1、常用化學(xué)藥品檢驗方法檢驗儀器的使用 化學(xué)藥品檢驗室內(nèi)容：高效液相色譜儀器（高效液相）色譜理論滴定分析法高效液相色譜儀一、結(jié)構(gòu)示意圖.二、部件介紹一般由輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成?，F(xiàn)在的儀器還一般配置有在線脫氣機、自動進(jìn)樣器、柱溫箱等。制備型HPLC儀還配備有自動餾分收集裝置。泵恒壓泵、恒流泵。恒流泵按結(jié)構(gòu)又可分為螺旋注射泵、柱塞往復(fù)泵和隔膜往復(fù)泵。目前應(yīng)用的基本上是柱塞往復(fù)泵。（單元泵、四元泵、高壓二元泵）柱塞往復(fù)泵使用時的注意事項：1 防止固體微粒進(jìn)入泵體造成磨損。2 流動相不應(yīng)含有對泵體造成腐蝕的化學(xué)物質(zhì)。3 泵空轉(zhuǎn)也會磨損柱塞，防止流動相跑空。4 壓力過高會

2、使密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。5 防止流動相中析出鹽晶，應(yīng)開啟柱塞沖洗功能。進(jìn)樣器主要部件為定量環(huán)及六通閥。使用時應(yīng)注意：1 樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45m濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損2 進(jìn)樣量應(yīng)不大于定量環(huán)體積的50% 3 每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥，現(xiàn)在大部分進(jìn)樣器能自動實現(xiàn)此功能。部分自動進(jìn)樣器還能實現(xiàn)柱前衍生化等操作。（Agilent）色譜柱色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好、分析速度快等。使用色譜柱時應(yīng)注意事項：1 避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。 2 應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然? 一般不能反沖，否則會迅速降低柱效

3、。4 使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。5 流動相應(yīng)先脫氣，避免氣泡進(jìn)入柱體。 6 測試基質(zhì)復(fù)雜的樣品時，應(yīng)用保護(hù)柱。7 定期用強溶劑沖洗色譜柱，清除駐留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。8 保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇后塞緊。 高效液相色譜的主要類型及其分離原理類型（按固定相分子聚集狀態(tài)和分離機制分）： 分配色譜(液-液色譜)；吸附色譜(液-固色譜)；離子交換色譜；空間排阻色譜；親和色譜等。一、液-液色譜（一）反相鍵合相色譜 化學(xué)鍵合相：利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團鍵合在載體表面 特點： 不易流失 熱穩(wěn)定性好 化學(xué)性能好 載樣量大 適于梯度洗脫 1分離機制：分配 + 吸附疏溶劑理論 流動

4、相與溶質(zhì)排斥力越強，作用時間 ， k，組分tR流動相與溶質(zhì)排斥力越弱，作用時間， k，組分tR2固定相：極性小的烷基鍵合相 C8柱，C18柱（十八烷基Octadecylsilyl，簡稱ODS ） 3流動相：極性大的甲醇-水或乙腈-水 流動相極性 固定相極性 （RP） 底劑+ 有機調(diào)節(jié)劑（極性調(diào)節(jié)劑） 例：水（緩沖鹽溶液） + 甲醇，乙腈，THF4流動相極性與k的關(guān)系： 流動相極性，洗脫能力，k，組分tR5出柱順序：極性大的組分先出柱 極性小的組分后出柱6適用：非極性中等極性組分（二）正相鍵合相色譜1分離機制：溶質(zhì)分子與固定相之間定向作用力、 誘導(dǎo)力、或氫鍵作用力（有分配和吸附兩種說法）2固定相

5、：極性大的氰基、氨基、二氨基、芳硝基等鍵合相3流動相：極性?。ㄍ琇SC） 底劑 + 有機極性調(diào)節(jié)劑 例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇4流動相極性與k的關(guān)系： 流動相極性，洗脫能力，組分tR，k5出柱順序：結(jié)構(gòu)相近組分，極性小的組分先出柱極性大的組分后出柱6適用： 氰基鍵合相與硅膠的柱選擇性相似（極性稍?。?，分離物質(zhì)也相似 氨基鍵合相與硅膠性質(zhì)差別大，堿性，分析極性大物質(zhì)、酚、羧酸、核苷酸、糖類、氨基酸等（也可用作反相固定相，氨基柱不能用于分離甾酮、還原糖）二.液-固色譜法（或液-固吸附色譜法）1.特點：流動相為液體，固定相為吸附相。2.分離機制： Xm + nSa = Xa + nSm

6、K = XaSmn / XmSan3.結(jié)論： 顯然，分配系數(shù)大的組分，吸附劑對它的吸附力強，保留值就大。4.作用：a.適用分離相對分子質(zhì)量中等油性試樣。 b.對具有不同官能團的化合物和異構(gòu)體有較高的選擇性。 缺點：由于非線性等溫吸附常引起峰的拖尾現(xiàn)象。 三.離子交換色譜法 1.分離機制；離子與離子之間的電荷吸引力 2.適用范圍；凡能在溶劑中電離的物質(zhì)一般均可用該法進(jìn)行分離。 3.交換：KX = - NR4+X-Cl- / - NR4+Cl-X- DX =- NR4+X-/X-= KX- NR4+Cl-/Cl- 4.結(jié)論：a.分配系數(shù)D愈大，表示溶質(zhì)的離子與離子交換劑的相互作用愈強。 b.親合力

7、高的，在柱中保留值就愈大。 5.應(yīng)用：a.分離離子或可離解的化合物。 b.主要用于分析有機酸、氨基酸、核酸、多肽等。離子對色譜法 1.特點：分離效能高，分析速度快，操作簡便. 2.分離機制：又稱偶離子色譜法，是液液色譜法的分支。它是根據(jù)被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。 3.分離過程： X+水相 + Y水相 X+Y水相 KXY= X+Y 有機相 / X+ 水相 Y 水相 DX = X+Y 有機相 / X+水相 = KXY Y 水相 4. a.可用C18、C8等常用色譜柱； b.庚烷磺酸鈉等離子對試劑價格貴. 5.應(yīng)用：解決了

8、以往難分離混合物的分離問題.主要用于分析離子強度大的酸堿物質(zhì)。（三聚氰胺） 離子對色譜分離過程示意圖 四、離子色譜法 1.固定相:離子交換樹脂，常用苯 乙烯與二乙烯交聯(lián)形成的聚合物骨 架，在表面未端芳環(huán)上接上羧基、 磺酸基（稱陽離子交換樹脂）或季 銨基（陰離子交換樹脂）。 流動相:電解質(zhì)溶液 檢測器:電導(dǎo)檢測器，安培 主配件：抑制柱 2. 流程圖：fig3-2 3.分類 a.雙柱型：化學(xué)抑制型離子色譜法； b.單柱型：非抑制型，用低電導(dǎo)的洗脫液；4.分離機制 （陰離子為例） 被分離組分在色譜柱上分離原理是樹脂上可電離離子與流動相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進(jìn)行可逆交換，根據(jù)各離子與離子

9、交換基團具有不同的電荷吸引力而分離。5.應(yīng)用： 從無機和有機陰離子到金屬陽離子，從有機陽離子到糖類、氨基酸、多肽、核酸等均可用該法分析。離子色譜中發(fā)生的基本過程就是離子交換，因此，離子色譜本質(zhì)上就是離子交換色譜。在離子色譜的基本組成中，重要的和與其他高效液相色譜不同的就是抑制器和電導(dǎo)檢測器，離子色譜用的泵是PEEK材料襯里的不銹鋼泵。藥典品種應(yīng)用離子色譜法：陽離子交換柱山梨醇及制劑甘油果糖氯化鈉注射液甘露醇及制劑利巴韋林及制劑鹽酸二甲雙胍及制劑蘋果酸及制劑富馬酸及制劑陰離子交換柱肝素鈉及制劑帕米磷酸二鈉及制劑氯膦酸二鈉及制劑硫酸軟骨素鈉及制劑色譜柱類型品種個數(shù)陽離子交換柱23個陰離子交換柱14

10、個五、空間排阻色譜法 1.固定相：凝膠 2.機制：類似于分子篩作用，分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流體力學(xué)體積和分子大小有關(guān). 3.分離示意圖，fig3-3 a.排斥極限A點; b.全滲透極限B點 相對分子質(zhì)量介于上述兩個極限之間的化合物，將按相對分子質(zhì)量降低的次序被洗脫. 4.常用于分離高分子化合物，如組織提取物、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。 常壓凝膠色譜頭孢尼西鈉頭孢唑肟鈉阿莫西林注射用頭孢尼西鈉注射用頭孢唑肟鈉阿莫西林膠囊頭孢他啶頭孢唑林鈉青霉素V鉀注射用頭孢他定注射用頭孢唑林鈉青霉素V鉀膠囊頭孢曲松鈉頭孢替唑鈉青霉素鈉注射用頭孢曲松鈉注射用頭孢替唑鈉注射用青霉素鈉頭孢呋辛鈉頭孢噻吩鈉青霉素鉀

11、注射用頭孢呋辛鈉注射用頭孢噻吩鈉注射用青霉素鉀頭孢拉定頭孢噻肟鈉苯唑西林鈉頭孢哌酮鈉注射用頭孢噻肟鈉注射用苯唑西林鈉注射用頭孢哌酮鈉阿洛西林鈉美洛西林鈉氯唑西林鈉注射用阿洛西林鈉注射用美洛西林鈉注射用氯唑西林鈉普魯卡因青霉素磺芐西林鈉注射用普魯卡因青霉素注射用磺芐西林鈉2010版藥典二部采用常壓凝膠色譜的品種門冬酰胺酶（埃希）分子量500060000色譜親水改性硅膠,UV,純度門冬酰胺酶（歐文）分子量500060000色譜親水改性硅膠,UV,純度注射用門冬酰胺酶（埃希）分子量500060000色譜親水改性硅膠,UV,純度注射用門冬酰胺酶（歐文）分子量500060000色譜親水改性硅膠,UV,純

12、度抑肽酶親水的改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)注射用抑肽酶親水的改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)烏司他丁親水改性硅膠，有關(guān)物質(zhì)烏司他丁溶液親水改性硅膠，有關(guān)物質(zhì)胰島素親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)中性胰島素注射液親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)精蛋白鋅胰島素注射液親水改性硅膠，高分子蛋白質(zhì)2010版藥典二部采用高效凝膠色譜的品種右旋糖酐20親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐20葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐20氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐40氯化鈉注射液

13、親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70葡萄糖注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐70氯化鈉注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐鐵親水性球形高聚物，分子量與分子量分布右旋糖酐鐵注射液親水性球形高聚物，分子量與分子量分布頭孢地嗪鈉球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量100010000），有關(guān)物質(zhì)注射用頭孢地嗪鈉球狀蛋白色譜用親水硅膠（分子量100010000），有關(guān)物質(zhì)2010版藥典二部采用高效凝膠色譜的品種19世紀(jì)70年代中期，HPLC儀開始出現(xiàn)，主要填料：10 m 的無定型硅膠顆粒。70年代后期，發(fā)展了反相液相色譜

14、。80年代，HPLC 被廣泛應(yīng)用于化合物的分離，主要填料：粒徑為5 10 m 球形硅膠。90年代早期，粒徑為 5 m 的高純硅膠，即所謂的 B 型硅膠被發(fā)展，并成為這個行業(yè)填料的標(biāo)準(zhǔn)，這種 B 型硅膠含有微量的金屬。90年代后期，為了滿足快速分離的需求，發(fā)展了 3 m 或 3.5 m 的球形硅膠，其作用和性能逐漸的獲得了人們的認(rèn)同和接受。手性色譜柱的開發(fā)。21世紀(jì)早期，為適應(yīng)超快速的分離要求，粒徑小于 2 m 的填料被開發(fā)出來，發(fā)展出了整體柱、無機和有機雜化硅膠。目前，市場上流行的分析用的 HPLC 硅膠基質(zhì)填料主要為 B 型硅膠。填料發(fā)展史無定形硅膠和鍵合相硅膠示意圖：填料發(fā)展史色譜法的應(yīng)用

15、：液相色譜常用檢測器光學(xué)檢測器：紫外、熒光、示差折光、蒸發(fā)光散射（通用型檢測器）電化學(xué)檢測器：極譜、庫侖、安培電學(xué)檢測器：電導(dǎo)、介電常數(shù)質(zhì)譜檢測器選擇性檢測器：靈敏度較高檢測器類型品種個數(shù)紫外檢測器1333個蒸發(fā)光散射檢測器28個示差檢測器10個電導(dǎo)檢測器5個2010版藥典二部采用檢測器情況色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器優(yōu)點：適用于沒有特征紫外吸收或紫外吸收很弱的待測物，使用UV時靈敏度更低；無需衍生化而直接測定，避免了衍生帶來的誤差?？梢詰?yīng)用有強紫外吸收的試劑，如氯仿、丙酮等。適用于組分復(fù)雜樣品的分析，可以進(jìn)行梯度洗脫，基線平穩(wěn)。通用型檢測器，只要待測物揮發(fā)性低于溶劑，即可適用。對不同物質(zhì)，

16、ELSD相應(yīng)因子的變化比其它檢測器要小得多。對環(huán)境影響不靈敏，室溫下即可操作。沒有溶劑前緣峰，適用于保留時間短的物質(zhì)的檢測。與LC-MS的色譜條件一致，可直接進(jìn)行方法轉(zhuǎn)換。色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器影響ELSD響應(yīng)的因素載氣流速、霧化器設(shè)計與溫度、流動相的組成和流速等影響霧化過程。被分析物的濃度和體積質(zhì)量決定了進(jìn)入光散射池的氣溶膠中的顆粒的直徑。被分析物的折射指數(shù)、光源發(fā)出的光的強度和波長、光電倍增管的位置等影響散射光強度。光電倍增管的靈敏度和入射光的強度決定了檢測的效率，反映為實驗者所觀測的峰面積。2010版藥典二部應(yīng)用蒸發(fā)光散射檢測器的品種妥布霉素硫酸慶大霉素妥布霉素滴眼液硫酸慶大霉素

17、注射液硫酸妥布霉素注射液硫酸奈替米星硫酸小諾霉素硫酸奈替米星注射液硫酸小諾霉素口服溶液硫酸依替米星硫酸小諾霉素片硫酸依替米星注射液硫酸小諾霉素注射液注射用硫酸依替米星硫酸巴龍霉素硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素注射用硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素注射液硫酸鏈霉素硫酸卡那霉素滴眼液注射用硫酸鏈霉素注射用硫酸卡那霉素大豆磷脂硫酸西索米星膽固醇硫酸西索米星注射液蛋黃卵磷脂色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器圖 硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：65，分流模式） 總雜質(zhì)：5.26%色譜法的應(yīng)用：蒸發(fā)光散射檢測器圖 硫酸核糖霉素有關(guān)物質(zhì)色譜圖（蒸發(fā)管溫度：110，不分流模式）總雜質(zhì)：4.18%蒸發(fā)光散射檢測器應(yīng)用要點

18、：謹(jǐn)慎使用，充分優(yōu)化實驗條件。企業(yè)質(zhì)控人員和藥檢所人員均需要。漂移管溫度的優(yōu)化：溫度對響應(yīng)值的影響無明顯的規(guī)律性。最優(yōu)溫度為在流動相基本揮發(fā)的基礎(chǔ)上，產(chǎn)生可接受噪音的最低溫度。霧化氣流速的優(yōu)化：流速越大，響應(yīng)值越低。最優(yōu)氣體流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上，產(chǎn)生最大檢測響應(yīng)值的最低氣體流速。色譜法的應(yīng)用：示差折光檢測器原理：連續(xù)測定流通池中溶液折射率來測定試樣中各組分濃度。優(yōu)點：通用型檢測器缺點：1）對溫度變化敏感 2）對溶劑組成變化敏感，不能用于梯度檢測 3）屬于中等靈敏度的檢測器山梨醇山梨醇注射液甘露醇甘露醇注射液乳果糖口服溶液葡甲胺麥芽糖乳糖倍他環(huán)糊精羥丙基倍他環(huán)糊精色譜法的應(yīng)用：電導(dǎo)檢測器

19、原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中電離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來測定電離物質(zhì)含量。優(yōu)點：對流動相流速和壓力的改變不敏感，可用于梯度洗脫。缺點：對溫度變化敏感（每升高1度，電導(dǎo)率增加2%-2.5%)。廣泛應(yīng)用于離子色譜。主要用于檢測水溶性無機和有機離子。帕米膦酸二鈉注射液注射用帕米膦酸二鈉鹽酸頭孢吡肟注射用鹽酸頭孢吡肟氯膦酸二鈉氯膦酸二鈉注射液氯膦酸二鈉膠囊?guī)追N檢測器主要特性比較表檢測器檢測信號選擇性流速影響檢出限g/ml梯度洗脫UV吸光度有無10-10適宜FD熒光強度有無10-13適宜AD電流有有10-13不宜ELSD散射光強度無10-9適宜RID折光率無無10-7不宜液相色譜法流動相1.重要性：GC載氣僅

20、三四種，要提高柱效選擇性，主要改變固定相的性質(zhì)； LC則不同，當(dāng)固定相選定時，流動相的種類，配比能顯著地影響分離效果，因此流動相的選擇很重要。2.選擇流動相應(yīng)注意的因素3.溶劑的選擇： a. 依據(jù)：溶劑的極性是重要依據(jù)。 b. 溶劑極性順序，水最大，正已烷最小。 c. 采用多元組合溶劑系統(tǒng)作為流動相（底液和洗脫液） d. 根據(jù)不同的方法選擇合適的底液和洗脫液 具體操作時還應(yīng)注意的事項 流動相濾過后，注意觀察有無肉眼能看到的微粒、纖維。有請重新濾過。 開機后把要用到的管路進(jìn)行purge（脫氣）處理。 增加流速應(yīng)以0.1ml/min的增量逐步進(jìn)行，一般不超過 0.5ml/min，反之亦然。否則易使

21、柱床下塌。 裝柱時注意流向，接口處不要留有空隙產(chǎn)生氣泡。 樣品液請注意濾過后進(jìn)樣，注意樣品溶劑的揮發(fā)性。 測定完畢請用（甲醇：水=10:90）沖柱1小時，再用（甲醇：水=90:10）沖柱30分鐘，長時間不用應(yīng)最后再沖15分鐘純甲醇。對于含碳量高、封尾充分的柱，特別注意應(yīng)先用含510%甲醇的水沖洗，再用甲醇沖洗。重溫一下學(xué)校里學(xué)過的色譜理論知識 色譜法中的主要參數(shù)和關(guān)系式分配系數(shù)Kp和容量因子K（1）分配系數(shù)Kp：定溫定壓下物質(zhì)在固定相和流動相中的濃度比。 KPAs / Am （s固定相； m流動相） （2）容量因子K：分配系數(shù)與兩相體積有關(guān)的參數(shù)，表示溶質(zhì)A在兩相中的質(zhì)量比。 K=mAs /

22、mAm =KPVS/Vm 應(yīng)為110.5 兩個組分能完全分開（3）分離度色譜柱的總分離效能指標(biāo) 定義：相鄰兩個峰的保留值之差與兩峰寬度平均值之比式中：分子反映了溶質(zhì)在兩相中分配行為對分離的影響，是色譜分離的熱力學(xué)因素。分母反映了動態(tài)過程溶質(zhì)區(qū)帶的擴寬對分離的影響，是 色譜分離的動力學(xué)因素。從中得到：兩溶質(zhì)保留時間相差越大，色譜峰越窄，分 離越好。a:柱效因子：塔板數(shù)決定，n 越大，柱效越高分離的越好。(色譜柱)分離度與柱效能、選擇性的關(guān)系 b：選擇因子： tR()與tR（1） 相差越大， r2,1越大，分的越好。(樣品)C：容量因子：k大一些對分析有利; 太大，tR長；柱容量合適,分的才好。(

23、流動相) 一般k 色譜法的基本理論 一、塔板理論 色譜技術(shù)發(fā)展的初期，Martin等人把色譜分離過程比作分餾過程，并把分餾中的半經(jīng)驗理論塔板理論用于色譜分析法。 塔板理論把色譜柱比作一個分餾塔，假設(shè)柱內(nèi)有n個塔板，每個塔板高度稱為理論塔板高度，用H表示，在每個塔板內(nèi)，試樣各組分在兩相中分配并達(dá)到平衡，最后，揮發(fā)度大的組分和揮發(fā)度小的組分彼此分離，揮發(fā)度大的最先從塔頂（即柱后）逸出。盡管這個理論并不完全符合色譜柱的分離過程，色譜分離和一般的分餾塔分離有著重大的差別，但是因為這個比喻形象簡明，因此幾十年來一直沿用。一、塔板理論塔板理論公式 H=L/n * n = 5.54 (tR /W h/2)2

24、 =16 (tR/W )2 二、速率理論范第姆特方程 用塔板理論來說明色譜柱內(nèi)各組分的分離過程并不完全合理，因為色譜柱內(nèi)并沒有塔板，當(dāng)同一試樣進(jìn)入同一色譜柱，當(dāng)流動相速度變化時，得到不同的色譜圖。測得的 n（塔板數(shù)） 和 H（柱效） 也不同，充分說明塔板理論不足以說明色譜柱的分離過程。 1956年，荷蘭學(xué)者范第姆特（VanDeomter）提出一個描述色譜柱分離過程中復(fù)雜因素使色譜峰變寬而致柱效降低（即：使 H 增大）影響的方程。此方程經(jīng)簡化后寫為:該式稱為速率方程（范氏方程）。 u為流動相線速度cm.s-1，線速度=柱長/死時間速率理論范第姆特方程 （1）提出了影響的三項因素：A渦流擴散項，B

25、分子擴散項， C傳質(zhì)阻力項。（2）在流動相流速一定時，當(dāng)、最小時，小，n 才最高，柱效高。當(dāng)、最大時，大，n 才最小，柱效低。（1）渦流擴散項A 在填充色譜柱中，當(dāng)組分隨流動相向柱出口遷移時，流動相由于受到固定相顆粒障礙，不斷改變流動方向，使組分分子在前進(jìn)中形成紊亂的類似“渦流”的流動，故稱渦流擴散。 A2dpA與填充物的平均直徑dp的大小和填充不規(guī)則因子有關(guān)。減?。汗潭ㄏ囝w粒應(yīng)適當(dāng)細(xì)小、填充要均勻。 待測組分是以“塞子”的形式被流動相帶入色譜柱的，在“塞子”前后存在濃度梯度，由濃稀方向擴散，產(chǎn)生了縱向擴散，使色譜峰展寬。（2）分子擴散項B/u（縱向擴散項） 由于溶質(zhì)區(qū)帶前后存在著濃度差，因而

26、產(chǎn)生縱向擴散使區(qū)帶（色譜峰）擴寬。由于分子在液體中的擴散速率大約是在氣體中的 1/105，所以該項對液相色譜來說很小，而對氣相色譜則很重要。擴散的嚴(yán)重與否，關(guān)鍵是取決于流動相的線速度。減小縱向擴散項u 采取措施（針對氣相色譜） 適當(dāng)提高流動相流速u，減小保留時間 用相對分子質(zhì)量較大的氣體作流動相。 B2Dg Dg 適當(dāng)降低柱溫c 。（3）傳質(zhì)阻力項Cu 傳質(zhì)阻力系數(shù) C 包括兩部分， g +Cl兩項組成 Cg 流動相傳質(zhì)阻力系數(shù) 組分從流動相移動到固定相表面進(jìn)行兩相之間的質(zhì)量交換時所受到的阻力，質(zhì)量交換慢，引起色譜峰變寬。g Cl 固定相傳質(zhì)阻力系數(shù) 即組分從兩相界面移動到固定相內(nèi)部，達(dá)分配平

27、衡后，又返回到兩相界面，在這過程中所受到的阻力為固定相傳質(zhì)阻力。2組分在固定相中擴散系數(shù)固定液膜厚度減小采取措施： 采用粒度小的填充物； Dl越大越好，增加柱溫是提高Dl的方法之一。 液相色譜條件的試驗評價基線柱效分離度峰的對稱性（T、S、AS）結(jié)果的重復(fù)性（RSD）系統(tǒng)適用性試驗 系統(tǒng)適用性試驗是在正式檢測之前進(jìn)行預(yù)試驗，對目前實驗條件所產(chǎn)生的分離效果及測定結(jié)果進(jìn)行評價，確認(rèn)儀器狀態(tài)及實驗條件達(dá)到一定要求后才可進(jìn)行有效的測定。 如系統(tǒng)適用性試驗達(dá)不到要求，應(yīng)對條件進(jìn)行調(diào)整使最終符合要求。 藥典正文給出的條件，在不改變性質(zhì)的基礎(chǔ)上可按具體實驗情況作出適當(dāng)?shù)恼{(diào)整, 以符合系統(tǒng)適用性試驗的要求。

28、代表性質(zhì)的有：色譜柱的填體，流動相的成份，檢測波長等。 常作出調(diào)整的有：流速，流動相中水相與有機相的配比等。 測定精度的控制1.儀器狀態(tài)良好, 通過檢定/校準(zhǔn) a.基線 b.流速穩(wěn)定性 c.最低檢測限 d.結(jié)果重現(xiàn)性2.色譜柱狀態(tài)良好3.流動相的配制 試藥選用化學(xué)純以上, 最好是分析純, 水用重蒸餾水, 有機溶劑選用符合色譜要求的試劑，流動相用前經(jīng)脫氣處理。4.合理設(shè)定參數(shù)；5.符合系統(tǒng)適用性試驗要求；6.溶液配制按容量分析要求, 并注意溶液的穩(wěn)定性；7.用外標(biāo)法測定時儀器最好配有定量環(huán)或自動進(jìn)樣, 沒有配備的儀器最好選用內(nèi)標(biāo)法；8.適當(dāng)?shù)谋Ａ魰r間； 9.其他 開頭幾份結(jié)果一般不要；對供試品色

29、譜圖不完全了解之前應(yīng)先走一份時間較長的圖譜；進(jìn)行雙份平行試驗。滴定分析法 滴定分析是化學(xué)分析中的一類重要的分析方法。此類分析方法是將一種已知濃度的液體即滴定溶液用滴定管加到被測物質(zhì)的溶液中，直到所加滴定液和被測組分按化學(xué)計量反應(yīng)完全為止。優(yōu)點：精密度和準(zhǔn)確度高，操作簡便，至今仍是組分單一原料藥含量測定的首選方法；快速經(jīng)濟、儀器簡單。缺點：專屬性不足，對組分較多的制劑，需較繁瑣的前處理，可損失一定的精密度和準(zhǔn)確度。滴定分析法 滴定分析應(yīng)符合以下條件：-a、反應(yīng)應(yīng)朝一個方向完全進(jìn)行（完全、99.9%）；-b、反應(yīng)嚴(yán)格按化學(xué)計量式進(jìn)行；-c、反應(yīng)迅速，必要時通過加熱或加催化劑等方法加速反應(yīng)；-d、共

30、存物不得干擾測定，或能用適當(dāng)方法消除；-e、確定等當(dāng)點的方法簡單靈敏；-f、標(biāo)化滴定液所用基準(zhǔn)物質(zhì)易得，且符合純度高、組分恒定且與化學(xué)式符合、性質(zhì)穩(wěn)定（標(biāo)化時無副反應(yīng)）等。滴定分析法分類根據(jù)化學(xué)反應(yīng)不同 - 分酸堿滴定、沉淀滴定、絡(luò)合滴定、氧化還原滴定；按滴定方式 - 分直接滴定和剩余滴定（也稱回滴定、間接滴定）。滴定分析法操作注意事項滴定液消耗體積：若使用50ml滴定管，最好在3040ml范圍內(nèi)；用25ml滴定管，最好在2025ml范圍內(nèi)，減少讀數(shù)引起得相對誤差。如：滴定管體積讀數(shù)誤差一般認(rèn)為是0.02ml，如果消耗滴定液體積為10ml，則其相對誤差為0.02101000.2%；體積為20m

31、l，其相對誤差為0.1%。滴定速度：不可過快，每秒放出34滴為宜，即“成滴不成串”，過快液體來不及自管壁流下而致讀數(shù)不準(zhǔn)，滴定至近終點時，速度要更慢，懸掛在滴定管尖端的液滴必須與錐形瓶壁接觸使之落下并用洗瓶沖洗錐形瓶壁。滴定管內(nèi)壁應(yīng)潔凈：以不掛水珠為宜，用前用滴定液少許沖洗23次。滴定分析法操作注意事項儀器要求：所用容量儀器均應(yīng)符合計量要求，用于原料藥含量、仲裁品種、邊緣品種等測定時，應(yīng)使用帶校正值的容量儀器。其校正值與標(biāo)示值之比的絕對值大于0.05%時，應(yīng)在計算中采用校正值予以補償。溫度要求：對某些熱膨脹系數(shù)大的滴定液如高氯酸滴定液，滴定溫度與標(biāo)化溫度不一致時，如溫度相差在10以下，高氯酸滴

32、定液的濃度應(yīng)進(jìn)行必要的校正，溫度相差超過10，應(yīng)重新標(biāo)定。滴定液濃度要求： F值應(yīng)在0.951.05之間 F =實際濃度/理論濃度滴定分析法計算直接滴定法 -原料： （空白） 100 含量%= (T為滴定度）1000 （1-干燥失重%）-片劑、膠囊等： （空白）W平均 100 含量%= 標(biāo)示量 -液體制劑： （空白）100 含量%= V標(biāo)示量 關(guān)于剩余滴定 的計算 （F1V1-F2V2）T 100含量%= W從上式可以看出，剩余滴定中，需要用到兩種準(zhǔn)確標(biāo)定的滴定液，較麻煩如做空白試驗，第一種滴定液則無需準(zhǔn)確標(biāo)定，只要標(biāo)定第二種滴定液。例如：甘磷酰芥的含量測定： 取本品約0.2g(W)精密稱定精

33、密加入硝酸銀滴定液(0.1mol/L)15ml加硫酸鐵銨指示液2ml，用硫氰酸銨滴定液(0.lmol/L)滴定,并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每lml的硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于19.61 mg的C12H24N305P。 設(shè)：硝酸銀滴定液(0.1mol/L)濃度的F值為F1，精密加入為V1ml 硫氰酸銨滴定液(0.1molol/L)濃度的F值為F2 樣品消耗硫氰酸銨滴定液0.1mol/L為V2ml 空白消耗硫氰酸氨滴定液0.lmol/Ld為V3ml關(guān)于剩余滴定 的計算 (F1V1-F2V2)-(F1V1-F2V3)T100含量%= W (F2V3-F2V2) T100 = W F2

34、(V3-V2) T100 = W謝謝大家?。ǖ?4講）考場作文開拓文路能力分解層次(網(wǎng)友來稿)江蘇省鎮(zhèn)江中學(xué) 陳乃香說明：本系列稿共24講，20XX年1月6日開始在資源上連載【要義解說】文章主旨確立以后，就應(yīng)該恰當(dāng)?shù)胤纸鈱哟?，使幾個層次構(gòu)成一個有機的整體，形成一篇完整的文章。如何分解層次主要取決于表現(xiàn)主旨的需要?！静呗越庾x】一般說來，記人敘事的文章常按時間順序分解層次，寫景狀物的文章常按時間順序、空間順序分解層次；說明文根據(jù)說明對象的特點，可按時間順序、空間順序或邏輯順序分解層次；議論文主要根據(jù)“提出問題分析問題解決問題”順序來分解層次。當(dāng)然，分解層次不是一層不變的固定模式，而應(yīng)該富于變化。文

35、章的層次，也常常有些外在的形式：1小標(biāo)題式。即圍繞話題把一篇文章劃分為幾個相對獨立的部分，再給它們加上一個簡潔、恰當(dāng)?shù)男?biāo)題。如世界改變了模樣四個小標(biāo)題：壽命變“長”了、世界變“小”了、勞動變“輕”了、文明變“綠”了。 2序號式。序號式作文與小標(biāo)題作文有相同的特點。序號可以是“一、二、三”，可以是“A、B、C”，也可以是“甲、乙、丙”從全文看，序號式干凈、明快；但從題目上看，卻看不出文章內(nèi)容，只是標(biāo)明了層次與部分。有時序號式作文，也適用于敘述性文章，為故事情節(jié)的展開，提供了明晰的層次。 3總分式。如高考佳作人生也是一張答卷。開頭：“人生就是一張答卷。它上面有選擇題、填空題、判斷題和問答題，但它

36、又不同于一般的答卷。一般的答卷用手來書寫，人生的答卷卻要用行動來書寫?！敝黧w部分每段首句分別為：選擇題是對人生進(jìn)行正確的取舍，填空題是充實自己的人生，判斷題是表明自己的人生態(tài)度，問答題是考驗自己解決問題的能力。這份“試卷”設(shè)計得合理而且實在，每個人的人生都是不同的，這就意味著這份人生試卷的“答案是豐富多彩的”。分解層次，應(yīng)追求作文美學(xué)的三個價值取向：一要勻稱美。什么材料在前，什么材料在后，要合理安排；什么材料詳寫，什么材料略寫，要通盤考慮。自然段是構(gòu)成文章的基本單位，恰當(dāng)劃分自然段，自然就成為分解層次的基本要求。該分段處就分段，不要老是開頭、正文、結(jié)尾“三段式”，這種老套的層次顯得呆板。二要波

37、瀾美。文章內(nèi)容應(yīng)該有張有弛，有起有伏，如波如瀾。只有這樣才能使文章起伏錯落，一波三折，吸引讀者。三要圓合美。文章的開頭與結(jié)尾要遙相照應(yīng)，把開頭描寫的事物或提出的問題，在結(jié)尾處用各種方式加以深化或回答，給人首尾圓合的感覺?！纠慕馄省?話題：忙忙，不亦樂乎 忙，是人生中一個個步驟，每個人所忙的事務(wù)不同，但是不能是碌碌無為地白忙，要忙就忙得精彩，忙得不亦樂乎。 忙是問號。忙看似簡單，但其中卻大有學(xué)問。忙是人生中不可缺少的一部分，但是怎么才能忙出精彩，忙得不亦樂乎，卻并不簡單。人生如同一張地圖，我們一直在自己的地圖上行走，時不時我們眼前就出現(xiàn)一個十字路口，我們該向哪兒，面對那縱軸橫軸相交的十字路口，我們該怎樣選擇?不急，靜下心來分析一下，選擇適合自己的坐標(biāo)軸才是最重要的。忙就是如此，選擇自己該忙的才能忙得有意義。忙是問號，這個問號一直提醒我們要忙得有意義，忙得不亦樂乎。 忙是省略號。四季在有規(guī)律地進(jìn)行著冷暖交替，大自然就一直按照這樣的規(guī)律不停地忙，人們亦如此。為自己找一個目標(biāo)，為目標(biāo)而不停地忙，讓這種忙一直忙下去。當(dāng)目標(biāo)已達(dá)成，那么再找一個目標(biāo)，繼續(xù)這樣忙，就像省略號一樣，毫無休止地忙下去，翻開歷史的長卷，我們看到