1、第一節(jié) 海水魚(yú)類(lèi)及其他動(dòng)物的免疫概念一、水產(chǎn)動(dòng)物免疫及其主要功能1 . 水產(chǎn)動(dòng)物免疫1免疫ImmunisImmune, Immunity：指生物機(jī)體識(shí)別本身和異己物質(zhì)，對(duì)本身物質(zhì)構(gòu)成天然免疫耐受，對(duì)異己物質(zhì)產(chǎn)生去除作用的一種生理反響. 簡(jiǎn)單說(shuō)，免疫是機(jī)體對(duì)病原產(chǎn)生抵抗力，使其免受感染的過(guò)程。正常：免疫對(duì)機(jī)體有利，可產(chǎn)生抗感染、抗腫瘤等維持機(jī)體生理平衡和穩(wěn)定的免疫維護(hù)反響；異常：免疫可對(duì)機(jī)體呵斥損傷，如超敏反響、本身免疫疾病和腫瘤等。 2水產(chǎn)動(dòng)物免疫學(xué)Immunology：指研討水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物免疫系統(tǒng)的組織構(gòu)造與生理功能的一門(mén)新興學(xué)科。Chapter 3. 免疫學(xué)原理在疾病診斷和防治中的運(yùn)用.2.

2、 抗原與抗體的概念1) 抗原： 凡是可以刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反響的物質(zhì)，稱(chēng)為抗原。2) 抗體：機(jī)體免疫活性細(xì)胞受抗原刺激后，在體液中出現(xiàn)的由漿細(xì)胞產(chǎn)生的一類(lèi)能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白。簡(jiǎn)單說(shuō)，抗體是一種免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)Chapter 2. 免疫學(xué)原理在疾病診斷和防治中的運(yùn)用.3. 免疫反響的功能1) 免疫防御：為機(jī)體去除異己物質(zhì)的一種免疫維護(hù)功能。 正常：抗感染消滅病原生物、中和毒素 異常： 過(guò)高變態(tài)反響(超敏反響)；過(guò)低免疫缺陷癥變態(tài)反響：某些抗原或半抗原再次進(jìn)入致敏機(jī)體，在體內(nèi)引起特異性體液或細(xì)胞免疫反響，由此

3、導(dǎo)致組織損傷或生理功能紊亂。免疫缺陷癥：指機(jī)體免疫系統(tǒng)由于先天性發(fā)育不良或后天蒙受損傷所致的免疫功能降低或缺乏的系統(tǒng)綜合癥。Chapter 2. 免疫學(xué)原理在疾病診斷和防治中的運(yùn)用.2) 免疫穩(wěn)定：機(jī)體免疫系統(tǒng)維持內(nèi)環(huán)境相對(duì)穩(wěn)定的一種生理功能。 正常：消除體內(nèi)衰老的和被破壞的細(xì)胞 異常：過(guò)高本身免疫病本身免疫病：本身抗體或本身致敏淋巴細(xì)胞攻擊本身靶抗原細(xì)胞和組織，使其產(chǎn)生的病理性改動(dòng)或功能妨礙。3) 免疫監(jiān)視：機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別、去除體內(nèi)突變、畸形的細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的一種生理維護(hù)作用。 正常： 識(shí)別和消除突變細(xì)胞 異常： 過(guò)低易生惡性腫瘤、病毒繼續(xù)感染。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念. 二、免

4、疫 系 統(tǒng) 的 組 成 中樞免疫器官：骨髓、胸腺、法氏囊禽類(lèi) 免疫器官 外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾、黏膜相關(guān)的淋巴組織 造血干細(xì)胞 淋巴細(xì)胞：T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、第三淋巴細(xì)胞群 自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK細(xì)胞)免疫 免疫細(xì)胞 抗原提呈細(xì)胞：?jiǎn)魏送淌杉?xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、并指細(xì)胞、系統(tǒng) 朗罕細(xì)胞、B細(xì)胞 其他免疫細(xì)胞：中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒 細(xì)胞、肥大細(xì)胞、紅細(xì)胞 抗體 免疫分子 補(bǔ)體 細(xì)胞因子：淋巴因子和單核因子.一 免疫器官1、中樞免疫器官1 骨髓(Bone marrow)樣組織：魚(yú)類(lèi)無(wú)淋巴造血的骨髓，但在軟骨魚(yú)的眶區(qū)和顱下區(qū)存在淋巴組織或骨髓樣組織，可

5、構(gòu)成血細(xì)胞，具有與高等脊椎動(dòng)物骨髓類(lèi)似的構(gòu)造與功能。 真骨魚(yú)的腎臟也屬骨髓樣組織，是重要的淋巴器官，具造血功能。它分為頭腎前腎和中腎后腎、體腎二部分。其中頭腎失去排泄功能而成為免疫器官和造血組織，為魚(yú)類(lèi)中第二個(gè)發(fā)育的免疫器官，免疫細(xì)胞的發(fā)源地(產(chǎn)生B細(xì)胞和紅細(xì)胞等，相當(dāng)于哺乳類(lèi)骨髓)；此外，受抗原刺激后，頭腎增生并存在抗體產(chǎn)生細(xì)胞，闡明其為魚(yú)類(lèi)重要的抗體產(chǎn)生器官(相當(dāng)于哺乳類(lèi)的淋巴結(jié))。2 胸腺(Thymus)：真骨魚(yú)類(lèi)的胸腺位于？，它無(wú)皮質(zhì)與髓質(zhì)的分界限，胸腺由結(jié)締組織被膜環(huán)繞，本質(zhì)由上皮細(xì)胞網(wǎng)組成，在上皮細(xì)胞網(wǎng)中分布由淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和成熟的漿細(xì)胞等。魚(yú)類(lèi)的胸腺是T細(xì)胞分化成

6、熟為具免疫活性的T細(xì)胞的場(chǎng)所，T細(xì)胞移至外周免疫器官后，可接受抗原刺激增殖分化產(chǎn)生免疫效能。 魚(yú)類(lèi)胸腺的構(gòu)造與功能隨著季節(jié)和年齡的變化而變化。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念.2、外周免疫器官外周淋巴器官為捕捉抗原、加工處置抗原和呈遞抗原的構(gòu)造根底。1脾(Spleen)：為人體最大的淋巴器官，具有造血、貯血和過(guò)濾作用，也是成熟T、B細(xì)胞移居和接受抗原刺激后產(chǎn)生免疫應(yīng)對(duì)的主要場(chǎng)所。 A. 人類(lèi)1) 脾的構(gòu)造和細(xì)胞組成： a. 脾外表由結(jié)締組織包裹，被膜向本質(zhì)內(nèi)延伸成假設(shè)干小梁，脾本質(zhì)由紅髓和白髓組成，兩者交界處為邊緣區(qū)又稱(chēng)為移行區(qū)。 b. 白髓：由小動(dòng)脈周?chē)馨颓屎颓蕛?nèi)淋巴泡兩部分組成。小動(dòng)脈淋巴鞘

7、主要含T細(xì)胞，當(dāng)抗原引起細(xì)胞免疫應(yīng)對(duì)時(shí)，此區(qū)明顯增大。淋巴濾泡主要由B細(xì)胞構(gòu)成，接受抗原刺激后可出現(xiàn)生發(fā)中心，內(nèi)含增殖分化的B細(xì)胞。 c. 紅髓：分布在白髓周?chē)善⑺骱推⒏]組成。脾索主要是B細(xì)胞集居區(qū)，也有巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞。脾竇又稱(chēng)血竇，有大量的巨噬細(xì)胞和血細(xì)胞。 d. 邊緣區(qū)：紅髓和白髓交界處為邊緣區(qū)，內(nèi)含T細(xì)胞、B細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念. 2) 脾的功能： a. 在胚胎期為造血干細(xì)胞增殖分化的場(chǎng)所，具有造血功能； b. 是血液的濾過(guò)器，可以去除血中的病原微生物和本身衰老損傷的血細(xì)胞。 c. 為T(mén)、B細(xì)胞移居和接受抗原刺激后發(fā)生免疫應(yīng)對(duì)、產(chǎn)生免疫效應(yīng)等重要場(chǎng)所。脾

8、中的淋巴細(xì)胞60%為B淋巴細(xì)胞。B. 魚(yú)類(lèi)脾的構(gòu)造與功能 a. 有頜類(lèi)才有真正的脾，軟骨魚(yú)類(lèi)脾較大，分化為紅髓和白髓，為造血器官；硬骨魚(yú)類(lèi)無(wú)明顯紅髓和白髓分化，但同時(shí)有造血和免疫功能。 b. 與頭腎相比，脾在體液免疫反響中處于相對(duì)次要的位置，其受抗原刺激后的增殖反響以彌散的方式發(fā)生在整個(gè)器官上。 c. 硬骨魚(yú)類(lèi)受免疫接種后，其脾、腎和肝等器官的黑色素巨噬細(xì)胞增多，并與淋巴細(xì)胞和抗體生成細(xì)胞聚集在一同構(gòu)成黑色素巨噬細(xì)胞中心，它的作用有：參與體液免疫和炎癥反響；對(duì)異物進(jìn)展儲(chǔ)存、破壞和脫毒；記憶細(xì)胞原發(fā)中心；維護(hù)組織免受自在基損傷。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念.2粘膜淋巴組織(Mucosa Asso

9、ciated Lymphatic Tissue, MALT)： a. 魚(yú)類(lèi)皮膚、鰓和消化道等器官的上皮組織中存在的淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和各類(lèi)粒細(xì)胞等都屬于MALT。當(dāng)機(jī)體遭到抗原刺激后，巨噬細(xì)胞可對(duì)抗原進(jìn)展處置和呈遞，抗體分泌細(xì)胞(Antibody secreting cell, ASC)會(huì)分泌抗體，與粘液中的溶菌酶和補(bǔ)體等非特異性的維護(hù)組織一道組成抵御病原感染的防線。 b. 魚(yú)類(lèi)MALT相對(duì)于其系統(tǒng)免疫系統(tǒng)有一定自主性，在其免疫接種方法選擇和改良中有實(shí)踐意義：口服免疫后，頭腎、血液和腸都出現(xiàn)ASC，但鰓中和皮膚粘液中無(wú)；肛門(mén)插管接種抗原后可誘導(dǎo)腸、皮膚粘液和膽汁中產(chǎn)生特異性抗體，但血清中無(wú)；腹

10、腔免疫4周后，頭腎、血液和鰓中抗體分泌同時(shí)到達(dá)峰值，而腸只需到第7周才有顯著反響；顆粒抗原浸泡免疫時(shí)，皮膚攝取才干遠(yuǎn)大于鰓，因此，口腔和腹腔免疫可明顯刺激系統(tǒng)免疫應(yīng)對(duì)，浸泡和肛門(mén)免疫更適宜于誘導(dǎo)粘膜免疫反響。 c. 教材中的腸道淋巴組織也屬于MALT的范疇。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念.二 免疫細(xì)胞免疫細(xì)胞：泛指一切參與免疫應(yīng)對(duì)或與免疫應(yīng)對(duì)有關(guān)的細(xì)胞及其前體細(xì)胞，包括：淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞及其它抗原提呈細(xì)胞、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞和肥大細(xì)胞等。 魚(yú)類(lèi)免疫細(xì)胞主要存在于免疫器官、組織以及血液和淋巴液中。1。T 淋巴細(xì)胞：它由一群功能不同的異質(zhì)性淋巴細(xì)胞組成，在胸腺內(nèi)分化成熟，為胸腺依賴性淋巴細(xì)胞(Th

11、ymus dependent lymphocyte)的簡(jiǎn)稱(chēng)。成熟的T細(xì)胞隨血流分布于外周免疫器官，并經(jīng)過(guò)血液與組織間的淋巴細(xì)胞再循周游走于全身，執(zhí)行其免疫功能。其在外周血中所占淋巴細(xì)胞總數(shù)的6580%。2。B 淋巴細(xì)胞：在骨髓骨髓樣組織中分化成熟，稱(chēng)骨髓依賴淋巴細(xì)胞。成熟的B細(xì)胞隨血流分布于外周淋巴組織，主要功能為產(chǎn)生抗體，執(zhí)行體液免疫。外周血中占淋巴細(xì)胞總數(shù)的1015%。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念.3. NK細(xì)胞 它為發(fā)現(xiàn)較晚的一群淋巴細(xì)胞，最主要功能為非特異性殺傷靶細(xì)胞，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞和病毒感染的細(xì)胞具較強(qiáng)殺傷作用。約占510%。4. 單核吞噬細(xì)胞 它包括血液中的單核細(xì)胞Monocyte

12、, MC和組織中的巨噬細(xì)胞。它不僅在非特異性免疫中發(fā)揚(yáng)重要作用，在特異性免疫中也是不可短少的細(xì)胞，有吞噬殺傷、抗原遞呈和合成分泌細(xì)胞因子等作用。5. 其他免疫細(xì)胞 除上述免疫細(xì)胞外，血液中許多細(xì)胞均直接或間接參與免疫應(yīng)對(duì)過(guò)程，如中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和血小板等。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念.三免疫因子免疫因子： 由機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生，與免疫應(yīng)對(duì)有關(guān)的、分泌到體液中或存在于細(xì)胞膜外表的分子統(tǒng)稱(chēng)為免疫因子。 組成：它主要包括抗體、補(bǔ)體系統(tǒng)各成分、細(xì)胞因子及免疫細(xì)胞膜分子等。 細(xì)胞因子(Cytokines) ：由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞如纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等合成和分泌的，具有調(diào)理多種細(xì)胞生理

13、功能的可溶性小分子蛋白質(zhì)。 細(xì)胞因子種類(lèi)繁多，具有多種生物學(xué)活性，在免疫系統(tǒng)的調(diào)控中作用艱苦。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念.三、免疫的主要類(lèi)型1. 天然免疫定義： 指機(jī)體先天具有的正常生理防御功能，對(duì)各種不同的病原微生物與異物都有排斥和屏障作用，也稱(chēng)非特異性免疫。 如：皮膚和粘液、粘液中的溶菌酶、吞噬細(xì)胞等2. 獲得性免疫定義：指機(jī)體對(duì)某一種或一類(lèi)微生物或其產(chǎn)物所產(chǎn)生的特異性 抵抗力，它是后天的，是生物體在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中由于自 然感染或預(yù)防接種后產(chǎn)生的。也稱(chēng)特異性免疫。 1) 自動(dòng)免疫：因感染病原或注射抗原疫苗而獲得的免疫 抗原：凡能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細(xì)胞，并能與之結(jié)合引起特異性免疫反

14、響的物質(zhì)。 2) 被動(dòng)免疫：從母體獲得抗體或因人工注射抗體而獲得的免疫 免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念.3) 自動(dòng)免疫和被動(dòng)免疫的區(qū)別： a. 發(fā)生作用時(shí)間： 自動(dòng)免疫：慢1-4周； 被動(dòng)免疫：快立刻 b. 效果： 自動(dòng)免疫：可刺激機(jī)體繼續(xù)產(chǎn)生抗體，再次接納抗原刺激 將表現(xiàn)出再次反響或反響加強(qiáng) 被動(dòng)免疫：體內(nèi)抗體數(shù)量不會(huì)增多，再次接觸抗原也不出 現(xiàn)加強(qiáng)反響 c. 維持時(shí)間： 自動(dòng)免疫：長(zhǎng)半年至終生； 被動(dòng)免疫：短2-3周 d. 用途： 自動(dòng)免疫：預(yù)防感染； 被動(dòng)免疫：應(yīng)急治療 免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念.四、水產(chǎn)動(dòng)物免疫的特點(diǎn)1. 水產(chǎn)動(dòng)物病原與人類(lèi)疾病關(guān)系不大，不易引起注重；2. 水產(chǎn)動(dòng)物免

15、疫機(jī)制依賴于外界環(huán)境變化較為明顯；3. 水產(chǎn)動(dòng)物抗體與人等高等生物的知抗體不同，其疾病的免疫學(xué)防治方法尚在探求中；4. 水產(chǎn)動(dòng)物是變溫動(dòng)物，其免疫學(xué)研討必需在同一條件下進(jìn)展五、水產(chǎn)動(dòng)物免疫在病害防治中的意義1. 經(jīng)過(guò)人工免疫或?qū)Σ『笥忻庖吡€(gè)體挑選，培育免疫新種類(lèi)(SPR)；2. 經(jīng)過(guò)人工免疫，可有效預(yù)防流行病的發(fā)生；3. 免疫防治可有效防止藥物殘留及化學(xué)藥物對(duì)水體的污染；4. 免疫防治可防止長(zhǎng)期運(yùn)用抗生素等而產(chǎn)生的耐藥性；5. 疫苗防治可維持較長(zhǎng)的藥效時(shí)間。免疫：水產(chǎn)動(dòng)物免疫的根本概念.第二節(jié) 水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的非特異性免疫魚(yú)蝦貝類(lèi)的非特異性免疫因子 外部屏障：皮膚和粘膜 屏障作用 內(nèi)部屏障：血

16、腦屏障(血胎屏障)非特異性免疫 細(xì)胞：吞噬細(xì)胞粒細(xì)胞等 細(xì)胞和 體液作用 體液：補(bǔ)體、溶菌酶等Chapter 2. 免疫原理及運(yùn)用.一、魚(yú)蝦貝類(lèi)的非特異性免疫1.外部屏障 1) 作用： a. 機(jī)械阻撓和排除作用 b. 具非特異性抗菌物質(zhì)：溶菌酶、皮脂腺產(chǎn)乳酸等 c. 正常菌群的拮抗作用 2) 種類(lèi) A. 粘液: a. 屏障維護(hù)作用 (可限制病原菌運(yùn)動(dòng)，阻止其侵入) b. 含有溶菌和殺菌的多糖類(lèi)和蛋白類(lèi)，如溶菌酶等 B. 甲殼、皮膚和鱗片等： 機(jī)械屏障作用2. 體內(nèi)屏障 血腦屏障：由腦膜、脈絡(luò)叢和腦血管等組成。為大腦與軀干屏障 作 用：防止病原和其他異物進(jìn)入大腦 免疫：非特異性免疫.3.非特異性

17、免疫細(xì)胞 1) 吞噬細(xì)胞：包括粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞 作用： 受病原和宿主產(chǎn)生的趨化因子作用接近并吞噬 或殺傷病原 2) 非特異性細(xì)胞毒細(xì)胞：主要存在于腎臟和腹腔，血中少。 作用：與哺乳動(dòng)物NK細(xì)胞類(lèi)似，可以殺傷病毒感染的 靶細(xì)胞，從而具有抗感染作用 免疫：非特異性免疫.4. 非特異性體液因子 1) 補(bǔ)體： A. 來(lái)源與成分：存在于血清中，由多種非特異性血清蛋白 組成，它對(duì)熱敏感，4520min失活 B. 作用：a. 在抗原抗體反響中經(jīng)過(guò)補(bǔ)體第二激活通路補(bǔ)充 抗體作用； b. 激活后的補(bǔ)體能溶解細(xì)胞膜，殺滅病毒； c. 激活后的補(bǔ)體可促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬和釋放組 胺等多種功能，協(xié)助殺滅病原.

18、 免疫：非特異性免疫.2) 干擾素： A. 定義：是一類(lèi)在同種細(xì)胞上具有抗病毒活性的蛋白質(zhì). (其活性的發(fā)揚(yáng)受細(xì)胞基因組的調(diào)理和控制，涉及RNA和DNA的合成) B. 來(lái)源與成分：主要為由巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)； 機(jī)體產(chǎn)生干擾素的數(shù)量產(chǎn)生受溫度影響明顯。如： 硬頭鱒感染病毒后，10 下，4d產(chǎn)生； 15 下，2d產(chǎn)生 C. 作用： 干擾素為重要的抗病毒感染因子 a. 抗病毒增殖活性； b. 免疫調(diào)理活性； c. 細(xì)胞分裂抑制活性； d. 抑制腫瘤生長(zhǎng)活性； e. 改動(dòng)細(xì)胞生物學(xué)特性等。 免疫：非特異性免疫.3) 溶菌酶 A. 來(lái)源與成分：存在于粘液、血清和巨噬細(xì)胞中，是一種 水解酶低分

19、子堿性多肽 B. 作用： 可直接溶解殺死G+菌等病原微生物4) C反響性蛋白 A. 來(lái)源與成分：為存在于鰈科魚(yú)類(lèi)中的一種蛋白質(zhì) B. 作用： a. 作為調(diào)理素可添加吞噬細(xì)胞的吞噬量 b. 能使真菌、細(xì)菌乃至寄生蟲(chóng)中的糖類(lèi)和磷酸酯 產(chǎn)生沉淀，從而殺滅病原體。5) 備解素：為 - 球蛋白，可在補(bǔ)體協(xié)助下殺死許多細(xì)菌、原 蟲(chóng)甚至某些病毒等免疫：非特異性免疫.二、影響非特異性免疫的要素1.環(huán)境要素 1) DO： 缺氧可引起水生動(dòng)物抗病力下降 據(jù)此，有時(shí)可采用沖水、換水和充氣等方法緩解病情 2) 水質(zhì)：水體有毒物質(zhì)可妨礙機(jī)體正常機(jī)能，免疫力下降 3) 水溫：適宜的溫度變化可抑制疾病的迸發(fā)2. 營(yíng)養(yǎng)要素

20、1) 營(yíng)養(yǎng)缺乏，體質(zhì)下降，機(jī)體抗菌力降低 2) 營(yíng)養(yǎng)缺乏，機(jī)體細(xì)胞代謝下降，病毒感染率降低3. 個(gè)體差別和年齡影響免疫：非特異性免疫.第三節(jié) 特異性免疫一、抗原Antigen, Ag1. 抗原的概念 1) 抗原：是一種可以刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)使之發(fā)生特異性免疫應(yīng)對(duì)，并能與相應(yīng)免疫應(yīng)對(duì)產(chǎn)物或效應(yīng)體細(xì)胞在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。 2) 抗原的兩種性能： a. 免疫原性：指抗原分子能刺激機(jī)免疫細(xì)胞，并使之活化、增殖、分化，最終產(chǎn)生效應(yīng)分子抗體或細(xì)胞體致敏T細(xì)胞 的性能。 b. 免疫反響性：指抗原分子能與相應(yīng)的免疫應(yīng)對(duì)產(chǎn)物在體外或體內(nèi)發(fā)生特異性結(jié)合產(chǎn)生免疫反響的性能。 免疫原性和免疫反響性統(tǒng)稱(chēng)為抗

21、原性。Chapter 2. 免疫原理及運(yùn)用.3) 抗原的主要種類(lèi)： a. 完全抗原complete antigen： 既有免疫原性又有免疫反響性的抗原稱(chēng)為完全抗原。 大多異種蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒、細(xì)菌外毒素和動(dòng)物免疫血清等都為完全抗原 b. 不完全抗原(incomplete antigen)： 那些本身沒(méi)有免疫原性而只需免疫反響性的物質(zhì),又稱(chēng)半抗原h(huán)apten 半抗原大多為小分子物質(zhì)，如大多數(shù)多糖、脂類(lèi)、某些藥物和簡(jiǎn)單化合物等、 半抗原單獨(dú)作用無(wú)免疫原性，當(dāng)與大分子蛋白質(zhì)載體結(jié)合構(gòu)成半抗原載體復(fù)合物使，便可獲得免疫原性。該復(fù)合物不但可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)半抗原的抗體，也可刺激機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)蛋白質(zhì)載體的

22、抗體。 4) 特殊抗原： a. 變應(yīng)原(allergen)：能刺激機(jī)體產(chǎn)生病理性免疫應(yīng)對(duì)(超敏反響)的抗原。 b. 耐受原(tolerangen)：能誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)其表現(xiàn)無(wú)免疫應(yīng)對(duì) (免疫耐受)的抗原。 免疫類(lèi)型：特異性免疫.2. 抗原的特性 1) 特異性：具有與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性反響的才干； 2) 異物性：正常情況下，能引起機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)對(duì)的抗原都是異種或 異體物質(zhì)，機(jī)體本身的物質(zhì)或細(xì)胞不能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)對(duì)；并且， 親緣關(guān)系越遠(yuǎn)、組織構(gòu)造間差別越大，抗原性越強(qiáng)。 3) 大分子膠體性：抗原的分子量較大 (1萬(wàn)Da以上)，分子量小于4000 Da的物質(zhì)普通不具抗原性。同一類(lèi)物質(zhì)，其抗原性隨分子量

23、增大而加強(qiáng) 4) 構(gòu)造復(fù)雜性：抗原要有一定的化學(xué)組成和復(fù)雜的構(gòu)造 抗原性：芳香類(lèi)Pr.非芳香類(lèi)Pr 多糖核酸類(lèi)脂 5) 完好性：抗原必需堅(jiān)持完好的化學(xué)活性基團(tuán)才干具有抗原性，否那么， 將不能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體免疫：特異性免疫.3. 決議抗原免疫原性的要素 某物質(zhì)能否具有免疫原性，能否作為免疫原誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)對(duì)，與其本身的性質(zhì)、機(jī)體對(duì)該物質(zhì)的反響性及免疫的方式等直接相關(guān)。 1) 分子大?。悍簿哂忻庖咴缘奈镔|(zhì)均為大分子的有機(jī)物質(zhì)無(wú)機(jī)物不能作為免疫原，分子量低于4000的物質(zhì)通常也無(wú)免疫原性； 為什么大分子物質(zhì)免疫原性較強(qiáng)呢？ a. 分子量越大，其外表攜帶的抗原決議簇越多，因此對(duì)淋巴細(xì)胞刺激也越

24、強(qiáng)； b. 大分子膠體物質(zhì)，化學(xué)構(gòu)造穩(wěn)定，在體內(nèi)不易被破壞和去除，存留時(shí)間較長(zhǎng)，使淋巴細(xì)胞得到較耐久的刺激，有利于免疫應(yīng)對(duì)的發(fā)生。 2) 化學(xué)構(gòu)造與組成：大分子物質(zhì)并不都有良好免疫原性，還與組成與構(gòu)造有關(guān) 如：明膠分子量雖達(dá)10萬(wàn)，但其組分為直鏈a.a. ，易被分解破壞，免疫原性弱; 假設(shè)明膠分子上銜接少量酪氨酸或谷氨酸等芳香族a.a. ，免疫原性顯著加強(qiáng); 以芳香族a.a.為主的Pr.，其免疫原性要明顯高于非芳香族a.a.為主的Pr.免疫：特異性免疫.3) 異物性： 免疫系統(tǒng)能識(shí)別本人和異己物質(zhì)，對(duì)本身物質(zhì)免疫耐受；對(duì)異己物質(zhì)免疫應(yīng)對(duì) 。 免疫原性與抗原和宿主種系關(guān)系遠(yuǎn)近有關(guān)，種系關(guān)系越遠(yuǎn)，

25、免疫原性越強(qiáng)。 具有異物性的物質(zhì)包括以下三類(lèi)： a. 異種物質(zhì)：如細(xì)菌、病毒、異種血清、植物蛋白等； b. 同種異體物質(zhì)：如人類(lèi)紅細(xì)胞外表血型抗原A、B、O、Rh等； c. 改動(dòng)和隱蔽的本身物質(zhì)：主要包括在外傷、感染、輻射或藥物作用下，組織構(gòu)造發(fā)生改動(dòng)的“本身物質(zhì)和釋放入血的本身抗原，如甲狀腺蛋白，等。4) 免疫途徑：一樣抗緣由免疫途徑不同，產(chǎn)生的免疫效果也不同 多數(shù)抗原須經(jīng)非消化道(皮下、肌肉、體表或血液等)途徑才干產(chǎn)生良好免疫效果； 有些抗原(如須刺激腸粘膜相關(guān)淋巴組織的抗原)，只需口服免疫才有良好效果。5) 機(jī)體應(yīng)對(duì)性：抗原物質(zhì)能否產(chǎn)生免疫原性還與機(jī)體的免疫應(yīng)對(duì)才干有關(guān)。 如：純化多糖對(duì)

26、人和小鼠有良好免疫原性，而對(duì)豚鼠那么不能引起免疫應(yīng)對(duì)。 此外，抗原的免疫原性還與抗原劑量、佐劑、機(jī)體年齡與生理形狀等要素有關(guān)。免疫：特異性免疫.4. 抗原的特異性與交叉反響 抗原的特異性既表如今免疫原性上，也表如今免疫反響性上。 表如今免疫原性：指某一抗原分子只能誘導(dǎo)相應(yīng)淋巴細(xì)胞發(fā)生專(zhuān)注應(yīng)對(duì)； 表如今免疫反響性：指某一抗原分子只能與相應(yīng)抗體或淋巴細(xì)胞發(fā)生專(zhuān)注結(jié)合。 抗原的特異性是由抗原分子外表的抗原決議簇決議的。1) 抗原決議簇antigenic determinant： 指位于抗原分子外表、決議抗原特異性的特定化學(xué)基團(tuán)，它是決議抗原反響性呈現(xiàn)高度特異性的物質(zhì)根底。又稱(chēng)表位epitope 詳細(xì)

27、說(shuō)，抗原決議簇就是與相應(yīng)淋巴細(xì)胞上的抗原受體結(jié)合的部位，并且，只需兩者結(jié)合才干激活淋巴細(xì)胞并引起免疫反響 免疫：特異性免疫.2) 抗原決議簇的種類(lèi)與組成 a. 種類(lèi)：一個(gè)抗原外表可以有一種或多種不同的抗原決議簇； 功能性(抗原)決議簇：指位于抗原分子外表易被相應(yīng)淋巴細(xì)胞識(shí)別、啟動(dòng)免疫應(yīng)對(duì)，同時(shí)能與相應(yīng)抗體或致敏T細(xì)胞特異性結(jié)合發(fā)生免疫反響的決議簇。 隱蔽性(抗原)決議簇：位于抗原分子內(nèi)部，不能被淋巴細(xì)胞識(shí)別，無(wú)法觸發(fā)免疫應(yīng)對(duì)的抗原決議簇。它假設(shè)經(jīng)理化要素處置或經(jīng)抗原提呈細(xì)胞加工后，也可將隱藏與抗原分子內(nèi)部的決議簇暴露，稱(chēng)為功能性決議簇而發(fā)揚(yáng)免疫作用。b. 抗原結(jié)合價(jià)：一個(gè)抗原分子上能與相應(yīng)抗體

28、分子結(jié)合的抗原決議簇的總數(shù) 單價(jià)抗原：有些半抗原只能和抗體分子中一個(gè)抗原結(jié)合部位結(jié)合，為單價(jià)抗原 多價(jià)抗原：多數(shù)抗原有多個(gè)一樣和不同抗原決議簇，能和多個(gè)抗體分子結(jié)合。c. 組成：不同類(lèi)型的抗原決議簇組成不同，普通有5-7個(gè)單體組成 如：Pr類(lèi)抗原：其抗原決議簇有5 個(gè)左右氨基酸 多糖類(lèi)抗原：其抗原決議簇有6 個(gè)左右單糖 核酸類(lèi)抗原：其抗原決議簇有6-8 個(gè)左右核苷酸殘基 免疫：特異性免疫.3) 抗原決議簇對(duì)抗原特異性的影響 抗原決議簇的化學(xué)組成、陳列及空間構(gòu)造決議著抗原的特異性。 天然抗原構(gòu)造復(fù)雜，同種抗原有多種不同抗原決議簇，不同抗原也具有不同的抗原決議簇，因此各具特異性。4) 共同抗原與交

29、叉反響共同抗原：指具有一樣的抗原決議簇的抗原。其中： 類(lèi)屬抗原：存在于同一種屬或近緣種屬中的共同抗原稱(chēng)類(lèi)屬抗原； 異嗜性抗原：存在于不同種屬生物間的共同抗原稱(chēng)異嗜性抗原。交叉反響：由共同抗原決議簇刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體可和兩種抗原結(jié)合發(fā)生反響。 交叉反響有時(shí)也在兩種抗原決議簇構(gòu)型類(lèi)似時(shí)發(fā)生。免疫：特異性免疫.免疫：特異性免疫.5. 抗原的分類(lèi) 根據(jù)分類(lèi)方法不同，可以將抗原分為不同的類(lèi)型。A. 根據(jù)抗原的來(lái)源及與機(jī)體的親緣關(guān)系分類(lèi)(1) 異種抗原：指來(lái)自另一物種的抗原物質(zhì)。如各種微生物及其代謝產(chǎn)物、(2) 同種異體抗原：指來(lái)自同種而基因型不同的個(gè)體的抗原物質(zhì)，如人血型抗原；(3) 本身抗原：指能引起

30、本身免疫應(yīng)對(duì)的本身組織成分，如改動(dòng)和隱蔽的本身物質(zhì)。B. 根據(jù)抗原激活B細(xì)胞能否依賴T細(xì)胞輔助來(lái)分類(lèi)(1) 胸腺依賴性抗原thymus dependant antigen, TD-Ag： TD抗原：含T細(xì)胞抗原決議簇、需T細(xì)胞協(xié)助才干激活B細(xì)胞產(chǎn)生Ab 的抗原。 如：病毒、細(xì)菌、細(xì)胞及各種蛋白質(zhì)等抗原都屬TD抗原(2) 胸腺非依賴性抗原thymus independant antigen, TI-Ag： TI抗原：只含B細(xì)胞抗原決議簇、不需T細(xì)胞協(xié)助可直接激活B細(xì)胞產(chǎn)生Ab 的抗原 如：革蘭氏陰性菌的LPS、莢膜多糖等。 C. 抗原的其它分類(lèi)方法：如依性能分完全抗原和半抗原，依組分分蛋白質(zhì)抗原

31、、脂蛋白抗原、糖蛋白抗原、多糖抗原和核蛋白抗原等，依獲得方式分天然、人工和合成抗原等。免疫：特異性免疫.6. 細(xì)菌抗原 細(xì)菌是重要的病原體，其成分非常復(fù)雜，每種構(gòu)造及其代謝產(chǎn)物均有不同的抗原成分，每種細(xì)菌都是一個(gè)由多種抗原組成的復(fù)合體。 細(xì)菌抗原的種類(lèi)： a. 外表抗原：包括莢膜抗原和微莢膜抗原； b. 菌體抗原：指位于細(xì)菌細(xì)胞壁、細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)上的抗原； c. 鞭毛抗原：存在于鞭毛上的抗原； d. 菌毛抗原：存在于菌毛上的抗原； e. 外毒素和類(lèi)毒素：毒素是Pr，具很強(qiáng)免疫原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素 外毒素：為細(xì)菌產(chǎn)生的一類(lèi)蛋白質(zhì)，具強(qiáng)抗原性 類(lèi)毒素：為外毒素經(jīng)0.3-0.4%甲醛脫毒而成，

32、具強(qiáng)抗原性 外毒素和類(lèi)毒素均能刺激機(jī)體產(chǎn)生抗毒素 免疫：特異性免疫.7. 佐劑adjuvant 1) 定義：指與抗原同時(shí)或預(yù)先注入機(jī)體后，可以非特異性地加強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)對(duì)才干的物質(zhì)。 2) 種類(lèi)： a. 無(wú)機(jī)佐劑：主要為含鋁化合物，如：銨明礬、氫氧化鋁、磷酸鋁等 b. 有機(jī)佐劑：主要為微生物及其代謝產(chǎn)物，如分枝桿菌(結(jié)核桿菌)、LPS等 c. 合成佐劑：一些合成物質(zhì)，如PolyI:C、PolyA:U 等 d. 油劑：如礦物油石蠟油、植物油、花生油乳化佐劑、弗氏佐劑等 3) 弗氏佐劑：由礦物油(石蠟油)、乳化劑(羊毛脂或吐溫80)和殺死的分支桿菌(如結(jié)核桿菌)等組成的佐劑。 a. 完全氟氏

33、佐劑：以上三種成分俱全的佐劑 b. 不完全氟氏佐劑：不含分支桿菌的氟氏佐劑，其對(duì)機(jī)體刺激作用較弱免疫：特異性免疫.4) 作用： a. 添加抗原的免疫原性添加抗原的外表積； b. 加強(qiáng)抗體對(duì)抗原的免疫應(yīng)對(duì)才干； c. 改動(dòng)抗體產(chǎn)生的類(lèi)型； d. 引起或加強(qiáng)IV型超敏反響。5) 作用機(jī)制：作用機(jī)制尚未完全了解，主要能夠有以下緣由 主要是促進(jìn)淋巴細(xì)胞的增殖、分化，改動(dòng)抗原的物理外形，使抗原在體內(nèi)維持較長(zhǎng)時(shí)間，易于巨噬細(xì)胞的攝取、處置并提呈給淋巴細(xì)胞，從而提高抗原的免疫原性，加強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的應(yīng)對(duì)才干。6) 運(yùn)用方法： 預(yù)先運(yùn)用或與抗原同時(shí)運(yùn)用 免疫：特異性免疫.二、免疫球蛋白(Immunoglobul

34、in, Ig)1. 免疫球蛋白與抗體的根本概念(1)免疫球蛋白：指具有抗體活性或化學(xué)構(gòu)造與抗體類(lèi)似的球蛋白。 Ig 過(guò)去稱(chēng)為 球蛋白，主要存在于血液和其他分泌液中。(2) 膜外表免疫球蛋白(Surface membrane immunoglobulin, SmIg)：B細(xì)胞膜上可作為抗原識(shí)別受體的免疫球蛋白。(3)抗體(Antibody, Ab)：機(jī)體免疫細(xì)胞被抗原激活后，由分化成熟的終末B細(xì)漿細(xì)胞所合成與分泌的一類(lèi)能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。 抗體是重要的免疫分子，主要存在于血液、體液和粘膜分泌液中。 細(xì)胞免疫：由免疫細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反響。 體液免疫：由抗體介導(dǎo)的免疫反響。

35、抗體 = 免疫球蛋白？Why?免疫：特異性免疫. 抗體都是免疫球蛋白，但免疫球蛋白并不都是抗體。 如：骨髓瘤蛋白的化學(xué)構(gòu)造與Ab類(lèi)似(屬I(mǎi)g)，但無(wú)抗體活性，無(wú)免疫功能； SmIg的化學(xué)構(gòu)造與Ab類(lèi)似，能與Ag特異性結(jié)合，但它不是激活的B細(xì)胞產(chǎn)生。 免疫球蛋白是化學(xué)構(gòu)造上的概念，但抗體是生物學(xué)功能上的概念。2. 作為抗體必需具備的條件： 1) 只需脊椎動(dòng)物的漿細(xì)胞才干產(chǎn)生； 2) 必需有抗原刺激； 3) 能與相應(yīng)抗原產(chǎn)生特異性結(jié)合； 4) 其化學(xué)本質(zhì)是一種具免疫功能的球蛋白。免疫：特異性免疫.3. Ig的化學(xué)構(gòu)造 H鏈V區(qū) Ig 分子是由一個(gè)或多個(gè)單體組成； L鏈V區(qū) 如：IgG、IgD和Ig

36、E 均為單體分子 L鏈C區(qū) 每個(gè)Ig單體呈Y形對(duì)稱(chēng)構(gòu)造。 H鏈C區(qū) 每個(gè)單體是由二硫鍵銜接的四條肽鏈組成； 四條肽鏈包括2條重鏈(H鏈)和2條輕鏈(L鏈)； Ig單體的構(gòu)造 重鏈：約由450個(gè)或570個(gè)氨基酸組成，它包括5類(lèi)： 、 、 、 、 。 Ig因重鏈的種類(lèi)不同分為5類(lèi)： IgG (鏈)，IgA (鏈)，IgM (鏈)，IgD (鏈)，IgE (鏈) 輕鏈：約由214個(gè)氨基酸組成，以二硫鍵與重鏈相連。它有2類(lèi)：型和型 每條肽鏈包括可變區(qū)(V區(qū)) 和穩(wěn)定區(qū)(C區(qū))。重鏈可變區(qū)(VH)和輕鏈可變區(qū)(VL)都是抗原特異性結(jié)合部位。在構(gòu)造上與抗原構(gòu)造互補(bǔ)(因此又稱(chēng)互補(bǔ)決議區(qū))免疫：特異性免疫.4

37、. 不同動(dòng)物中Ig的類(lèi)型 根據(jù)CH上同種型決議簇的不同，將Ig分為5種：IgA、IgG、IgM、IgD和IgE.其中，IgG、IgA和IgM又依CH氨基酸組成和H鏈間二硫鍵數(shù)目的差別，分成假設(shè)干亞類(lèi)： IgG1、IgG2、IgG3、IgG4；IgA1、IgA2；IgM1和IgM2。1) 哺乳類(lèi)：a. 人、鼠：IgG, IgA, IgM, IgD, IgE; b. 兔： IgG, IgA, IgM; c. 其他：IgG, IgA, IgM, IgE; 2) 鳥(niǎo)類(lèi)： IgG, IgA, IgM; 3) 兩棲類(lèi)： IgG, IgM; 4) 魚(yú)類(lèi)： IgM; 5) 無(wú)脊椎動(dòng)物：無(wú)Ig免疫：特異性免疫.

38、5. 各種Ig的特性與功能1) IgG： a. 來(lái)源與性質(zhì)：主要由脾和淋巴結(jié)的漿細(xì)胞合成，常以單體方式存在于血清和其他血清中。它在人體的含量最高(3/4)、半衰期最長(zhǎng)(23d)、易透過(guò)毛細(xì)血管，因此可廣泛分布到組織和其他體液中。分子量15萬(wàn)Da. b. 作用：(1) 抗感染作用，抗毒素及大多抗菌和抗病毒抗體均屬I(mǎi)gG； IgG還是獨(dú)一能經(jīng)過(guò)胎盤(pán)的Ig，是新生兒抗感染的重要要素。 (2) 不少本身抗體和引起II、III型變態(tài)反響的抗體也屬I(mǎi)gG; (3) IgG與補(bǔ)體結(jié)合后可經(jīng)過(guò)傳統(tǒng)途徑激活補(bǔ)體； (4) IgG能與巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和NK細(xì)胞外表相應(yīng)受體結(jié)合， 從而發(fā)揚(yáng)調(diào)理吞噬和ADCC效應(yīng)

39、。免疫：特異性免疫.2) IgM： a. 來(lái)源與性質(zhì)： (1)主要由脾的漿細(xì)胞合成，它是由5個(gè)IgM單體借一個(gè)J鏈和假設(shè)干個(gè)二硫鍵銜接而成的五聚體，是5類(lèi)Ig中分子量最大的(95萬(wàn)Da)，故稱(chēng)巨球蛋白。 (2) 它不能透過(guò)血管壁，主要分布于血液中，占血清Ig總量的10%左右； (3) 為個(gè)體發(fā)育中合成最早的Ig，在胎兒晚期已能合成，但它不能經(jīng)過(guò)胎盤(pán)； (4) 是人體免疫后最早出現(xiàn)的抗體； (5) IgM是目前魚(yú)類(lèi)中獨(dú)一確認(rèn)的抗體類(lèi)型。 b. 作用： 其作用與IgG類(lèi)似，具有殺菌、溶菌、調(diào)理吞噬及凝集作用等，不過(guò)，由于IgM抗原結(jié)合效價(jià)最高，是高效能的抗菌抗體，它的上述作用均比IgG強(qiáng)。免疫：特

40、異性免疫.單體.3) IgA： (1) 分為血清型IgA和分泌型IgA(SIgA)兩種類(lèi)型。前者85%為單體，少數(shù)為含J鏈的二聚體，主要由腸系膜淋巴組織漿細(xì)胞產(chǎn)生；后者為二聚體(雙體)。 (2) 人體含量?jī)H次于IgG (占10- 15%)，分子量為18-20萬(wàn)Da。 (3) 是少數(shù)在消化道中不被消化的Pr之一； (4) 嬰兒出生4-6個(gè)月后才干合成，但可從母乳中獲得SIgA (5) SIgA主要分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道粘膜外表以及唾液、淚液、初乳和與粘膜相關(guān)的分泌液中，是部分粘膜防御感染的重要要素； (6) 血清型IgA具有中和毒素、調(diào)理吞噬的作用。免疫：特異性免疫.4) IgD：(1

41、) 以單體方式存在于血清中，含量低，僅占人體血清Ig總量的1%。(2) 構(gòu)造與IgG類(lèi)似，不能經(jīng)過(guò)胎盤(pán)，也不能激活補(bǔ)體。(3) 血清中的IgD功能尚不清楚，但B細(xì)胞外表的IgD(SIgD)是成熟B細(xì)胞的重要標(biāo)志，它是B細(xì)胞的抗原識(shí)別受體，在接受抗原刺激后對(duì)B細(xì)胞活化、增生和分化其調(diào)理作用； 5) IgE： (1) 以單體方式存在于血清中，是系統(tǒng)進(jìn)化最晚出現(xiàn)的Ig，也是含量最低的Ig，僅占血清Ig總量的0.001%. (2) 在過(guò)敏性疾病和某些寄生蟲(chóng)感染病人血清中其含量顯著增高； (3) 產(chǎn)生部位與SIgA類(lèi)似，主要由呼吸道如鼻咽、扁桃體、支氣管)和胃腸道粘膜固有層的漿細(xì)胞產(chǎn)生。免疫：特異性免疫

42、.第四節(jié) 免疫學(xué)方法及其運(yùn)用一、根本概念1. 血清學(xué)反響：抗原與相應(yīng)抗體在體外發(fā)生的特異性結(jié)合反響;2. 免疫學(xué)反響：抗原與相應(yīng)抗體在體內(nèi)發(fā)生的特異性結(jié)合反響;3. 抗原抗體反響：抗原與相應(yīng)抗體在體外或體內(nèi)發(fā)生的特異性結(jié)合反響；4. 免疫診斷學(xué)：用體液免疫和細(xì)胞免疫的方法來(lái)診斷有關(guān)疾病的科學(xué)。 二、血清學(xué)反響的特點(diǎn) 1. 特異性與交叉性：a. 特異性：一種抗原普通只能與其相應(yīng)的抗體結(jié)合； b. 交叉性：當(dāng)不同抗原具有一樣抗原決議簇時(shí)，其結(jié)合又具有交叉性2.外表性與可逆性：a. 外表性：抗原與抗體分子結(jié)合是分子外表的結(jié)合； b. 可逆性：抗原抗體結(jié)合后，在一定條件下仍可分開(kāi)，且其性質(zhì)不變。可逆性

43、是免疫吸附層析法提取免疫純抗原或抗體的實(shí)際根底。Chapter 2. 免疫原理及運(yùn)用.3. 定比性：抗原與抗體需按一定的比例結(jié)合 普通情況下，抗原外表的抗原決議簇是多價(jià)的，而抗體上的抗 原受體通常是單價(jià)的或二價(jià)的，二者只需以一定比例結(jié)合才干出現(xiàn) 可見(jiàn)的血清學(xué)反響。4. 階段性: 抗原抗體反響具有明顯的階段性 1) 抗原抗體的特異性結(jié)合階段：時(shí)間短數(shù)秒，不可見(jiàn) 2) 抗原與抗體反響的可見(jiàn)階段：慢數(shù)分至數(shù)天，有凝集、沉淀等5. 高度敏感性：可用于檢測(cè)極微量的抗原與抗體。如： 血清中和實(shí)驗(yàn)可用于檢測(cè)含量低至10-3 g / ml的魚(yú)類(lèi)病毒； ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn))可檢測(cè)含量為10-3 g /

44、 ml的細(xì)菌性病原6. 條件依賴性：抗原抗體間出現(xiàn)可見(jiàn)反響要提供最適的條件，如： pH值(普通為6-8)；溫度(37-45)；適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)(如生理鹽水)； 震蕩(添加抗原抗體相互接觸的時(shí)機(jī))等。免疫：免疫學(xué)方法及其運(yùn)用.三、主要的抗原抗體反響一凝集反響 Agglutination1. 定義：顆粒性抗原(如完好的紅細(xì)胞或細(xì)菌)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間構(gòu)成肉眼可見(jiàn)的凝集物，稱(chēng)為凝集反響。 用于凝集反響的抗原稱(chēng)為凝集原；用于凝集反響的抗體稱(chēng)凝集素2. 種類(lèi): (1)直接凝集反響(direct agglutination) ：顆粒性抗原直接與相應(yīng)抗體結(jié)合所出現(xiàn)的凝集景象。 玻片法：屬

45、定性實(shí)驗(yàn)，常用于細(xì)菌和ABO血型鑒定 試管法：屬定量實(shí)驗(yàn)，用知Ag測(cè)定血清中相應(yīng)Ab及其數(shù)量。在該實(shí)驗(yàn) 中，將出現(xiàn)明顯凝集反響的血清最高稀釋度稱(chēng)為該抗體的效價(jià)或滴度。免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法. (2) 間接凝集反響(indirect or passive agglutination) ：將可溶性抗原先吸附于一種與免疫無(wú)關(guān)的載體顆粒外表，再與相應(yīng)抗體作用，在適宜電解質(zhì)存在時(shí)，出現(xiàn)載體顆粒被動(dòng)凝集景象。 常用載體有人O型紅細(xì)胞、乳膠顆粒、活性炭等，并因載體不同而分別稱(chēng)為間接血凝實(shí)驗(yàn)、間接乳凝實(shí)驗(yàn)和間接炭凝實(shí)驗(yàn)。免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.二沉淀反響(precipitation)1. 定義：可溶性抗原(如血清

46、蛋白、多糖和細(xì)菌抽提液等)與其相應(yīng)抗體在適宜條件下出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)沉淀物的景象。 用于沉淀反響的抗原稱(chēng)為沉淀原；用于沉淀反響的抗體稱(chēng)沉淀素 沉淀反響包括環(huán)狀沉淀反響、絮狀沉淀反響以及由此派生出來(lái)的瓊脂分散免疫實(shí)驗(yàn)等。其中，前兩者敏感性不高，已少用，派生方法現(xiàn)仍廣泛運(yùn)用。2. 沉淀反響的種類(lèi)與運(yùn)用： 1) 經(jīng)典方法： a. 環(huán)狀沉淀反響：在小試管中參與抗血清 + 緩慢參與待測(cè)抗原 (數(shù) 分鐘)結(jié)果：陽(yáng)性 白色沉淀環(huán)； 陰性 無(wú) b.絮狀沉淀反響：將知抗體與待測(cè)抗原混勻于試管或凹玻片結(jié)果： 陽(yáng)性 絮狀沉淀； 陰性 無(wú)免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.2) 現(xiàn)代方法： a. 單免疫分散(single immunod

47、iffusion)：將適當(dāng)濃度的知抗體預(yù)先混在11.5% 瓊脂內(nèi)制成凝膠板，再以適當(dāng)間隔在板上打孔，孔中參與待測(cè)抗原，當(dāng)抗原向周?chē)稚r(shí)，與板上的抗體相遇，并在最適宜的比例處構(gòu)成白色沉淀環(huán)。因沉淀環(huán)直徑與抗原濃度成正比，因此，假設(shè)先用知濃度的抗原制造規(guī)范曲線，便可依沉淀環(huán)直徑測(cè)定待測(cè)抗原濃度。 結(jié)果：陽(yáng)性 白色沉淀環(huán)； 陰性 無(wú) b. 雙向免疫分散(double immunodiffusion)：預(yù)先制備瓊脂板，根據(jù)需求在瓊脂板上打孔，再將抗原、抗體分別參與不同孔內(nèi)，使兩者相互分散，假設(shè)抗原抗體相對(duì)應(yīng)，那么二者在適宜比例處構(gòu)成白色沉淀線。假設(shè)反響中有兩種或兩種以上抗原抗體系統(tǒng)，在瓊脂中即可出現(xiàn)

48、兩條或兩條以上的沉淀線。該方法可用來(lái)分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分，或測(cè)定抗原、抗體提取物的純度。缺陷是所需時(shí)間較長(zhǎng)和靈敏度不高。免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.c. 對(duì)流免疫電泳(Counter immunoelectrophoresis, CIE)：為在雙向瓊脂分散的根底上進(jìn)展電泳的方法。將瓊脂板置于電泳槽內(nèi)，在負(fù)極端孔內(nèi)加抗原，正極端孔內(nèi)加抗體，然后通電?？乖趐H8.6的緩沖液中帶負(fù)電荷，故向正極挪動(dòng)；抗體為大分子球蛋白，挪動(dòng)慢，并受瓊脂電滲影響由正極向負(fù)極挪動(dòng)，在兩者相遇的適宜比例處出現(xiàn)白色沉淀線。因該法使抗原抗體相向而行，提高了敏感性，缺陷是多組抗原抗體存在時(shí)沉淀線易重疊在一同，缺乏分辨力。免疫運(yùn)

49、用：免疫學(xué)方法.三補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)1. 定義：有補(bǔ)體參與，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素作指示系統(tǒng)的抗原抗體反響2. 組成：有2個(gè)系統(tǒng)共5種成分 1) 檢測(cè)系統(tǒng)：包括知抗原(或抗體)和待測(cè)抗體(或抗原) 2) 指示系統(tǒng)：包括綿羊紅細(xì)胞和溶血素(綿羊紅細(xì)胞的特異性抗體) 3) 補(bǔ)體：取自豚鼠的新穎血清3. 補(bǔ)體結(jié)合反響的根本原理 1) 補(bǔ)體可與任何抗原抗體復(fù)合物相結(jié)合； 2) 指示系統(tǒng)遇補(bǔ)體后就出現(xiàn)明顯的溶血反響免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.4. 操作過(guò)程和結(jié)果1) 陽(yáng)性反響： + 補(bǔ)體 抗原(體)+待測(cè)抗體(原) 抗原抗體復(fù)合物 抗原抗體和補(bǔ)體復(fù)合物 + 指示系統(tǒng)(綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物) 結(jié)果：因此時(shí)無(wú)游離的補(bǔ)

50、體與指示系統(tǒng)結(jié)合不發(fā)生溶血2) 陰性反響： + 補(bǔ)體抗原(體)+待測(cè)抗體(原) 抗原+抗體 抗原+抗體+補(bǔ)體(游離) + 指示系統(tǒng)(綿羊紅細(xì)胞和溶血素復(fù)合物) 發(fā)生溶血 綿羊紅細(xì)胞、溶血素及補(bǔ)體復(fù)合物免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.四 中和反響定義：特異性抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，能抑制抗原的多種生物學(xué)活性如：毒性、酶活性和病毒感染性等的反響。免疫：免疫學(xué)方法及其運(yùn)用.四、現(xiàn)代免疫標(biāo)志技術(shù)immunolabelling technique 定義：將抗原或抗體用熒光素、酶、放射性同位素或電子致密物質(zhì)等加以標(biāo)志，以提高抗原抗體反響以及抗原或抗體檢測(cè)靈敏度的一類(lèi)新技術(shù)。免疫標(biāo)志技術(shù)敏感性高、特異性強(qiáng)、運(yùn)用范圍廣

51、(抗原或抗體定量、定性、定位)一免疫熒光技術(shù)immunofluorecence technique1. 定義：用熒光物標(biāo)志抗體來(lái)檢測(cè)細(xì)胞或組織中相應(yīng)抗原或抗體的技術(shù)，又稱(chēng)熒光抗體技術(shù)。2. 熒光物種類(lèi)：異硫氰酸熒光素、羅丹明熒光素、二氯三嗪基氨基熒光素等3. 種類(lèi)：包括直接法、間接法和補(bǔ)體法免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.例：直接法：將待測(cè)標(biāo)本固定于玻片外表，滴加知熒光抗體后再以緩沖液沖洗，枯燥后于熒光顯微鏡下察看。 (1) 過(guò)程： +待測(cè)抗原 熒光素+抗體 熒光抗體 (一段時(shí)間后沖洗) 熒光鏡檢測(cè)結(jié)果： (2) 結(jié)果：陽(yáng)性 可見(jiàn)帶熒光的抗原抗體復(fù)合物； 陰性 無(wú)熒光 (由于帶熒光的抗體不能與抗原結(jié)合，

52、被沖洗掉) (3) 用途：用以檢測(cè)病毒感染細(xì)胞、細(xì)菌和堆積于組織中的免疫復(fù)合物等。 (4) 特點(diǎn)：簡(jiǎn)單、特異性高；敏感性低、同時(shí)檢測(cè)多種抗原時(shí)較復(fù)雜。免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.(二)免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic technique) or 酶免疫測(cè)定1. 定義：用酶標(biāo)志抗體或抗原來(lái)檢測(cè)抗原或抗體的方法.運(yùn)用范圍極廣。2. 顯示方法：用酶的特殊底物來(lái)處置反響后的標(biāo)本，經(jīng)過(guò)酶催化底物的顯色反響來(lái)測(cè)定抗原或抗體的存在。以酶標(biāo)依作定量或定性分析。3. 標(biāo)志酶：辣根過(guò)氧化物酶HRP和堿性磷酸酶；它們與抗原或抗體結(jié)合后活性不受影響。4. 底物：鄰苯二胺和對(duì)硝基苯磷酸酯。5. 特點(diǎn)：敏感性高、特異

53、性強(qiáng)，既可定性又可定量。6. 常用方法：目前運(yùn)用最多的為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)enzyme linked immusorbent assay, ELISA) ：是利用抗原或抗體能非特異性吸附于聚苯乙烯等固相載體外表的特性，使抗原-抗體反響在固相載體外表進(jìn)展的一種免疫酶技術(shù)。它目前包括直接法、間接法、雙抗體夾心法、雙夾心法、抗原競(jìng)爭(zhēng)法、抑制性測(cè)定法和橋聯(lián)法等多種。免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.例1. 直接法：用于檢測(cè)抗原或抗體特別是總抗體濃度a. 用于檢測(cè)抗原時(shí)：以不同稀釋毒的待測(cè)樣品(Ag)包被酶標(biāo)板反響板，孵育后洗滌封鎖酶標(biāo)板，孵育后洗滌參與酶標(biāo)抗體，孵育后洗滌參與底物，測(cè)定酶促反響強(qiáng)度。b.用于檢測(cè)抗體

54、待測(cè)樣品中的總抗體時(shí)：以不同稀釋毒的待測(cè)樣品(Ab)包被酶標(biāo)板反響板，孵育后洗滌封鎖酶標(biāo)板，孵育后洗滌參與酶標(biāo)抗抗體，孵育后洗滌參與底物，測(cè)定酶促反響強(qiáng)度。 免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.例2. 雙抗體夾心法：主要用于測(cè)定大分子抗原過(guò)程：以純化的特異性抗體或含抗體的血清包被酶標(biāo)反響板，孵育后洗滌封鎖液封鎖酶標(biāo)板，孵育后洗滌參與待測(cè)樣品，孵育后洗滌參與酶標(biāo)抗體，孵育后洗滌參與酶底物，測(cè)定酶促反響強(qiáng)度。 加待測(cè)抗原 加酶標(biāo)抗體 知抗體吸附 抗原抗體復(fù)合物 酶聯(lián)抗體抗原抗體復(fù)合物免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.三放射免疫測(cè)定技術(shù) (Radioimmunoassay, RIA) 1. 定義：用放射性同位素標(biāo)志來(lái)檢測(cè)抗原

55、抗體反響的高靈敏度的技術(shù)。2. 原理與方法：其根本原理為：待測(cè)抗原和標(biāo)志抗原對(duì)有限量抗體存在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合： Ag* + Ab Ag*-Ab；Ag + Ab Ag-Ab (1) 抗原用同位素(如131I、3H等) 標(biāo)志后仍能與相應(yīng)抗體特異性結(jié)合； (2) 將兩類(lèi)抗原與抗體混合后，兩類(lèi)抗原均能與抗體結(jié)合，當(dāng)Ag*和Ab數(shù)量恒定，且Ag*與Ag之和大于Ab上結(jié)合點(diǎn)數(shù)目時(shí)， Ag*與Ag 存在競(jìng)爭(zhēng)抑制：Ag數(shù)量添加，Ab-Ab生成量添加， Ag*-Ab數(shù)量就減少，游離的Ag*就增多。 (3) 用層析等方法將Ag*-Ab和Ag-Ab復(fù)合物(B)與游離Ag*和Ag (F)分別，測(cè)定B和F的放射活性。計(jì)算B/

56、F值，繪制B/F和Ag量的關(guān)系曲線圖。 (4) 預(yù)先用一系列知濃度的未標(biāo)志抗原和一定量的標(biāo)志抗原及抗體混合，以一樣方法繪制B/F和Ag量的關(guān)系的規(guī)范競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線圖。 (5) 實(shí)驗(yàn)時(shí)，在同樣條件下，根據(jù)待測(cè)Ag的放射性結(jié)合率，依規(guī)范曲線查出Ag量。免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.四熒光和化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù) A. 熒光免疫技術(shù)1. 定義：用熒光素如異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明和四甲基異硫氰酸羅丹明標(biāo)志來(lái)檢測(cè)抗原抗體反響的免疫分析技術(shù)。2. 種類(lèi)：包括熒光免疫組織化學(xué)(如熒光抗體)技術(shù)和熒光免疫測(cè)定。B. 發(fā)光免疫分析定義：利用物質(zhì)的發(fā)光特征(如輻射光波長(zhǎng)、發(fā)光的光子數(shù))與產(chǎn)生輻射的物質(zhì)分子的構(gòu)造常數(shù)、構(gòu)型、數(shù)

57、量等親密相關(guān)，經(jīng)過(guò)受激分子發(fā)射的光譜，發(fā)光衰減常數(shù)、發(fā)光方向等來(lái)判別該分子的屬性；經(jīng)過(guò)發(fā)光強(qiáng)度來(lái)判別物質(zhì)的量的免疫分析技術(shù)。免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.五免疫電鏡技術(shù)1. 定義：在堅(jiān)持抗體免疫性的前提下，用高電子密度的標(biāo)志物如鐵蛋白、金等，或用經(jīng)細(xì)胞化學(xué)方法處置使電子密度增高的標(biāo)志物如辣根過(guò)氧化物酶等酶類(lèi)標(biāo)志抗體后，將標(biāo)志抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合，然后用電子顯微鏡察看的技術(shù)。又稱(chēng)電子顯微鏡免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。 2. 種類(lèi)： (1) 非包埋法免疫染色：該法是以超薄冷凍切片免疫染色。因該法不經(jīng)脫水和包埋等步驟，抗原維護(hù)較好，且有利于免疫試劑在組織中的浸透；但在技術(shù)上困難較多，需配制公用設(shè)備。 (2) 包埋前免疫

58、染色：組織固定 厚切片免疫染色 包埋 超薄切片 投射電鏡察看。 (3) 包埋后免疫染色：組織固定 包埋超薄切片免疫染色 EM察看。免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法.免疫運(yùn)用：免疫學(xué)方法第五節(jié) 免疫學(xué)原理在魚(yú)蝦病害防治中的運(yùn)用一、用于疾病的診斷 免疫診斷方法有二類(lèi)1.用知抗原診斷病原：用知抗原與從患病動(dòng)物中提取的抗體進(jìn)展血清學(xué)反響，以確定病原種類(lèi)。該法只能用于病體已產(chǎn)生抗體的診斷。2.用知抗體診斷病原：將知抗體與從病體中分別的病原進(jìn)展血清學(xué)反響，以確定病原的種類(lèi)，該法適于一切被診斷動(dòng)物。診斷方法特點(diǎn)抗體檢測(cè)量應(yīng)用范圍血清中和試驗(yàn)靈敏度高，費(fèi)時(shí)10-3g/ml病毒病沉淀反應(yīng)方便可靠，靈敏度低20細(xì)菌病補(bǔ)體結(jié)合

59、試驗(yàn)靈敏度高，存在干擾10-1細(xì)菌病凝集反應(yīng)快速準(zhǔn)確，應(yīng)用局限310-2部分細(xì)菌病免疫熒光快速方便，需特殊儀器20細(xì)菌病放射免疫測(cè)定快速靈敏，需特殊儀器10-3病毒病ELISA快速靈敏，應(yīng)用前景好10-3細(xì)菌病.二、用于疾病的治療 利用被動(dòng)免疫，即給患病動(dòng)物接種抗體進(jìn)展應(yīng)急治療。過(guò)程：先將抗原疫苗注入同種或其他種動(dòng)物機(jī)體，1-4周后從接種動(dòng)物的血液等部位提取抗體或制備卵黃抗體，并將提取的抗體接種到患病動(dòng)物中進(jìn)展疾病治療。三、用于疾病的預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物免疫最重要的運(yùn)用方向?yàn)檠兄埔呙邕M(jìn)展疾病的預(yù)防在水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物中，由于只需魚(yú)類(lèi)、兩棲類(lèi)和爬行類(lèi)等脊椎動(dòng)物 才干在接種抗原后產(chǎn)生抗體，目前因此也以為只需這些

60、動(dòng)物才干用免疫學(xué)方法進(jìn)展疾病的預(yù)防。免疫：免疫學(xué)原理的運(yùn)用.一魚(yú)用疫苗的種類(lèi) A. 根據(jù)疫苗的獲得方法來(lái)分： 1. 死疫苗(滅活疫苗)：熱滅活、化學(xué)滅活、紫外線滅活、超聲滅活等 優(yōu)點(diǎn)：平安性好，制造簡(jiǎn)單； 缺陷：免疫劑量大，免疫耐久性差。 2. 活疫苗：包括弱毒疫苗和異種疫苗 優(yōu)點(diǎn)：弱毒疫苗 免疫原性好，免疫劑量少，繼續(xù)時(shí)間長(zhǎng) 異種疫苗 平安性好，免疫時(shí)間長(zhǎng)。 缺陷：弱毒疫苗 平安性差 異種疫苗 獲得比較困難 3. 化學(xué)疫苗：以化學(xué)方法提取病菌有效成分(如LPS)制成 優(yōu)點(diǎn)：免疫劑量小，免疫原性強(qiáng)，作用穩(wěn)定； 缺陷：制造較復(fù)雜，本錢(qián)稍高。免疫：免疫學(xué)原理的運(yùn)用. 4. 亞單位疫苗：病原微生物中