1、重組腺病毒的構建腺病毒 Adenovirus 最初由人類腺樣增殖體組織培養(yǎng)中分離得到的，此病毒名稱也由此而來。質(zhì)粒是直徑約70毫微米的正二十面體，各頂點具有突起。結構亞基總數(shù)為252個。核酸是雙鏈DNA，分子量2025106。無包膜。在被感染的細胞核中增殖，病毒蛋白在細胞質(zhì)內(nèi)合成，再輸送到細胞核。腺病毒可見于人、雞、牛、狗、鼠、豬和猴中，并各自具有嚴格的寄主特異性，不感染他種動物。對人類可引起感冒癥狀、呼吸系統(tǒng)不適等。腺病毒腺病毒腺病毒腺病毒 是一種大分子線性雙鏈無包膜DNA病毒。它通過 受體介導的內(nèi)吞作用進入細胞內(nèi)，然后腺病毒基因組轉移至細胞核內(nèi)，保持在染色體外，不整合進入宿主細胞基因組中.

2、 ITR E1a/E1b E2 E3 E4 ITR腺病毒的基因及其功能腺病毒的基因及其功能 腺病毒基因組編碼數(shù)十個腺病毒的結構和功能蛋白，分為早期表達和晚期表達。 早期表達的蛋白是功能蛋白，晚期表達的有功能蛋白也有結構蛋白，并且早期的功能蛋白能夠調(diào)控晚期蛋白的表達。 早期表達的E1區(qū)蛋白（甚至包括E2區(qū)蛋白）是腺病毒基因組復制、病毒包裝和其他蛋白表達翻譯所必須的，但其對細胞毒性也是很強的。 E2蛋白涉及AdDNA復制 E3蛋白對抗宿主的抗病毒防御系統(tǒng) E4蛋白調(diào)節(jié)有效的晚期基因轉錄第一代腺病毒載體：一般將E1或E3基因缺失的腺病毒載體成為一代 載體。此類型載體在未純化時可引發(fā)機體產(chǎn)生較 強的炎

3、癥反應和免疫反應，純化后可安全使用， 體內(nèi)表達周期可達4周。（科研、臨床應用最廣科研、臨床應用最廣泛泛 ，一般常用，一般常用Ad5Ad5型腺病毒型腺病毒）第二代腺病毒載體：一般將E2A或E4基因缺失的腺病毒載體成為二代 載體。產(chǎn)生的免疫反應較弱，其安全性和載體容 量有所改進，但病毒包裝難度和出毒滴度下降厲 害，應用局限。第三代腺病毒載體：缺失了全部的（無病毒載體等）或大部分腺病毒 基因，僅保留ITR和包裝信號序列。這一載體系 統(tǒng)需要一個腺病毒突變體作為輔助病毒。腺病毒載體大多以5型（Ad5）、2型（Ad2）為基礎重組系統(tǒng)由2種質(zhì)粒構成：一、包含全部（或右側大部分）腺病毒基因組DNA的大質(zhì)粒，即

4、骨架質(zhì)粒二、小的穿梭質(zhì)粒，其帶有目的基因的表達盒以及表達盒兩側的與大質(zhì)粒上的目的基因擬插入部位同源序列（左右臂）腺病毒粒子相對穩(wěn)定，插入外源基因的病毒基因組在腺病毒粒子相對穩(wěn)定，插入外源基因的病毒基因組在連續(xù)傳代中保持不變，易于用重組連續(xù)傳代中保持不變，易于用重組DNA技術操作。技術操作?？赊D入分裂后的非分裂細胞中發(fā)揮作用，可以感染處可轉入分裂后的非分裂細胞中發(fā)揮作用，可以感染處于分裂狀態(tài)的細胞。于分裂狀態(tài)的細胞?？山?jīng)不同途徑進入不同組織可經(jīng)不同途徑進入不同組織(可以在腸道內(nèi)繁殖，也可可以在腸道內(nèi)繁殖，也可以以 在呼吸道內(nèi)繁殖。在呼吸道內(nèi)繁殖。改建腺病毒基因部分缺失載體的克隆容量可達改建腺病毒基因部分缺失載體的克隆容量可達10kb，腺病毒基因完全缺失載體克隆容量可達腺病毒基因完全缺失載體克隆容量可達37kb。無需整合進宿主細胞基因組中，目的基因在宿主細胞無需整合進宿主細胞基