1、會計學1杏仁蛋白質提取及功能杏仁蛋白質提取及功能(gngnng)特性特性研究概述研究概述第一頁，共27頁。杏仁的概述杏仁的概述蛋白質提取分離蛋白質提取分離結構及功能性研究結構及功能性研究 前景展望前景展望第1頁/共27頁第二頁，共27頁。值和良好的藥用價值，值和良好的藥用價值，中國醫(yī)學科學院衛(wèi)生所中國醫(yī)學科學院衛(wèi)生所編著的食物編著的食物(shw)(shw)成分表顯示成分表顯示 ：每：每100g100g杏仁中含蛋白質杏仁中含蛋白質25g25g27g27g，油脂，油脂 47g 47g56g56g，碳水化合物及粗，碳水化合物及粗纖維含量約占纖維含量約占12g12g19g19g，還含有鈣、磷、鐵、硒還

2、含有鈣、磷、鐵、硒等多種元素和等多種元素和V V、硫胺、硫胺索、核黃索、尼克酸、索、核黃索、尼克酸、抗壞血酸等多種維生素?？箟难岬榷喾N維生素。其中，硒含量為其中，硒含量為27.6mg27.6mglO0glO0g，硒具有，硒具有提高機體免疫力和延長提高機體免疫力和延長壽命的作用。杏仁的藥壽命的作用。杏仁的藥用價值也非常高，保健用價值也非常高，保健功效很高。功效很高。第2頁/共27頁第三頁，共27頁。uu（1）工藝流程）工藝流程u原料預處理原料預處理加水加水加酶加酶調調pH值和溫度值和溫度蛋白質酶解蛋白質酶解滅酶滅酶冷卻冷卻離心離心收集上收集上清液清液沉淀蛋白質沉淀蛋白質水洗水洗干干燥燥蛋白質。

3、蛋白質。u（2）優(yōu)缺點）優(yōu)缺點u提取具有時間短、反應條件提取具有時間短、反應條件溫和溫和(wnh)，提取率高，而且，提取率高，而且酶價格相對便宜，適合于大規(guī)酶價格相對便宜，適合于大規(guī)模的工業(yè)化生產模的工業(yè)化生產第3頁/共27頁第四頁，共27頁。u（1）工藝流程）工藝流程u杏仁粉稀鹽液浸提杏仁粉稀鹽液浸提堿液堿液浸提浸提離心離心鹽析鹽析(yn x)再再離心離心透析透析干燥干燥蛋白質產蛋白質產品品u（2）優(yōu)缺點）優(yōu)缺點u總提取率較高，而且產品色總提取率較高，而且產品色澤好澤好第4頁/共27頁第五頁，共27頁。u杏仁杏仁粉碎粉碎研磨研磨加加入入 25倍蒸餾水倍蒸餾水磁力攪拌器攪磁力攪拌器攪拌拌1h離

4、心離心 ，取上清液，取上清液將上將上清液的清液的pH調至調至4.5離心離心用蒸用蒸餾水洗沉淀餾水洗沉淀用用NaOH調節(jié)調節(jié)pH至至7.0真空冷凍真空冷凍 干燥干燥分離蛋分離蛋白白u（2）優(yōu)缺點）優(yōu)缺點u杏仁分離蛋白是純度很高的杏仁分離蛋白是純度很高的蛋白質，適合用于杏仁蛋白質蛋白質，適合用于杏仁蛋白質的電泳分析和各種功能特性的的電泳分析和各種功能特性的研究分析。研究分析。第5頁/共27頁第六頁，共27頁。u排除法排除法u（1）工藝流程）工藝流程u脫脂脫脂脫脂杏仁粉脫脂杏仁粉粉碎粉碎洗滌洗滌離心分離離心分離干燥干燥杏杏仁濃縮蛋白質。仁濃縮蛋白質。u（2）優(yōu)缺點）優(yōu)缺點u蛋白質提取率高，性質穩(wěn)定，

5、蛋白質提取率高，性質穩(wěn)定，副產品可綜合利用副產品可綜合利用第6頁/共27頁第七頁，共27頁。第7頁/共27頁第八頁，共27頁。第8頁/共27頁第九頁，共27頁。第9頁/共27頁第十頁，共27頁。經過經過(jnggu)(jnggu)水、鹽、乙醇、堿的連續(xù)提取后，得到的可溶水、鹽、乙醇、堿的連續(xù)提取后，得到的可溶性蛋白中，清蛋白為主要成分，占性蛋白中，清蛋白為主要成分，占 77 77 左左 右，其次為谷蛋白右，其次為谷蛋白，球蛋白和醇溶蛋白含量較低；除醇溶蛋白外，其余三種蛋白的，球蛋白和醇溶蛋白含量較低；除醇溶蛋白外，其余三種蛋白的純度均較高。純度均較高。 第10頁/共27頁第十一頁，共27頁。第

6、11頁/共27頁第十二頁，共27頁。大豆分離蛋白的超出量高于甜杏仁蛋白，隨著時間的延長大豆分離蛋白的超出量高于甜杏仁蛋白，隨著時間的延長，兩者的超出量均明顯下降，兩者的超出量均明顯下降 ，15min15min時，兩者泡沫體積時，兩者泡沫體積減少約減少約5050，表明這兩種蛋白泡沫穩(wěn)定性相似，表明這兩種蛋白泡沫穩(wěn)定性相似(xin(xin s)s)，但大豆分離蛋白的起泡性較好。，但大豆分離蛋白的起泡性較好。第12頁/共27頁第十三頁，共27頁。甜杏仁蛋白的表面疏水性指數(shù)為甜杏仁蛋白的表面疏水性指數(shù)為1641648686，大于大豆分離蛋白，大于大豆分離蛋白的表面疏水性指數(shù)的表面疏水性指數(shù)5.575.

7、57，這意味著甜杏仁蛋白有更多的非極性，這意味著甜杏仁蛋白有更多的非極性殘基定向于油水界面，由于殘基定向于油水界面，由于(yuy)(yuy)疏水相互作用在表面形疏水相互作用在表面形成疏水性空穴，因而顯示較好的乳化性。成疏水性空穴，因而顯示較好的乳化性。第13頁/共27頁第十四頁，共27頁。蛋白質變性是食品加工過蛋白質變性是食品加工過程中蛋白質最常見的變化程中蛋白質最常見的變化之一，差示量熱掃描法之一，差示量熱掃描法 (DSC) (DSC) 自自2020世紀世紀 60 60年代以年代以來在國內外已經廣泛被用來在國內外已經廣泛被用于蛋白質的熱變性研究。于蛋白質的熱變性研究。在在 DSC DSC譜圖

8、中，最大峰對譜圖中，最大峰對應的溫度是變性溫度峰面應的溫度是變性溫度峰面積是變性焓。變性溫度代積是變性焓。變性溫度代表蛋白質的熱穩(wěn)定性而焓表蛋白質的熱穩(wěn)定性而焓變則反映蛋白質分子的聚變則反映蛋白質分子的聚集程度集程度(chngd)(chngd)，峰的，峰的寬窄也可說明這種變性轉寬窄也可說明這種變性轉變的協(xié)同性。熱分析常用變的協(xié)同性。熱分析常用的方法還有熱重法的方法還有熱重法(TGA)(TGA)，測定質量隨溫度的變化情測定質量隨溫度的變化情況主要反映蛋白質的熱穩(wěn)況主要反映蛋白質的熱穩(wěn)定性。定性。 第14頁/共27頁第十五頁，共27頁。采用采用A1calaseA1calase蛋白酶水解杏仁蛋白，以

9、水解度蛋白酶水解杏仁蛋白，以水解度(DH)(DH)及水解產物及水解產物(chnw)(chnw)對血管緊張素轉化酶對血管緊張素轉化酶(ACE)(ACE)的抑制率為指標進行酶解工藝優(yōu)化。結果表明，較大活性的的抑制率為指標進行酶解工藝優(yōu)化。結果表明，較大活性的ACEACE抑制肽的最佳水解條件為抑制肽的最佳水解條件為：pHpH值值7 70 0，溫度，溫度5050，酶底比，酶底比4 4，底物質量分數(shù)為，底物質量分數(shù)為2 2。該條件下經。該條件下經60 min60 min水解，其水解度水解，其水解度為為12122323，得到，得到ACEACE抑制肽的抑制肽的IC50IC50值為值為0 085mg85mgm

10、LmL。第15頁/共27頁第十六頁，共27頁。第16頁/共27頁第十七頁，共27頁。杏仁蛋白質中氨基酸含量豐富而且杏仁蛋白質中氨基酸含量豐富而且種類齊全，構成比例接近于國際參種類齊全，構成比例接近于國際參考模式，是很好的植物蛋白質資源考模式，是很好的植物蛋白質資源。已有資料報道杏仁蛋白質具有優(yōu)。已有資料報道杏仁蛋白質具有優(yōu)良的功能特性良的功能特性(txng)(txng)，是良好，是良好的食品添加劑。因此，隨著對杏仁的食品添加劑。因此，隨著對杏仁的進一步開發(fā)，研究杏仁蛋白質的的進一步開發(fā)，研究杏仁蛋白質的提取利用具有積極的經濟和現(xiàn)實意提取利用具有積極的經濟和現(xiàn)實意義。義。 第17頁/共27頁第十

11、八頁，共27頁。植物蛋白質的提取和含量植物蛋白質的提取和含量(hnling)(hnling)測定測定第18頁/共27頁第十九頁，共27頁。一、實驗目的一、實驗目的 掌握大豆蛋白的提取掌握大豆蛋白的提取(tq)及制備大及制備大豆蛋白丙酮干粉的方法。豆蛋白丙酮干粉的方法。第19頁/共27頁第二十頁，共27頁。二、實驗原理二、實驗原理大豆蛋白大豆蛋白(dnbi)主要是酸性蛋白主要是酸性蛋白(dnbi)，pI 4.5-5.0，能溶于堿溶液，能溶于堿溶液 本實驗先利用稀堿提取大豆蛋白本實驗先利用稀堿提取大豆蛋白(dnbi)，再利用丙酮結合等電點溶解度，再利用丙酮結合等電點溶解度最低原理沉淀蛋白最低原理沉

12、淀蛋白(dnbi)。2. Folin-酚法測定蛋白酚法測定蛋白(dnbi)質含量質含量 酚試劑由兩部分組成，試劑酚試劑由兩部分組成，試劑A為雙縮脲為雙縮脲試劑，可與肽鏈發(fā)生顯色反應，試劑試劑，可與肽鏈發(fā)生顯色反應，試劑B中中的磷鉬酸和磷鎢酸在的磷鉬酸和磷鎢酸在OH-條件下不穩(wěn)定條件下不穩(wěn)定，易被酚類化合物還原顯藍色，因蛋白，易被酚類化合物還原顯藍色，因蛋白(dnbi)質中含質中含Tyr被還原成藍色，顏色被還原成藍色，顏色深淺與濃度成正比，可用比色法測定。深淺與濃度成正比，可用比色法測定。第20頁/共27頁第二十一頁，共27頁。三、實驗器材三、實驗器材分光分光(fn un)光度計（光度計（500

13、nm），比），比色皿色皿計算紙（計算紙（9 cm9 cm）離心機離心機 （離心管（離心管100ml 、50ml）組織搗碎機組織搗碎機精密精密pH試紙試紙pH 0.5-5.0; pH 4.5-7.0第21頁/共27頁第二十二頁，共27頁。四、實驗四、實驗(shyn)試劑試劑1.大豆干粉大豆干粉 2. 0.2%NaOH 3. 丙酮丙酮 （預冷）（預冷）4. 6M HCl，1M HCl5 標準標準 BSA（0.5 mg/ml）6. Folin酚試劑甲（用前組分一酚試劑甲（用前組分一: 組組分二分二 = 50:1）（1） 1克克 Na2CO3和和0.2克克 NaOH溶解于溶解于50毫升蒸餾水中。毫升蒸

14、餾水中。（2） 0.5克硫酸銅（克硫酸銅（CuSO45H2O）溶解）溶解100毫升毫升 1%酒石酸鉀鈉酒石酸鉀鈉 （KNaC4H4O64H2O）中。）中。 每次使用前，將每次使用前，將50ml（1）與）與1ml（2）混合，即為試劑甲。）混合，即為試劑甲。第22頁/共27頁第二十三頁，共27頁。四、實驗試劑四、實驗試劑7. Folin酚試劑乙酚試劑乙 （用前稀釋一倍）（用前稀釋一倍）在在2升磨口回流瓶中，加入升磨口回流瓶中，加入100克鎢酸鈉（克鎢酸鈉（Na2WO42H2O）,25克鉬酸鈉（克鉬酸鈉（Na2MoO42H2O）及）及700毫升蒸餾水，再毫升蒸餾水，再加加50毫升毫升85%磷酸，磷酸

15、，100毫升濃鹽酸，充分毫升濃鹽酸，充分混合，接上回流管，以小火回流混合，接上回流管，以小火回流10小時，回小時，回流結束時，加入流結束時，加入150克克 硫硫 酸酸 鋰（鋰（Li2SO4），），50毫升蒸餾水及數(shù)滴液體溴，開口繼續(xù)毫升蒸餾水及數(shù)滴液體溴，開口繼續(xù)沸騰沸騰15分鐘，以便驅除過量的溴。冷卻后溶分鐘，以便驅除過量的溴。冷卻后溶液呈黃色液呈黃色(hungs)（如仍呈綠色，須再重（如仍呈綠色，須再重復滴加液體溴的步驟）。稀釋至復滴加液體溴的步驟）。稀釋至1升，過濾升，過濾，濾液置于棕色試劑瓶中保存。使用時用標，濾液置于棕色試劑瓶中保存。使用時用標準準NaOH滴定，酚酞作指示劑，然后適當

16、稀滴定，酚酞作指示劑，然后適當稀釋，約加水釋，約加水1倍，使最終的酸濃度為倍，使最終的酸濃度為1N左右左右。第23頁/共27頁第二十四頁，共27頁。五、實驗步驟五、實驗步驟（一）蛋白提?。ㄒ唬┑鞍滋崛?.稱取稱取3克大豆干粉，加入克大豆干粉，加入0.2%NaOH 30毫升。（先加入調成糊狀，再用少量多毫升。（先加入調成糊狀，再用少量多次地慢慢地加入（邊加邊攪拌），室溫下次地慢慢地加入（邊加邊攪拌），室溫下攪拌抽提攪拌抽提10min，于，于4000r/min離心離心7min ,小心留取上清液，棄脂層和沉淀，如上清小心留取上清液，棄脂層和沉淀，如上清液有漂浮物，再經過濾；液有漂浮物，再經過濾；2.

17、 留出上清液留出上清液2毫升稀釋毫升稀釋50倍做含量倍做含量(hnling)測定（第二步）測定（第二步）3.制干粉：制干粉： 量剩余上清液的體積，加入等體積預量剩余上清液的體積，加入等體積預冷丙酮，先用冷丙酮，先用6mol/L的的HCl調調pH至至6.0，再，再用用1mol/L的的HCl小心調小心調pH至至4.5-5.0，于，于4000r/min離心離心15min，(留取沉淀物留取沉淀物)，并，并用少量丙酮反復用少量丙酮反復(至少兩次至少兩次)攪拌洗滌（在離攪拌洗滌（在離心管中進行），加入丙酮后一定將沉淀攪心管中進行），加入丙酮后一定將沉淀攪拌充分，使沉淀脫水。得到白色粉末狀的拌充分，使沉淀脫水。得到白色粉末狀的大豆蛋白粉，用干凈的濾紙吸干、平鋪在大豆蛋白粉，用干凈的濾紙吸干、平鋪在表面皿上，放入表面皿上，放入40度烘箱干燥，待整個實度烘箱干燥，待整個實驗結束后，再稱重并計算產率（即驗結束后，再稱重并計算產率（即3克大豆克大豆干粉中蛋白含量干粉中蛋白含量(hnling)）。）