1、？再分化再分化？植物細(xì)胞雜交植物細(xì)胞雜交技術(shù)利用什么技術(shù)利用什么原理？原理？用什么方法可用什么方法可以誘導(dǎo)植物細(xì)以誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合？胞融合？一、原理：一、原理：細(xì)胞膜具有流動(dòng)性細(xì)胞膜具有流動(dòng)性細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性二、誘導(dǎo)方法：二、誘導(dǎo)方法：電刺激、聚乙二醇電刺激、聚乙二醇植物細(xì)胞雜交植物細(xì)胞雜交技術(shù)有什么用技術(shù)有什么用途？途？三、用途：三、用途：獲得雜種植株獲得雜種植株脫分化一、動(dòng)物細(xì)胞融合一、動(dòng)物細(xì)胞融合有些細(xì)胞的融合是正常的生命活動(dòng)。如有些細(xì)胞的融合是正常的生命活動(dòng)。如精子與卵細(xì)胞的結(jié)合。精子與卵細(xì)胞的結(jié)合。 兩個(gè)細(xì)胞正在融合兩個(gè)細(xì)胞正在融合 受精作用受精作用( (一一) )動(dòng)物細(xì)胞融

2、合的概念動(dòng)物細(xì)胞融合的概念 動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交, ,是指兩個(gè)或多是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。（二）動(dòng)物細(xì)胞融合的過程（二）動(dòng)物細(xì)胞融合的過程與植物原生質(zhì)體融合原理相同，方法類似。與植物原生質(zhì)體融合原理相同，方法類似。雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞: :融合后形成的具有原來兩個(gè)或融合后形成的具有原來兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。. .原理：原理：1、動(dòng)物細(xì)胞融合的基本原理、動(dòng)物細(xì)胞融合的基本原理是什么？是什么？2、動(dòng)物細(xì)胞融合的誘導(dǎo)、動(dòng)物細(xì)胞融合的誘導(dǎo)方式是什么？與植物細(xì)胞方式是什么？與植物細(xì)胞融

3、合的誘導(dǎo)方式有什么不融合的誘導(dǎo)方式有什么不同？同？ 與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細(xì)胞膜的流動(dòng)性。即細(xì)胞膜的流動(dòng)性。. .誘導(dǎo)方式：誘導(dǎo)方式：物理法：物理法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒例如：仙臺(tái)病毒例如：仙臺(tái)病毒仙臺(tái)病毒仙臺(tái)病毒紫外線紫外線喪失感染性喪失感染性 （不感染細(xì)胞）（不感染細(xì)胞）保留融合活性保留融合活性 （誘導(dǎo)細(xì)胞融合）（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）細(xì)胞細(xì)胞A A細(xì)胞細(xì)胞B雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞

4、膜連接細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞細(xì)胞融合，形成雜交細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）( (三三) )動(dòng)物細(xì)胞融合的應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞融合的應(yīng)用1.1.突破有性雜交方法的局限突破有性雜交方法的局限, ,使遠(yuǎn)緣雜交成為使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。可能。2.2.成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。新品種培育等的重要手段。鼠鼠雞、鼠雞、鼠兔、鼠兔、鼠猴、人猴、人鼠、人鼠、人兔、兔、人人雞、人雞、人蛙、蛙、酵母菌酵母菌雞雞 、人、人胡蘿卜胡蘿卜等等3、重要用途：、重要用途：二、單克隆抗體二、單克隆抗體 什么是抗體？什么是抗體？

5、 抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。免疫功能的球蛋白。 三、單克隆抗體三、單克隆抗體1、抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？、抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？漿細(xì)胞（效應(yīng)漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）細(xì)胞）2、抗體是如何產(chǎn)生的？、抗體是如何產(chǎn)生的？B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞抗原抗原增殖分化成漿細(xì)增殖分化成漿細(xì)胞胞3、一種、一種B淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生淋巴細(xì)胞能產(chǎn)生幾種抗體？幾種抗體？一種一種（一）獲得抗體的傳統(tǒng)方法（一）獲得抗體的傳統(tǒng)方法1 1、把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后、把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中分

6、離出所需的抗體。從動(dòng)物血清中分離出所需的抗體。2 2、缺點(diǎn)：、缺點(diǎn)： 產(chǎn)量低，純度低，產(chǎn)量低，純度低，特異性差特異性差。人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的體內(nèi)的B B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬種以上的特異性抗體，但是每一個(gè)的特異性抗體，但是每一個(gè)B B細(xì)胞只分泌一細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。要想獲得大量的單一抗體，種特異性抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的必須克隆單一的B B淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群。 1 1、請(qǐng)從以上文字資料中找出、請(qǐng)從以上文字資料中找出單克隆抗體單克隆抗體的概念的概念用用單個(gè)

7、單個(gè)B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞進(jìn)行（無性繁殖）克隆，得到的進(jìn)行（無性繁殖）克隆，得到的基因型相同基因型相同的的細(xì)胞群能夠分泌一種細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)特異性強(qiáng)的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。1、在體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)、在體外培養(yǎng)的條件下，一個(gè)B淋巴細(xì)胞有沒淋巴細(xì)胞有沒有可能無限增殖？有可能無限增殖？不可能不可能2、我們學(xué)過的什么細(xì)胞具有這樣的能力？、我們學(xué)過的什么細(xì)胞具有這樣的能力？癌細(xì)胞癌細(xì)胞3、有什么辦法讓、有什么辦法讓B淋巴細(xì)胞也具有這樣的能力？淋巴細(xì)胞也具有這樣的能力？細(xì)胞融合細(xì)胞融合一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性

8、抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)、實(shí)驗(yàn)原理：、實(shí)驗(yàn)原理：動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆單克隆抗體抗體既能產(chǎn)生特異性抗既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖體，又能大量繁殖如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用利用B B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能。淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能。利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性。利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性。利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有合獲得具有B B淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞。特性的雜交瘤細(xì)胞。利用

9、利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。交瘤細(xì)胞。應(yīng)用：應(yīng)用：動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖能無限增殖化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備單克隆抗體的特點(diǎn)：單克隆抗體的特點(diǎn)：單克隆抗體的制備過程單克隆抗體的制備過程3.3.過程：過程：免疫動(dòng)物免疫動(dòng)物注射抗原的目的是什么？獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）誘導(dǎo)細(xì)胞融合常用方法是什么？滅活的仙滅活的仙臺(tái)病毒臺(tái)病毒如何進(jìn)行篩選？具有篩選作用的

10、培養(yǎng)基（HAT培養(yǎng)基）？種？種BB 、B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 、雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞如何獲得大量的單克隆抗體？免疫免疫B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的制備細(xì)胞融合細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞的篩選雜交瘤細(xì)胞的篩選分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立分泌單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞系的建立單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制備 ？ ？ 抗原抗原 效應(yīng)效應(yīng)B細(xì)胞細(xì)胞篩選篩選 篩選篩選 （AAAA型、型、BBBB型）型）AB型雜交瘤細(xì)胞型雜交瘤細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞能產(chǎn)生所需抗體的細(xì)胞過程：過程：抗原抗原小鼠小鼠效應(yīng)效應(yīng)B B細(xì)胞細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)

11、胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選多孔培養(yǎng)板單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，篩選多孔培養(yǎng)板單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)，篩選能產(chǎn)生特定抗體的能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng) 體內(nèi)培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)提取出單克隆抗體提取出單克隆抗體1.1.在制備單克隆抗體的過程中，選用在制備單克隆抗體的過程中，選用哪兩種細(xì)胞進(jìn)行融合？為什么選擇這哪兩種細(xì)胞進(jìn)行融合？為什么選擇這兩種細(xì)胞？兩種細(xì)胞？漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞漿細(xì)胞能產(chǎn)生漿細(xì)胞能產(chǎn)生單一抗體單一抗體，但不能無限，但不能無限增殖；骨髓瘤細(xì)胞增殖；骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖能無限增殖，但不，但不能產(chǎn)生單一抗體。能產(chǎn)生單一抗體。2 2、在這過程中進(jìn)行了幾次篩選？分、在這過程中進(jìn)行了幾次篩

12、選？分別在哪個(gè)步驟進(jìn)行篩選？別在哪個(gè)步驟進(jìn)行篩選？兩次篩選。第一次在兩次篩選。第一次在B細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合以后篩選出雜交瘤細(xì)胞；細(xì)胞融合以后篩選出雜交瘤細(xì)胞；第二次在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生第二次在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。四、單克隆抗體的應(yīng)用四、單克隆抗體的應(yīng)用 請(qǐng)同學(xué)們根據(jù)自己所收集請(qǐng)同學(xué)們根據(jù)自己所收集的資料，談?wù)剢慰寺】贵w的應(yīng)的資料，談?wù)剢慰寺】贵w的應(yīng)用。用。可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，快速的優(yōu)點(diǎn)可用于作為診斷試劑：有準(zhǔn)確，高效，快速的優(yōu)點(diǎn)可用于疾病治療可用于疾病治療可用于運(yùn)載藥物（作為可用于運(yùn)載藥物（作為運(yùn)載運(yùn)載對(duì)應(yīng)疾病的

13、藥物的對(duì)應(yīng)疾病的藥物的 “生生物導(dǎo)彈物導(dǎo)彈“。）。）“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物 細(xì)胞細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合細(xì)胞融合 漿漿篩選篩選 瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞 雜交雜交細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)選出能產(chǎn)生選出能產(chǎn)生特定抗體的特定抗體的細(xì)胞群繼續(xù)細(xì)胞群繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)體外培養(yǎng)體外培養(yǎng) 體內(nèi)培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)從培養(yǎng)液或小從培養(yǎng)液或小鼠腹水中取出鼠腹水中取出 單克隆抗體單克隆抗體植物體細(xì)胞雜交、植物體細(xì)胞雜交、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較動(dòng)物細(xì)胞融合的比較四四.細(xì)胞工程比較細(xì)胞工程比較主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株用途用途物理、化學(xué)法物理、化學(xué)法（同左）（同左）滅活的病毒滅活

14、的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電刺激）蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜流動(dòng)性細(xì)胞膜流動(dòng)性細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性原理原理動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目克服遠(yuǎn)緣雜交不克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性的障礙親和性的障礙1 1、動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較，、動(dòng)物細(xì)胞融合和植物原生質(zhì)體融合比較，在動(dòng)物細(xì)胞融合中有特殊性的是（在動(dòng)物細(xì)胞融合中有特殊

15、性的是（ ）A A、融合的原理、融合的原理 B B、融合的優(yōu)點(diǎn)、融合的優(yōu)點(diǎn)C C、融合的誘導(dǎo)手段、融合的誘導(dǎo)手段 D D、融合的過程、融合的過程2 2、動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是（、動(dòng)物細(xì)胞融合的目的中最重要的是（ ）A A、克服遠(yuǎn)緣雜交不親和、克服遠(yuǎn)緣雜交不親和 B B、制備單克隆抗體、制備單克隆抗體C C、培育新物種、培育新物種 D D、生產(chǎn)雜種細(xì)胞、生產(chǎn)雜種細(xì)胞3 3、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（ ） A

16、 A、經(jīng)過免疫的、經(jīng)過免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 B B、不經(jīng)過免疫的、不經(jīng)過免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 C C、經(jīng)過免疫的、經(jīng)過免疫的T T淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D D、不經(jīng)過免疫的、不經(jīng)過免疫的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞4. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞自身融淋巴細(xì)胞自身融 合細(xì)胞合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓

17、瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 A B C D 5 5、研究單克隆抗體治療癌癥的思路是（、研究單克隆抗體治療癌癥的思路是（ ）A A利用單克隆抗體特異性地對(duì)抗癌細(xì)胞利用單克隆抗體特異性地對(duì)抗癌細(xì)胞 B B以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細(xì)胞以單克隆抗體作抗癌藥物殺死癌細(xì)胞C C抗癌物質(zhì)在克隆細(xì)胞中大量合成抗癌物質(zhì)在克隆細(xì)胞中大量合成D D單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細(xì)胞單克隆抗體攜帶抗癌藥物特異性地與癌細(xì)胞結(jié)合結(jié)合6 6只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法（只能使動(dòng)物細(xì)胞融合的常用誘導(dǎo)方法（ ） A APEGPEG B B滅活的病毒滅活的病毒 C C電刺激電刺激 D D離心離心7 7、

18、“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”是指是指 （ ） A.A.單克隆抗體單克隆抗體 B.B.雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 C.C.產(chǎn)生特定抗體的產(chǎn)生特定抗體的B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞 D.D.在單抗上連接抗癌藥物在單抗上連接抗癌藥物8 8、下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述中，、下列關(guān)于單克隆抗體的制備和應(yīng)用的敘述中，不正確的是（不正確的是（ ）A AB B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，一般不淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合，一般不 需要滅活的仙臺(tái)病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)需要滅活的仙臺(tái)病毒或聚乙二醇誘導(dǎo)B B融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，又融合后形成的雜交瘤細(xì)胞既能無限增殖，又 能產(chǎn)生單克隆抗體能產(chǎn)生單克隆抗體C C體外培養(yǎng)

19、時(shí)，一個(gè)效應(yīng)體外培養(yǎng)時(shí)，一個(gè)效應(yīng)B B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生 抗體，但不能無限增殖抗體，但不能無限增殖D D單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)，靈單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，特異性強(qiáng)，靈 敏度高，優(yōu)越性明顯敏度高，優(yōu)越性明顯A9. 9. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓

20、瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 A A B B C C D D C在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下，培養(yǎng)得到的細(xì)胞群是單個(gè)細(xì)胞的情況下，培養(yǎng)得到的細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的隆抗體。這里的單克隆單克隆確有確有單個(gè)細(xì)胞克隆單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過的含義，只不過克隆的克隆的不是不是B B淋巴細(xì)胞，而淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞是雜交瘤細(xì)胞。 雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)

21、生雜交瘤細(xì)胞既能迅速大量繁殖，又能產(chǎn)生專一抗體。專一抗體。思考與探究1.1.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)有植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)有什么不同？什么不同？植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)基本相植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)基本相同，同，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，不同的是植物體細(xì)胞融合前需去掉細(xì)胞壁，然后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融然后再融合；動(dòng)物細(xì)胞融合是兩個(gè)體細(xì)胞直接融合。合。 誘導(dǎo)融合方法不同：動(dòng)物細(xì)胞誘導(dǎo)融合所用的方誘導(dǎo)融合方法不同：動(dòng)物細(xì)胞誘導(dǎo)融合所用的方法比植物體細(xì)胞雜交多一類滅活的病毒誘導(dǎo)；結(jié)法比植物體細(xì)胞雜交多一類滅活的病毒誘導(dǎo)；

22、結(jié)果不同：植物體細(xì)胞雜交培養(yǎng)成了雜種植株，而果不同：植物體細(xì)胞雜交培養(yǎng)成了雜種植株，而動(dòng)物細(xì)胞融合只培養(yǎng)出了雜交細(xì)胞。動(dòng)物細(xì)胞融合只培養(yǎng)出了雜交細(xì)胞。 2.2.制備單克隆抗體時(shí)，為什么要選用制備單克隆抗體時(shí)，為什么要選用B B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞？哺乳動(dòng)物感染抗原后，其體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的哺乳動(dòng)物感染抗原后，其體內(nèi)會(huì)形成相應(yīng)的B B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞，胞，B B淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗淋巴細(xì)胞能分泌相應(yīng)的抗體凝聚或殺死這些抗原。動(dòng)物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種原。動(dòng)物在免疫反應(yīng)的過程中，每一種B B淋巴細(xì)胞能淋巴細(xì)胞能分泌一種特異

23、性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，分泌一種特異性抗體，要想獲得大量的特異性抗體，必須使能分泌該單一抗體的必須使能分泌該單一抗體的B B淋巴細(xì)胞大量增殖。淋巴細(xì)胞大量增殖。B B淋淋巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；巴細(xì)胞具有產(chǎn)生單一抗體的能力，但不能在體外增殖；骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無骨髓瘤細(xì)胞是一種癌細(xì)胞，它能在體外培養(yǎng)條件下無限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。限增殖，但不能產(chǎn)生抗體。因此，把一種因此，把一種B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合，產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)雜交瘤細(xì)胞，它會(huì)兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性兼有兩個(gè)親本細(xì)胞的特性在

24、體外培養(yǎng)條件下能不在體外培養(yǎng)條件下能不斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。斷增殖，同時(shí)能產(chǎn)生出某種特異性的抗體。 知識(shí)拓展知識(shí)拓展3 3.為什么不只用兩個(gè)而要用多個(gè)細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞為什么不只用兩個(gè)而要用多個(gè)細(xì)胞進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞間的融合？間的融合？就目前常用的細(xì)胞融合方法來看，不管是用物理的、化學(xué)就目前常用的細(xì)胞融合方法來看，不管是用物理的、化學(xué)的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是的方法，還是生物的方法，其融合率都不可能是100%100%。僅。僅用兩個(gè)細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。用兩個(gè)細(xì)胞融合，其效率太低，不一定能得到融合細(xì)胞。更重要的是，即使兩個(gè)細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是

25、研更重要的是，即使兩個(gè)細(xì)胞已發(fā)生融合，但并不一定是研究者期望得到的細(xì)胞類型。目前動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最有價(jià)究者期望得到的細(xì)胞類型。目前動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)最有價(jià)值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體值的應(yīng)用就是單克隆抗體的制備。我們以制備單克隆抗體為例來說明這一問題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體為例來說明這一問題。我們知道，體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體種類可多達(dá)百萬種以上，但是每一個(gè)種類可多達(dá)百萬種以上，但是每一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體，如果僅取一個(gè)脾細(xì)胞（含種特異性抗體，如果僅取一個(gè)脾細(xì)胞（含B B淋巴細(xì)胞）和淋巴細(xì)胞）和一個(gè)瘤細(xì)胞雜交，我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗

26、體是否一個(gè)瘤細(xì)胞雜交，我們不能確定該脾細(xì)胞分泌的抗體是否正是我們所需要的；若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，正是我們所需要的；若用大量的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，就可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。就可以從融合細(xì)胞中篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 知識(shí)拓展知識(shí)拓展4 4.如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？如何進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的抗體檢測及克隆化培養(yǎng)？融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是融合后的細(xì)胞經(jīng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)后，能存活的細(xì)胞就是雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體雜交瘤細(xì)胞。但這些雜交瘤細(xì)胞并非都是能分泌所需抗體的細(xì)胞，通常用的細(xì)胞，通常

27、用“有限稀釋法有限稀釋法”來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀來選擇。將雜交瘤細(xì)胞稀釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個(gè)，通釋，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個(gè)，通過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體過培養(yǎng)讓其增殖。然后檢測各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法），那些上清液可與特定抗原（常用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法），那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。陽性孔中的細(xì)胞還不能保證是來自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般自單個(gè)細(xì)胞，挑選陽性孔的細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)行有限稀釋，一般需進(jìn)行需進(jìn)行3 34 4次，直

28、至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)次，直至確信每個(gè)孔中增殖的細(xì)胞為單克隆細(xì)胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。胞。該過程即為雜交瘤細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)。知識(shí)拓展知識(shí)拓展6 6.單倍體的誘導(dǎo)方法及應(yīng)用價(jià)值單倍體的誘導(dǎo)方法及應(yīng)用價(jià)值 單倍體（單倍體（haploid）是指具有配子染色體數(shù)目的個(gè)體。單）是指具有配子染色體數(shù)目的個(gè)體。單倍體可以自發(fā)產(chǎn)生，也可以誘發(fā)產(chǎn)生。動(dòng)物中（除蜜蜂、倍體可以自發(fā)產(chǎn)生，也可以誘發(fā)產(chǎn)生。動(dòng)物中（除蜜蜂、白蟻等外）的單倍體，由于生理上不正常，在胚胎發(fā)育時(shí)白蟻等外）的單倍體，由于生理上不正常，在胚胎發(fā)育時(shí)期就會(huì)死亡。植物上自發(fā)產(chǎn)生單倍體的植物很多，如番茄、期就會(huì)死亡。植物上自發(fā)產(chǎn)生單倍體的植物很多，如番茄、棉花、咖啡、