1、 修訂號Rev. ：81 目的與范圍 Scope and Purpose用HPLC測定大寶化妝品中尼泊金甲酯、丙酯，苯氧乙醇的含量.This method is applicable to the determination of Phenoxyethanol, Methyl Paraben and Propyl Paraben by HPLC in Dabao products.2 特殊安全防范措施 Unusual Safety Precautions根據(jù)化學試劑的材料安全數(shù)據(jù)表來進行相應(yīng)的安全操作與防護。Use Material Safety Data Sheets (MSDS) rega

2、rding the safe handling of chemicals specified.3 方法原理 Principle of method通過采用梯度洗提，用HPLC和C-18反相色譜柱將尼泊金酯和苯氧乙醇從樣品中和其它組份相互分離開。用外標法進行定量。Phenoxyethanol and Parabens are separated from each other as well as from other components in the sample by gradient elution HPLC using a C-18 reverse phase column. The

3、components are detected using an UV detector 254 nm and quantitated by a method of external standardization.4 基本方程式 Fundamental Equations無 None5 干擾因素Interferences任何和尼泊金甲酯、丙酯，苯氧乙醇具有相同保留時間的化合物都可能產(chǎn)生干擾。Under the conditions prescribed, the method is selective/specific and no interferences areevident6 精確度

4、與準確度 Precision無None7 儀器 Equipment7.1 裝備紫外檢測器的液相色譜 HPLC with UV Detector7.2 色譜柱 Columns： Hypersil ODS 250*4.6mm 5m 30105-254630（other products） Prodigy 5 m ODS3 100A (250 X 4.6 mm) Cat no： OOG-4097-E0（大寶眼袋霜Dabao Eye Bag Cream (F# WJ238-40394)）7.3 0.45m PVDF或者類似型號針頭式過濾器 Filters, 0.45 m PTFE filters or

5、 equivalent7.4 HPLC進樣瓶 Auto sampler vials7.5 50毫升，100毫升容量瓶 50ml， 100ml volumetric flask7.6 2毫升，5毫升移液管 2ml，5ml pipet8 試劑Reagents8.1 去離子水Purified water (Milli Q) or equivalent8.2 乙腈（HPLC級）HPLC Grade Acetonitrile or equivalent8.3 甲醇（HPLC級）Methanol HPLC Grade or equivalent8.4 冰醋酸（AR）Acetic acid AR Grade

6、 or equivalent8.5 尼泊金甲酯 標準物質(zhì)，有已知含量和失效期Methyl paraben, Reference standard with known purity.8.6 尼泊金丙酯 標準物質(zhì)，有已知含量和失效期Propyl paraben, Reference standard with known purity.8.7 苯氧乙醇 標準物質(zhì)，有已知含量和失效期2-phenoxyethanol, Reference standard with known purity.9 標準溶液配制Standard Preparation9.1 準確稱取如下標準物質(zhì)至100ml的容量瓶中，

7、準確至0.1毫克。Into a single 100 ml volumetric flask, weigh each of the following尼泊金甲酯Methyl Paraben 0.05g尼泊金丙酯Propyl Paraben 0.03g苯氧乙醇 Phenoxyethanol 0.13g9.2 用甲醇溶解并稀釋至刻度并混合均勻。(儲備液)Dilute to volume with Methanol (8.3) and mix thoroughly (Stock standard)9.3 移取5.0ml儲備液于50毫升容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度并混合均勻（工作標液）。Pipet 5.

8、0 ml of the diluted standard in to a 50 ml volumetric flask, dilute to volume with Methanol and mix thoroughly (Working standard)9.4 通過0.45m針頭式過濾器過濾工作標準樣品于HPLC樣品瓶中，棄去前1-2ml濾液。Filter approximately 2-3 ml through a 0.45m PVDF filter (7.3) in to an autosampler vial. Discard the first 1-2 ml through the

9、 filter .Finally collect the filtrate in autosampler vial for analysis.9.5 重復10.1-10.3配制另一個標準樣品-核實標準樣品。Prepare a check standard by repeating steps 9.1 through 9.410 樣品配制Sample Preparation 注Note: 含有單一組成的產(chǎn)品，使樣品的濃度與標準溶液的濃度匹配。For the products containing single component match the concentration of sample

10、 with standard. 含有苯氧乙醇、尼泊金甲酯和尼泊金丙酯或者苯氧乙醇和尼泊金甲酯或者尼泊金甲酯和丙酯的組合的產(chǎn)品，使樣品中尼泊金甲酯的的濃度與標準溶液的濃度匹配。For the products containing combinations of Phenoxyethanol, Methyl Paraben, Propyl Paraben or Phenoxyethanol and Methyl Paraben or Methyl Paraben and Propyl Paraben match the concentration of sample with Methyl Pa

11、raben standard. 含有苯氧乙醇和尼泊金丙酯的組合的產(chǎn)品使樣品中苯氧乙醇的的濃度與標準溶液中的濃度匹配。For the products containing combination of Phenoxyethanol and Propyl Paraben match the concentration of sample with Phenoxyethanol standard. 大寶清爽保濕防曬露F# LY243-41232, 稱取0.9g樣品至50ml容量瓶。For Dabao UV Lotion, F# LY243-41232 weigh 0.9 g of sample i

12、n to a 50 ml volumetric flask.10.1 準確稱取0.8g樣品于50ml容量瓶中。Weigh, 0.8 g of sample in to a 50 ml volumetric flask.10.2 加入約10ml甲醇，超聲波振蕩至樣品完全分散，用甲醇稀釋至刻度。Add approximately 10 ml of Methanol to the flask and stopper. Sonicate and shake vigorously until the sample is completely dispersed and no globules of pr

13、oduct remain. Dilute to volume with Methanol and mix thoroughly. 10.3 通過0.45um過濾膜過濾工作標準樣品于HPLC樣品瓶中，棄去前1-2ml濾液。Filter approximately 2-3 ml through a 0.45 m PTFE filter in collect the filtrate in auto sampler vial for analysis. Discard the first 1-2ml filtrate. 10.4 重復11.1-11.3配制一個平行測試樣品。Repeat 11.1-1

14、1.3 to prepare a parallel sample.11 運行參數(shù)Operating Conditions101111.1 大寶SOD蜜（F#WJ238-40365）和大寶眼袋霜(F# WJ238-40394,F# WJ238-40366)Operating conditions for Dabao SOD Milk (F# WJ238-40365) Dabao Eye Bag Cream (F# WJ238-40394) and Dabao Eye Bag Cream (F# WJ238-40366)檢測波長Wave length： 254nm柱溫Oven temperatur

15、e： 25進樣量Injection volume： 20l流動相組成Mobile phase gradient: A=去離子水750ml+250ml乙腈+2ml冰醋酸 B=100%乙腈A = Purified water 750 ml + 250 ml Acetonitrile + 2 ml Acetic acid DegasB = 100% Acetonitrile流速Flow rate: 1.0ml/min運行時間Run time： 25 min時間程序Gradient table:步驟Step時間（分鐘）time (min)流速(ml/min)Flow rate(ml/min)A（%）B

16、（%）10.01.09010215.01.09010318.01.01090420.01.01090522.01.09010625.01.0901011.2 其他產(chǎn)品For Other finished products Typical Instrument settings:檢測波長Wave length： 254nm 柱溫Oven temperature： 40進樣量Injection volume： 20l流動相組成Mobile phase gradient： A=去離子水750ml+250ml乙腈+2ml冰醋酸 B=100%乙腈 A = Purified water 750 ml +

17、250 ml Acetonitrile + 2 ml Acetic acid B = 100% Acetonitrile流速Flow rate: 1.0ml/min運行時間Run time： 25min時間程序Gradient table：步驟step時間（分鐘）time/min流速(ml/min)flow rate(ml/min)A（%）B（%）10.01.0100026.01.0100038.01.05545415.01.01585520.01.01585622.01.01000725.01.0100011.3 大寶眼角皺紋蜜(F# LY086-26283, F# LY086-26311)

18、和大寶眼霜(F# LY086-26284) Operating conditions for Dabao Eye Wrinkle Milk (F# LY086-26283) , Dabao Eye Cream(F# LY086-26284) and Dabao Eye Wrinkle Cream (F# LY086-26311)Typical Instrument settings :波長Wave length： 254 nm流速Flow rate： 1.0 ml / min柱溫Oven temperature： 25C運行時間Run time ： 35 min進樣體積Injection vo

19、lume： 20 l流動相組成Mobile phase gradient :Where A = 100% Acetonitrile B = Purified water 750 ml + 250 ml Acetonitrile + 2 ml Acetic acid Mixed well and degas時間梯度Gradient table步驟step時間（分鐘）time/min流速(ml/min)flow rate(ml/min)A（%）B（%）10.01.00100224.01.02080325.01.09010430.01.09010531.01.00100635.01.0010012

20、步驟Procedure:12.1 讓儀器按照11設(shè)定的參數(shù)運行約60分鐘直到獲得穩(wěn)定的基線。 Allow the instrument to run for approximately 60 minutes under the conditions of11 until a stable baseline is obtained.12.2 首先進一次空白(流動相/溶劑)，以確定系統(tǒng)是否受到污染，并采取措施來解決發(fā)現(xiàn)的問題。Inject a blank (mobile phase/solvent) to evaluate the system for any contamination.Take

21、 necessary actions to resolve any observed issues. 12.3 運行參照標準溶液以確定每個組分的保留時間。苯氧乙醇和尼泊金酯的峰應(yīng)獲得基線分離。Inject the Reference Standard to determine the retention times of each of thecomponents. The benzyl alcohol, phenoxyethanol and parabens peaks should havebaseline resolution.12.4 參考標準溶液再進樣五次并計算峰面積的系統(tǒng)適應(yīng)性和響

22、應(yīng)因子。五次進樣峰面積的相對標準偏差不能超過2.0%。Inject the Reference Standard five additional times and measure the peak area tocalculate system suitability and response factor. The relative standard deviation(RSD) for benzyl alcohol, phenoxyethanol and parabens peaks should not exceed 2.0% for the five injections.12.5

23、復核標準溶液進樣二次并計算響應(yīng)因子。五個參考標準溶液響應(yīng)因子的均值與兩個復核標準溶液的平均響應(yīng)因子之商必須在98%102%以內(nèi)。Inject the Check Standard twice and measure the peak area to calculate the response factor. The response factor generated by the average of the five Reference Standard injections and the two Check standard injections must agree within (

24、98-102 %).12.6 每個樣品進樣一次，并用參考標準樣品和復核標準樣品的響應(yīng)因子的平均值來計算樣品含量。Inject each sample once and use local bracketing of the Reference Standardinjections to calculate samples.12.7 每間隔10個或者少于10個測試樣品進一次參考標準樣品，并且在測試結(jié)束時再進一次參考標準樣品。整個測試過程中參考標準樣品的系統(tǒng)適應(yīng)性的相對標準偏差不能大于3.0%。Inject the Reference Standard every ten or less samp

25、le injections and at the end ofthe run. The global RSD for the complete set of standard injections should notexceed 3.0%.12.8 最后，用甲醇和水沖洗儀器和色譜柱。At the end of the run, flush the instrument and column with water and methanol.13 計算Calculations: 13.1 樣品中尼泊金酯、苯氧乙醇的含量: Parabens and Phenoxyethanol content i

26、n sample: 13.2 平均值 偏差 14 本測試方法由TM-000955 Estimation of Benzyl Alcohol , Parabens, Phenoxyethanol and Phenonip XB by HPLC Method翻譯。This document is translated from TM-000955. 本附件共1頁，第1頁 Page 1 of 1大寶化妝品中尼泊金甲酯、丙酯測試記錄 測試編號_ 測試日期_ 液相色譜儀編號：_天平編號：_色譜柱編號： _ _甲醇編號：_ A相乙腈編號：_ B相乙腈編號：_ 冰醋酸編號：_準確稱取以下標準品(精確至0.1

27、mg) 于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度后混合均勻(儲備液)，取5.0ml溶液A于50ml容量瓶中，用甲醇稀釋到刻度（工作標準溶液），將工作標準溶液通過0.45m過濾膜過濾HPLC進樣瓶中。用同樣的方法配制另一個標準溶液（核實標準溶液）。尼泊金甲酯 批號：_，含量： %，有效期：_ 。Std1： g ；Std2： g尼泊金丙酯 批號：_，含量： %，有效期：_。Std1： g ；Std2： g標準樣品一色譜圖碼:_, 標準樣品二色譜圖頁碼:_, 校正表頁碼為： 。 稱取樣品 (精確至0.1mg ) 于50ml容量瓶中，用甲醇分散后稀釋到刻度混合均勻，通過0.45m過濾膜過濾于HPL

28、C進樣瓶中，按照QN-CSFH-101方法進行測定。 樣品名稱：_，批號：_ _稱樣量1：_g ，色譜圖號_。稱樣量2：_g ，色譜圖號_。 測試結(jié)果1：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _% 測試結(jié)果2：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _%平均值：尼泊金甲酯%= _% %， 尼泊金丙酯%= _% %兩測試結(jié)果偏差為：尼泊金甲酯： %尼泊金丙酯： %樣品名稱：_，批號：_ _稱樣量1：_g ，色譜圖號_。稱樣量2：_g ，色譜圖號_。 測試結(jié)果1：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _% 測試結(jié)果2：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _%平均值：尼泊金甲酯%= _% %， 尼泊

29、金丙酯%= _% %兩測試結(jié)果偏差為：尼泊金甲酯： %尼泊金丙酯： %樣品名稱：_，批號：_ _稱樣量1：_g ，色譜圖號_。稱樣量2：_g ，色譜圖號_。 測試結(jié)果1：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _% 測試結(jié)果2：尼泊金甲酯%= _%，尼泊金丙酯%= _%平均值：尼泊金甲酯%= _% %， 尼泊金丙酯%= _% %兩測試結(jié)果偏差為：尼泊金甲酯： %尼泊金丙酯： %計算公式：=標準樣品的質(zhì)量(克) Wsa=樣品的質(zhì)量（克） Asa=樣品峰面積 As=標準品峰面積 =/AS的平均 檢驗者/日期： 復核者/日期：北 京 大 寶 化 妝 品 有 限 公 司文件名稱Subject：尼泊金甲酯、丙酯，苯氧乙醇測試方法Test method for Methyl Paraben, Propyl Paraben and Phenoxyethanol 共9頁，第7頁 Page 7 of 9 編號Code：QN-CSFH-101 修訂號Rev.：8附件二Appendix 2：大寶化妝品中尼泊金甲酯、丙酯，苯氧乙醇測試記錄 Methyl Paraben, Pro