhì)濃度過高 引起的非特異性蛋白質(zhì)沉淀。引起的非特異性蛋白質(zhì)沉淀。2 2、環(huán)境因素：、環(huán)境因素：（2 2）酸堿度）酸堿度 AgAg、AbAb多為蛋白質(zhì)，具兩性電離特性，有

8、其故有多為蛋白質(zhì)，具兩性電離特性，有其故有的的PI , pHPI , pH過高或過低均可影響過高或過低均可影響AgAg、AbAb反應(yīng)。反應(yīng)。 一般：一般：pH6pH68 8為宜，補體參與時為宜，補體參與時pH7.2pH7.27.47.4。 注意：自凝現(xiàn)象注意：自凝現(xiàn)象-即即pHpH達(dá)到或接近顆粒性抗達(dá)到或接近顆粒性抗原的原的PIPI時，引起的抗原非特異性自身凝集現(xiàn)象。時，引起的抗原非特異性自身凝集現(xiàn)象。（3 3）溫度）溫度影響反應(yīng)速度影響反應(yīng)速度一般：一般：151540 40 為宜，為宜，最適溫度：最適溫度：3737過高（過高（5656）: Ag-Ab: Ag-Ab解離，解離， AgAg、Ab

9、Ab變性，變性， 補體失活。補體失活。冷凝集實驗：冷凝集實驗：4 4 凝集，凝集，2020解離。解離。（4 4）其他）其他 適當(dāng)?shù)恼袷帯嚢璧瓤杉铀俜磻?yīng)適當(dāng)?shù)恼袷?、攪拌等可加速反?yīng)抗體的兩個抗體的兩個FabFab段段分別分別結(jié)合兩個結(jié)合兩個AgAg分子，分子，相互相互交叉結(jié)合連接成巨交叉結(jié)合連接成巨大的網(wǎng)格狀立體聚大的網(wǎng)格狀立體聚合物，（可見）。合物，（可見）。 Ab/Ag Ab/Ag過剩過剩過剩方的結(jié)合價得不到飽和，大過剩方的結(jié)合價得不到飽和，大多數(shù)游離存在，只形成小分子復(fù)多數(shù)游離存在，只形成小分子復(fù)合物（不可見）。合物（不可見）。只有抗原與抗體呈適當(dāng)比例時，才可出現(xiàn)可見的結(jié)合反應(yīng)。只有抗原

10、與抗體呈適當(dāng)比例時，才可出現(xiàn)可見的結(jié)合反應(yīng)。17四、傳統(tǒng)的血清學(xué)反應(yīng)四、傳統(tǒng)的血清學(xué)反應(yīng)1、凝集反應(yīng)、凝集反應(yīng)2、沉淀反應(yīng)、沉淀反應(yīng)3、補體參與的溶血反應(yīng)、補體參與的溶血反應(yīng)4、中和試驗、中和試驗（一）凝集反應(yīng)（一）凝集反應(yīng)1、定義： 顆粒性抗原（如細(xì)菌、紅血球等） +抗體凝集現(xiàn)象。 顆粒性抗原與相應(yīng)的抗體在體外結(jié)合，在電解質(zhì)存在的條件下，形成肉眼可見凝集塊，為凝集反應(yīng)，反應(yīng)中的抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。182、分類（1）直接凝集反應(yīng) 概念：天然的凝集原與相應(yīng)抗體直接結(jié)合呈現(xiàn)的細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象稱為直接凝集反應(yīng)。 應(yīng)用： 定性檢測ABO血型鑒定、細(xì)菌鑒定 定量檢測診斷傷寒病的肥達(dá)試

11、驗等1920血型鑒定血型鑒定（2）間接凝集反應(yīng)（）間接凝集反應(yīng)（3）間接凝集抑制試驗）間接凝集抑制試驗21（二）沉淀反應(yīng)（二）沉淀反應(yīng) 1、概念：可溶性抗原、概念：可溶性抗原+抗體抗體沉淀現(xiàn)象沉淀現(xiàn)象。 可溶性抗原（如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、可溶性抗原（如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、組菌體裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、組織浸出液等）與相應(yīng)的抗體結(jié)合，在適量電織浸出液等）與相應(yīng)的抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的細(xì)微的白色沉解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的細(xì)微的白色沉淀。淀。22232、分類 （1）液相中的沉淀反應(yīng)： 環(huán)狀沉淀、絮狀沉淀（2）凝膠擴(kuò)散： 單向擴(kuò)散

12、：1%瓊脂凝膠的孔徑約85納米，可允許各種Ag或Ab自由擴(kuò)散，由近及遠(yuǎn)形成濃度梯度。24通過標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線通過標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 不同病人抗原濃度測定1.測定沉淀環(huán)直徑2.在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找相應(yīng)抗原濃度火箭免疫電泳火箭免疫電泳火箭免疫電泳是單向單單向單擴(kuò)散和電泳技術(shù)相結(jié)合擴(kuò)散和電泳技術(shù)相結(jié)合的一種血清學(xué)試驗，是讓抗原在電場的作用下，在含有抗體的瓊脂中定向泳動，二者比例合適時形成類似火箭樣的沉淀峰。沉淀峰的高度與沉淀峰的高度與抗原的濃度成正比抗原的濃度成正比 。25電泳完畢后，觀察瓊脂板上沉淀峰，并測量從孔中心到峰尖的高度。以峰高為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)(對數(shù)坐標(biāo))，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出待檢樣品內(nèi)

13、抗原濃度26 可溶性抗原與相應(yīng)抗體在含適量電解質(zhì)的可溶性抗原與相應(yīng)抗體在含適量電解質(zhì)的瓊脂糖凝瓊脂糖凝膠膠板的對應(yīng)孔中各自向四周板的對應(yīng)孔中各自向四周自由擴(kuò)散自由擴(kuò)散,若兩者分子比若兩者分子比例適當(dāng)例適當(dāng),則在擴(kuò)散的一定時間后在兩孔之間相遇并生則在擴(kuò)散的一定時間后在兩孔之間相遇并生成白色沉淀線成白色沉淀線.雙向擴(kuò)散：(1) 沉淀線吻合吻合：待檢抗原與標(biāo)準(zhǔn)抗原完全相同。(2) 沉淀線相切相切：待檢抗原中含有與標(biāo)準(zhǔn)抗原相同的抗原，還含有另外的抗原與抗血清相對應(yīng)。(3) 沉淀線相交相交：待檢抗原有與抗血清對應(yīng)的抗原，但和標(biāo)準(zhǔn)抗原不同。(4) 沉淀線部分吻合部分吻合：待測抗原和標(biāo)準(zhǔn)抗原性質(zhì)相同，但含量

14、較低。A1：待檢抗原；A2：標(biāo)準(zhǔn)抗原27免疫電泳對流免疫電泳28在pH8.6的瓊脂凝膠中，抗體球蛋白泳向負(fù)極泳向負(fù)極；而一般抗原蛋白質(zhì)泳向正極泳向正極抗原和抗體將在兩孔之間相遇， （三）中和反應(yīng)（三）中和反應(yīng)：特異性抗體抑制多種抗原的生物學(xué)活性（細(xì)菌外毒素的毒性、酶的活性、病毒的感染性等）的反應(yīng)。 主要用于毒素的鑒定、病毒感染性疾病的診斷以及病毒的鑒定。例如在臨床實驗診斷中測定風(fēng)濕病患者體內(nèi)的抗鏈球菌 O抗體的反應(yīng)。2930（四）補體溶血：（四）補體溶血：紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體結(jié)合，可激活補體使紅細(xì)胞溶解，稱為補體溶血反應(yīng)或免疫溶血反應(yīng)。原理：補體激活的經(jīng)典途徑（補體的動畫）補體特點：補體可與任何抗

15、原抗體復(fù)合物結(jié)合，但不能單獨與抗原或抗體結(jié)合。在有特異抗體存在時可以溶解細(xì)胞（溶菌或溶血）。31溶血反應(yīng)溶血反應(yīng)RBCRBC+ + RBCRBC抗體抗體 ( (溶血素溶血素) )新鮮血清（補體）新鮮血清（補體）溶血溶血由抗原抗體復(fù)合物結(jié)合由抗原抗體復(fù)合物結(jié)合C1q啟動的途徑啟動的途徑 1. 激活劑激活劑 Ag-Ab復(fù)合物復(fù)合物(IgG1,IgG2,IgG3,IgM) 2. 參與成分參與成分 C1C9 3. 激活過程（三個階段）激活過程（三個階段） 識別階段識別階段 活化階段活化階段 膜攻擊階段膜攻擊階段 35五、現(xiàn)代免疫標(biāo)記技術(shù)五、現(xiàn)代免疫標(biāo)記技術(shù) 免疫標(biāo)記技術(shù)(Immuno-labellin

16、g technique)是指將抗原或抗體用熒光素、酶、放射性同位素和電子致密物質(zhì)等加以標(biāo)記，借以提高其靈敏度的一類新技術(shù)。 優(yōu)點：特異性強(qiáng)、靈敏度高、應(yīng)用范圍廣、反應(yīng)速度快、容易觀察、能定位、定量甚至定位。1、酶免疫測定（、酶免疫測定（Enzyme immunoassay,EIA) 用酶標(biāo)記的抗體或抗抗體來進(jìn)行的抗原抗用酶標(biāo)記的抗體或抗抗體來進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。體反應(yīng)。 用酶作標(biāo)記物用酶作標(biāo)記物 由于酶的催化作用可使原來無色的底物通由于酶的催化作用可使原來無色的底物通過水解、氧化或還原反應(yīng)而顯示顏色過水解、氧化或還原反應(yīng)而顯示顏色。37（以間接性（以間接性ELISAELISA為例）為例）：2、

17、放射免疫測定法（RIA）：383、免疫熒光技術(shù)、免疫熒光技術(shù)3940直接凝集試驗直接凝集試驗雙向擴(kuò)散試驗雙向擴(kuò)散試驗補體溶血試驗補體溶血試驗 一、直接凝集試驗一、直接凝集試驗試管法（1份/人） 試管法凝集試驗是一種半定量的試驗方法，是在試管內(nèi)將抗原或抗體稀釋不同倍數(shù)后加入等量的待檢抗體或抗原，根據(jù)每管內(nèi)的凝集程度，判定待檢樣品中相應(yīng)抗原或抗體的有無及其效價。 試驗中可能由于電解質(zhì)濃度或pH 值不適宜等原因，而引起抗原非特異性凝集，出現(xiàn)假陽性反應(yīng)，所以應(yīng)設(shè)立陰性對照管。41教材教材P29942材料：材料：1% 新鮮綿羊紅細(xì)胞懸液、羊紅細(xì)胞凝集素（兔抗綿羊紅細(xì)胞免疫血清）等方法方法：（理解對倍稀釋

18、法）：（理解對倍稀釋法）1. 取小試管7支，置于試管架上，編號。2. 用 1ml 刻度吸管吸生理鹽水，第一管加0.9ml，其余管各加0.5ml。3. 用 1ml 刻度吸管吸取兔抗羊紅細(xì)胞血清0.1ml 加入第一管 中，反復(fù)吹吸三次，使之與鹽水混勻反復(fù)吹吸三次，使之與鹽水混勻，吸出0.5ml注入第二管。同樣混勻后吸取0.5ml 注入第三管，依此類推。自第6管吸出0.5ml 棄掉。第八管不加血清作為對照。此時自第一管至第七管血清的稀釋倍數(shù)分別是1:101:10，1:201:20，1:401:401:3201:320，具體稀釋方法可參閱下圖。43血清稀釋度血清稀釋度 1：10 1：20 1：40 1

19、：80 1：160 1：320棄棄之之生理鹽水生理鹽水.血清血清.ml. 4. 各管加入綿羊紅細(xì)胞懸液 0.5ml，于是各管血清稀釋倍數(shù)又增加了一倍增加了一倍。 5. 將各管震蕩均勻，放入37溫箱中過夜，次日觀察結(jié)果。. 二、雙向擴(kuò)散試驗二、雙向擴(kuò)散試驗檢測血清中的AFP（1份/2人） 【操作方法】 1. 雙向瓊脂擴(kuò)散試驗抗原抗體孔位置如下圖所示 2. 用微量加樣器孔中分別加抗甲胎蛋白診斷血清，周圍孔 中分別加入待測血清和陽性對照血清，每孔加入25-30l。 3. 將瓊脂板放入密閉的盒內(nèi)（內(nèi)放浸有5%石炭酸的紗布以保持濕度），置37溫箱中，于24小時后觀察結(jié)果。44注意：加樣量力求準(zhǔn)確，勿使樣

20、品外溢或在孔緣上注意：加樣量力求準(zhǔn)確，勿使樣品外溢或在孔緣上殘存小汽泡，以免影響擴(kuò)散結(jié)果。殘存小汽泡，以免影響擴(kuò)散結(jié)果。原則：滿而不溢原則：滿而不溢44待測待測1AFP-AgAFP-Ab待測待測2定位標(biāo)記孔45微生物學(xué)與免疫學(xué)教研室一、分析上次結(jié)果一、分析上次結(jié)果（一）血球凝集（直接凝集試管法）血球凝集（直接凝集試管法）：觀察結(jié)果并分析461、從溫箱中輕輕取出試管架，不要搖動試管。先觀察對照管（第7管），此管血球不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，紅細(xì)胞在管底自然沉降呈現(xiàn)點狀結(jié)構(gòu)，上層液基本清澈透亮，管底可見紅細(xì)胞沉積物，呈圓形，邊緣整齊，輕輕振搖試管后，可見紅細(xì)胞浮起又分散仍呈懸液。2、試驗管從第一管看起，管底

21、有凝集塊，邊緣不整或卷起等現(xiàn)象，均為陽性反應(yīng)，分別用（+）、（）、（+）、（）、（+）、（）、（+）表示凝集程度。 （+）表示血球100% 凝集，紅細(xì)胞形成片層凝集，均勻布滿管底或邊緣皺縮如花環(huán)狀； （+）表示血球75% 凝集，紅細(xì)胞形成片層凝集，面積略多于（+）； （+）表示血球50% 凝集，紅細(xì)胞形成片層凝集，面積較小，邊緣較松散； （+）表示血球25%凝集，紅細(xì)胞沉于管底，周圍有散在的少量凝集。47 3. 按下列標(biāo)準(zhǔn)判定，記錄結(jié)果。 +：凝集特別顯著，紅細(xì)胞均勻地鋪于管底，呈一薄層邊緣有折迭狀。 +：凝集顯著，紅細(xì)胞均勻地鋪于管底呈一薄層，但周邊紅細(xì)胞凝集較疏松。 +：凝集清楚可見，紅細(xì)

22、胞平鋪于管底呈一薄層，中央可明顯見到一疏松的紅點。 +：紅細(xì)胞大部分沉集于管底成圓點狀，周圍有少量凝集的紅細(xì)胞。 ：紅細(xì)胞全部沉集于管底呈圓點狀，四周液體清晰。 4. 判斷效價：能見到明顯凝集現(xiàn)象（+）的血清最高稀釋度為該血清對1%綿羊紅細(xì)胞的凝集效價（或滴度）。一般以出現(xiàn) + 凝集反應(yīng)的最高血清稀釋倍數(shù)作為血清中所含凝集抗體的效價。48 （二）雙向擴(kuò)散（沉淀反應(yīng)）雙向擴(kuò)散（沉淀反應(yīng)）：觀察結(jié)果并分析 觀察各孔之間有無白色沉淀線白色沉淀線，根據(jù)他們的關(guān)系判斷結(jié)果。 在兩孔之間出現(xiàn)一清晰致密白色的沉淀線（抗原抗體復(fù)合物）為陽性反應(yīng)陽性反應(yīng)。若72 小時后仍未出現(xiàn)沉淀線則為陰性反應(yīng)。試驗時陽性對照

23、與待測血清兩者沉淀線發(fā)生吻合時，才能確定待測血清中含有甲胎蛋白。49三、實驗內(nèi)容三、實驗內(nèi)容 （一）補體溶血試驗（1份/4人） 試劑：2% 綿羊紅細(xì)胞、 溶血素（兔抗綿羊紅細(xì)胞免疫血清）、 補體（新鮮豚鼠血清） 綿羊紅細(xì)胞用前應(yīng)輕晃混勻，不可劇烈震蕩5051成分成分管號管號1%SRBC羊溶血素羊溶血素(2單位單位)補補 體體(2單位單位)生理鹽生理鹽水水結(jié)果結(jié)果10.50.50.50.520.50.51.030.50.51.040.50.5(人溶血素人溶血素)0.50.550.51.5實驗步驟實驗步驟混勻，混勻，37，30min 溶血素，即兔抗綿羊紅細(xì)胞抗體，是以SRBC作為抗原免疫家兔所得的

24、兔血清，一般實驗前56、30min滅活補體。 以溶血素最高稀釋度能產(chǎn)生完全溶血者確定為一個單位，正式試驗中一般使用兩個單位溶血素。5253成分成分管號管號1%SRBC羊溶血素羊溶血素(2單位單位)補補 體體(2單位單位)生理鹽生理鹽水水結(jié)果結(jié)果10.50.50.50.5溶血溶血20.50.51.0不溶不溶30.50.51.0不溶不溶40.50.5(人溶血素人溶血素)0.50.5不溶不溶50.51.5不溶不溶5455用用Hanks液配成液配成1 110106 6 細(xì)胞細(xì)胞/ml/ml的淋的淋巴細(xì)胞懸液。巴細(xì)胞懸液。提取外周血單個核細(xì)胞（提取外周血單個核細(xì)胞（PBMC） T細(xì)胞、B細(xì)胞表面具有抗原

25、識別受體和有絲分裂原受體植物血凝素（植物血凝素（PHAPHA）、刀豆蛋白）、刀豆蛋白A A（ConAConA）選擇性刺激選擇性刺激T T細(xì)胞細(xì)胞增殖增殖；脂多糖（脂多糖（LPSLPS）、葡萄球菌）、葡萄球菌A A蛋白（蛋白（SPASPA）可刺激可刺激B B細(xì)胞細(xì)胞增殖；增殖；56美美洲洲商商陸陸58成熟的人T細(xì)胞表面表達(dá)綿羊紅細(xì)胞（SRBC）受體（即CD2分子），能與SRBC結(jié)合形成玫瑰花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，可在光學(xué)顯微鏡下觀察計數(shù)。本法可用于檢測外周血T細(xì)胞的數(shù)量和比例，由此可間接反映機(jī)體的細(xì)胞免疫功能狀況。 E花環(huán)原理* TTBSRBCCD259實實驗驗結(jié)結(jié)果果淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗DNADNA合成合成分化分化淋巴母細(xì)胞淋巴母細(xì)胞刺激物刺激物細(xì)胞變大細(xì)胞