1、1第7章 基因技術(shù)2本章內(nèi)容7.1 基因克隆技術(shù)7.2 基因測序技術(shù)7.3 基因重組技術(shù)7.4 生物制造2022/7/2237.1 基因克隆技術(shù)概念：由少量（單拷貝）基因擴增產(chǎn)生大量（高拷貝）基因。分子克隆策略：化學合成已知序列（6080bp）;生物合成（基因擴增）(已知部分或全部序列)；文庫篩選應用：測序，功能研究，診斷與檢測，物質(zhì)生產(chǎn)7.1.1 基因克隆2022/7/2247.1.2 PCR原理與技術(shù)1、原理1971，Kleppe等首先描述了基因合成的基本原理PCR技術(shù)發(fā)明人： Kary Mullis（Cetus公司）1983，構(gòu)想DNA鏈的合成。1985，Klenow片段擴增出哺乳動物單

2、拷貝基因1993，獲得諾貝爾化學獎。聚合酶鏈式反應：Polymerase chain reaction，PCR分子生物學技術(shù)，生物體外，擴增一段DNA片段。通常不超過10kb,特定方法擴增40kb左右。2022/7/225PCR原理：在DNA聚合酶催化下DNA的復制過程，利用反復相同程序，DNA聚合酶在體外擴增特定的DNA片段。變性94退火55延伸72第1輪第2輪第3輪指數(shù)增加2022/7/226加熱方式：水加熱，空氣加熱，電熱絲加熱，半導體+電熱絲致冷方式：水致冷，空氣致冷，壓縮機致冷，半導體致冷溫控系統(tǒng)儀器構(gòu)造：三傳感器，雙區(qū)域溫度-溫度梯度樣品池傳感熱敏元件熱泵熱池2、PCR儀原理計算機

3、芯片控制過程參數(shù)2022/7/227The PCRJet from MegaBase gives fast PCR with large samples. 2、PCR儀，熱循環(huán)儀More reactions in the same space with 1,536 wells 2022/7/2283、操作過程PCR反應的基本組分：DNA模板：含靶基因的DNA片段引物：1對人工合成的短寡核苷酸，1825bp， 決定擴增的起始和終止位置及擴增長度DNA聚合酶：作用是催化合成復制擴增的區(qū)域底物：4種脫氧核糖核苷酸(dNTPs)，A、T、G、C緩沖體系:提供適合聚合酶行使功能的化學環(huán)境。石蠟油：防止蒸

4、發(fā)；管蓋（可加熱）封閉反應管2022/7/229PCR的條件與循環(huán)參數(shù)第1步：2540個循環(huán)，變性(94-96，1-2min)退火（降低溫度使得引物結(jié)合到模板的特定序列上。55，1-2min)延伸（DNA聚合酶由引物的3端開始，沿著DNA鏈合成新的互補鏈。72，1000bp/min)。第2步：強化延伸，72，713min第3步：終止反應（4） PCR反應在熱循環(huán)儀（PCR儀）中自動化進行。反應控制：溫度的加熱或冷卻過程，關(guān)鍵是每步反應溫度精確，升溫和降溫的時間控制。10PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果2022/7/22117.1.3 PCR技術(shù)應用進展原理沒有變，技術(shù)改進，派生出多種類型和用途?；蚩寺》?/p>

5、面：反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)：以RNA為模板，基因擴增多重PCR(multiplex PCR)：同一反應中使用多組引物，擴增多個基因2022/7/2212gcgtacgtacgtagagtgctagtctagtcgtagcgccgtagtcgatcgtgtgggtagtagctgatatgatgcgaggtaggggataggatagcaacagatgagcggatgctgagtgcagtggcatgcgatgtcgatgatagcggtaggtagacttcgcgcataaagctgcgcgagatgattgcaaagragttagatgagctgatgctagaggtcagtgactg

6、atgatcgatgcatgcatggatgatgcagctgatcgatgtagatgcaataagtcgatgatcgatgatgatgctagatgatagctagatgtgatcgatggtaggtaggatggtaggtaaattgatagatgctagatcgtaggtagtagctagatgcagggataatgcgcatta.7.2 基因測序技術(shù)基因是由A、T、G、C4種堿基組成基因組測序就是排列出其DNA上所有堿基順序。2022/7/22137.2.1 核酸測序技術(shù)簡史1965，Holley R等：測定酵母tRNA全部77bp的序列。1971，Wu,Taylor：dNTP，D

7、NA黏末端12bp。1973，Gilbert和Maxam，RNA聚合逆轉(zhuǎn)錄DNA，RNA測序。1975, Sanger:加減法測定了X174 DNA的6386bp序列。1977，Sanger：酶法測序。雙脫氧鏈終止法。PNAS。1977，Maxam和Gilbert：化學降解法測序。PNAS。1980，Messing等: 測序優(yōu)化，計算機數(shù)據(jù)處理。1982，Hood等: 部分自動化，熒光檢測，PCR測序。1990，自動測序儀，測序酶，配套熒光染料，機器人高通量工具，人類基因組測序啟動。2000，毛細管測序儀，機器人使用，加速測序20052007，以Genome Sequencer System、

8、Genome Analyzer system、SOLiD System為代表的基因組測序分析系統(tǒng)的誕生，標志著進入超高通量基因組測序的新時代。2022/7/22147.2.2 傳統(tǒng)測序技術(shù)（1）產(chǎn)生長度只差1bp的一系列寡核苷酸： 固定起點，隨機終止于特定一種或者多種殘基（A、T、C、G）。長度由特定堿基在DNA上位置所決定。（2）檢測長度只差1bp的一系列寡核苷酸： SDSPAGE電泳分離，發(fā)光成像。（3）確定序列：放射性（32P、33P）、熒光（非放射性熒光），直接讀出DNA上的核苷酸順序。產(chǎn)生只差1bp寡核苷酸方法，分兩種：Sanger雙脫氧鏈終止法，Maxam-Gilbert DNA化

9、學降解法。1、基本原理2022/7/22152、Sanger雙脫氧鏈終止法2022/7/22162、Sanger雙脫氧鏈終止法2022/7/22173、MaxamGilbert DNA化學降解法開始：Gilbert研究lac抑制子與lac操縱基因。發(fā)現(xiàn)：抑制子結(jié)合并保護操縱子DNA，用Sanger建立的RNA測序技術(shù)測定了DNA片段序列。靈感火花：蘇聯(lián)Mirzabekov到訪，午餐討論，是否與DNA的甲基化有關(guān)，產(chǎn)生了化學測序技術(shù)。1977：測序技術(shù)，PNAS，74：560564DNA片段一端用放射性標記，用堿基特異性的化學反應裂解DNA，通過標定末端與斷裂位點之間的距離來確定堿基的位置202

10、2/7/2218原理末端標記DNA：放射性同位素化學修飾堿基：硫酸二甲酯甲基化G；甲酸甲基化A和G；肼水解C和T，鹽抑T，哌啶切割：鏈斷裂，一組從1300bp不等的末端標記分子。5組獨立反應：每組特異針對某一種或某一類堿基。生成5組產(chǎn)物，共同起點（放射性標記末端）到發(fā)生化學降解的位點。電泳分離，放射自顯影。讀出序列：比較G、AG、CT、C和AC各個泳道，從測序凝膠放射自顯影片上讀出DNA序列。2022/7/2219Maxam-Gilbert vs SangerMG法：剛問世時，重現(xiàn)性更高，化學試劑，易掌握。Sanger法：單鏈模板和特異引物，高質(zhì)量DNA聚合酶噬菌體和噬菌粒載體的發(fā)展，聚合酶，

11、標記技術(shù)，合成引物及測序反應日臻完善，機器人等自動化。Sanger法：簡便快速，現(xiàn)今測序的最佳方案。 MG法應用:基因功能研究。2022/7/22202022/7/2221ATGCCGTAGGCCTAGC TAGGCCTAGCTCGGA ATGCCGTAGGCCTAGCTCGGA基因組DNABAC文庫根據(jù)物理圖譜正確定位的BAC 或contig用于霰彈法測序的候選克隆用于霰彈法測序的亞克隆測序并組裝完整的基因組序列逐步克隆法（Clone by Clone） 全基因組霰彈法 （Whole Genome Shot-gun)基因組DNA 霰彈法克隆測序并進行全基因組序列組裝完整的基因組序列2022/

12、7/2222毛細管檢測：ABI公司的3100凝膠電泳檢測:美國LI-COR公司的4300系統(tǒng)2022/7/22233730XL 系列 DNA 分析儀MegaBACE1000 毛細管測序儀2022/7/2224測序效率1977：450 bp（樣品/人/周可讀平均長度）1980：20100bp（熒光標記）1985：30250bp1990: 60300bp（ PCR引入）1995：180500bp1999: 500650bp2000：5000600bp熒光素標記的終止物ddNTP；單向測序長度保證700900bp。1.5kb序列，雙向反應，一次讀通，免去引物合成。2022/7/22251994： 3

13、億美元測定一個人類基因組(1:10)1984： 30億美元測定一個人類基因組未來目標：1000 美元測定一個人類基因組(1:3x106)2004：3千萬美元測定一個人類基因組(1:100)2006：150萬美元測定一個人類基因組(1:2000)未來目標：100 美元測定一個人類基因組(1:3x107)2022/7/22267.2.3高通量測序技術(shù)主要測序方法：焦磷酸測序技術(shù)： Roche公司的GS FLX系統(tǒng)（454系統(tǒng)）；橋擴增測序技術(shù)： Illumina公司的Genome Analyzer系統(tǒng)（Solexa系統(tǒng)）；連接測序技術(shù)： ABI公司的SOLiD系統(tǒng)；2022/7/22277.2.3

14、高通量測序技術(shù)主要應用領(lǐng)域：未知物種基因組的從頭測序已知物種的重新測序環(huán)境基因組測序基因轉(zhuǎn)錄組和表達調(diào)節(jié)sRNA分析染色質(zhì)免疫共沉淀SNP等多個領(lǐng)域。2022/7/22281、焦磷酸測序技術(shù)2005年底，羅氏診斷公司和454公司推出了基于焦磷酸測序法的超高通量基因組測序系統(tǒng)Genome Sequencer 20 System (GS 20)。2007年推出了通量更大，讀長更長，準確性更高的第二代基因組測序系統(tǒng)Genome Sequencer FLX System (GS FLX)。 2022/7/2229PPiATPPyrosequencing技術(shù)原理每延伸1個核苷酸，釋放出1個焦磷酸焦磷酸在

15、磺?；缸饔孟律葾TP熒光素酶利用ATP把無熒光的分子轉(zhuǎn)化為熒光物質(zhì)，化學發(fā)光，監(jiān)測。1、焦磷酸測序技術(shù)2022/7/2230Nucleotides dispensed sequentially12345678910110-1AAGCTGThe sequence in this pyrogram is AGGCAGAGGCAG無需加ddNTP，隨著反應的進行而同步讀出序列。2022/7/2231Single imageDNA聚合酶APSATPPPiLight + OxyluciferinsulfurylaseluciferaseEmulsion Based Clonal Amplificat

16、ion2022/7/2232 Open Machine 、Sequence Genome光學系統(tǒng)計算機系統(tǒng)微流體系統(tǒng)多道吸口試劑泵、閥CCD照相機pl板2022/7/2233The 454 Tech 2007年3月Roche公司收購了454公司，推出了新一代高通量測序儀GS FLX系統(tǒng)。10小時內(nèi)完成一個測序反應，單反應讀長由100bp擴展到400bp，準確性達99產(chǎn)出數(shù)據(jù)量達1億堿基對。每次運行可分析16個非混合的獨立樣品。J.D.Watson的基因組的測序。2022/7/2234Genome Analyzer Illumina公司于2007年推出。讀序原理：可逆性末端終結(jié)反應。在橋擴增過程

17、，四種堿基底物分別標記四種不同熒光，每個堿基末端被保護基團封閉。單次反應只能加入一個堿基，經(jīng)過掃描，讀取該次反應顏色。然后，除去該保護基團，以使下一個堿基的延伸反應繼續(xù)進行。反復多輪反應，按順序可排出DNA的序列。2、橋擴增測序技術(shù)（Solexa）2022/7/22352、橋擴增測序技術(shù)原理：基因組DNA片段化，兩端添加接頭；單鏈DNA片段被固定在特殊芯片上形成單鏈橋，以芯片引物擴增，形成雙鏈橋。30多輪擴增，每個單鏈DNA分子擴增形成單克隆DNA簇；檢測，讀出序列。 2022/7/2236Solexa測序通量 單端讀序長度已經(jīng)大于36 個堿基，雙端讀序?qū)⑹箿y序提高1倍，讀序長度達236堿基。

18、讀取的準確性在99以上。每次可平行分析8個非混合獨立樣品。單次實驗可得到1530億堿基的數(shù)據(jù)。2022/7/22373. 連接測序技術(shù)（SOLiD系統(tǒng)）2007年，ABI公司推出新一代高通量基因測序儀SOLiD系統(tǒng)。2022/7/22383. 連接測序技術(shù)（SOLiD系統(tǒng)）引物與微珠接頭序列配對，在連接酶催化下，探針與測序引物發(fā)生連接反應?？梢暬瘷z測連接產(chǎn)物發(fā)光，第5位堿基顏色。除去末端，完成一輪測序。重新開始連接、成像、切割。2022/7/2239SOLiD系統(tǒng)ABI，2007年推出四色熒光探針連接反應（1）基因組片段與接頭連接，構(gòu)建文庫。（2）油包水的微反應器中擴增，變性，雜交，富集PCR

19、產(chǎn)物。修飾，共價鍵結(jié)合到樣品板上。（3）磁珠沉積，并分割成不同的小室。（4）連接過程中讀序，進行拼接和分析。2022/7/2240測序效率每輪運行可產(chǎn)生超過40億堿基對的數(shù)據(jù)；準確率能達到99.94；可用于檢測基因組序列變異，如SNP、基因拷貝數(shù)變化、重復序列、倒位、插入和缺失，特別適合個體基因組測序、比較基因組學、基因表達譜分析、染色質(zhì)免疫共沉淀位點和蛋白調(diào)控因子-DNA結(jié)合部位等研究。 2022/7/2241三種高通量測序技術(shù)的比較454SolexaSOLiD讀長（bp）300-50036-7225-35準確率999999每輪可產(chǎn)生數(shù)據(jù)（億堿基對）115-3040所屬公司Roche Ill

20、umina ABI 2022/7/22427.3 基因重組技術(shù)基因重組概念：在體外，將不同的基因通過切割、連接，重組形成雜合分子。插入到合適的載體分子上，轉(zhuǎn)化到宿主細胞中。隨著細胞繁殖，基因得以真實復制擴增和表達。應用：測序，修飾和改造基因，表達編碼產(chǎn)物。2022/7/22437.3.1 傳統(tǒng)的重組技術(shù)酶切反應載體目標基因可連接的末端連接反應轉(zhuǎn)化重組分子重組子2022/7/22441、DNA片段的酶切限制性內(nèi)切酶催化雙鏈DNA分子斷裂，形成相應的片段。反應體系組成：雙鏈DNA、限制性內(nèi)切酶、緩沖液組成反應條件：一般在37反應1小時。2022/7/22452、DNA片段的連接DNA連接酶催化兩條

21、斷開的DNA雙鏈分子，形成 3,5-磷酸二酯鍵，得到重組DNA分子。反應體系組成：2個DNA片段（具有可連接的末端）、連接酶、緩沖液條件：一般在1026下，反應0.5-8小時2022/7/22463、重組DNA分子的轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化；將重組DNA分子導入到宿主細胞過程。Ca2+誘導轉(zhuǎn)化：重組分子與宿主細胞在CaCl2中混合，冰浴30min，42熱擊（90s），冷卻3min。PEG介導的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，電穿孔轉(zhuǎn)化, 基因槍轉(zhuǎn)化，農(nóng)桿菌介導的植物轉(zhuǎn)化等。2022/7/22474、 轉(zhuǎn)化細胞的擴增培養(yǎng)宿主細胞經(jīng)轉(zhuǎn)化后立即進行短時間的培養(yǎng)，使細胞增殖達到一定數(shù)目，以利于篩選和鑒定。2022/7/22485、重組

22、子的篩選與鑒定從混合體系中把期望重組子（只含有目標基因的重組子）分離出來，去除其他非期望重組子和非轉(zhuǎn)化細胞。載體遺傳標記篩選：抗生素抗性篩選，營養(yǎng)缺陷性篩選，互補篩選法，噬菌斑篩選法目標基因序列的檢測：菌落原位雜交，測序測定，產(chǎn)物檢測。2022/7/22497.3.2 Shuffling技術(shù)反復重組和篩選的循環(huán)過程:一組相關(guān)基因的隨機片段（來自不同種類生物，具有相關(guān)功能的基因）無引物PCR方式重新組合，裝配新功能重組基因。酶切這些基因成片段，再一次重組成新組合基因，重復這一過程，一直到具有高品質(zhì)的蛋白質(zhì)產(chǎn)生2022/7/2250DNA改組過程模擬示意圖2022/7/2251hybrid pro

23、toplastprogeny hybrid cell Genome shuffling2022/7/22527.4.1 概述7.4 生物制造2022/7/22537.4 生物制造生物制造（Bio-Manufacturing）是基因技術(shù)的具體產(chǎn)品應用和工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，包括生物制造的新產(chǎn)品、新工藝、新技術(shù)。三個方面，仿生設(shè)計、生物制造工程和生物過程加工工程。2004年成立中國機械工程學會生物制造工程分會，其應用在醫(yī)學界和生物界。2022/7/22541、仿生設(shè)計仿生學，借鑒生物某些特殊功能，改善機器設(shè)計。研究生物、模仿生物的各種特征，生物的自組織、自生長、遺傳等特性和規(guī)律，啟迪制造，形成新的制造技術(shù)

24、原理。仿生原理的應用促進制造技術(shù)的變革。用思維控制的假肢:大腦與機器融為一體,智能的手臂 2022/7/2255永久性人造心臟-25萬美元4個部分組成:金屬鈦制成的心臟本體、一個微型鋰電池、一個計算機操縱系統(tǒng)以及外接電池組。微型鋰電池和操縱系統(tǒng)植入患者腹腔，提供動力。外接電池組通過安裝在腹部皮膚下能量傳輸裝置對微型鋰電池進行充電。美國丹佛無機醫(yī)藥公司制造，重約兩磅，大小與葡萄柚相仿.美國，每年約有4000多人需要心臟移植，但捐贈者只有2000人2022/7/22562、生物制造工程（機械與材料）生命體的人工制造，制造類生物或生物體。組織器官就是各種功能細胞按特定結(jié)構(gòu)裝配成的復雜機器。按照加工材

25、料的生物學特性分為四個層次。第一層次：非生物相容性的材料，制造組織或器官的模型，手術(shù)規(guī)劃、模擬及假肢輔助設(shè)計加工。第二層次：較好的生物相容性但非生物可降解性的材料，在體內(nèi)長期存在，人工器官或植入物。第三層次：良好生物相容性、生物可降解性的材料，在人體內(nèi)分解、吸收并排出，特定形狀和結(jié)構(gòu)支架。第四層次：細胞為材料，進行轉(zhuǎn)運、定位和三維受控組裝，制造人工活性器官。2022/7/22573、生物過程加工工程(化工、輕工、材料、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè))利用生物體的合成過程和生命機能、活動特性進行生產(chǎn)制造：化合物（食品、藥物、化學品、能源、材料）小型器械和元件：制備、加工和信號檢測。2022/7/22587.4.2

26、藥品與食品制造目前正處于生物醫(yī)藥技術(shù)大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化開始階段。研制中藥物超過2200種，1700余種進入臨床試驗。2020年之后快速發(fā)展期，成為世界經(jīng)濟主導產(chǎn)業(yè)。藥品市場中，美、歐、日的份額超過了80%。大跨國公司主導了世界專利藥市場，20強企業(yè)收入：1994年占50%，2002年到66%。重磅炸彈藥物：2002年全球最暢銷的10種藥物的總銷售額近400億元，占全球藥品銷售額的1/102022/7/22597.4.2 微生物發(fā)酵技術(shù)發(fā)酵：利用微生物的生長繁殖，得到目標產(chǎn)物?；具^程：制備培養(yǎng)基(原料)，發(fā)酵罐中，滅菌。發(fā)酵培養(yǎng)：接種，控制溫度、pH、溶解氧、攪拌、通氣、培養(yǎng)基成分。 微生物生長，同

27、時生產(chǎn)產(chǎn)品提煉：進行分離提取， 從發(fā)酵液中獲得相應產(chǎn)品。實驗室規(guī)模：罐2-100L2022/7/2260工業(yè)規(guī)模發(fā)酵設(shè)備：發(fā)酵罐100T自控室2022/7/2261發(fā)酵技術(shù)產(chǎn)品藥物：100多種抗生素，10余種氨基酸，維生素，核苷酸和核苷，激素酶、酶抑制劑，核苷酸和核苷，免疫調(diào)節(jié)劑和受體拮抗劑，疫苗。大腸桿菌：干擾素，胰島素，生長素酵母：乙肝疫苗工業(yè)產(chǎn)品：有機溶劑和有機酸，酶制劑，糖類、單細胞蛋白、生物轉(zhuǎn)化、工業(yè)酶類。食品：飲料、調(diào)味品2022/7/22627.4.3 動物細胞培養(yǎng)技術(shù)昆蟲細胞：診斷試劑哺乳動物細胞：干擾素，紅細胞生成素，集落刺激因子，病毒疫苗雜交瘤細胞：抗體雞胚細胞：疫苗單細胞

28、培養(yǎng)：皮膚移植。2022/7/2263動物細胞培養(yǎng)反應器蛋白質(zhì)藥物疫苗轉(zhuǎn)基因技術(shù)在細胞、組織或整體水平上，利用物理、化學或生物學等手段導入外源基因或外源DNA，從而使受體基因組發(fā)生改變的一種方式。將人工分離和修飾過的基因?qū)氲缴矬w基因組中，由于導入基因的表達，引起生物體的性狀的可遺傳的修飾。轉(zhuǎn)基因是通過基因的操作，將一種基因（來源于植物、動物、微生物或人工合成物）運送到另一種生物上，因而使后者獲得新的特征。這種技術(shù)可突破物種界限，從DNA分子水平上有目的地、有效地改造生物。2022/7/2264為了得到需要的物種，將一種物種的基因植入另外一種物種后獲得的新物種+耐寒草莓=45 極地魚基因草莓

29、2022/7/22667.4.4 轉(zhuǎn)基因植物（1）轉(zhuǎn)基因植物的培育過程：構(gòu)建植物表達的載體：基因工程技術(shù)。外源DNA導入植物：花粉管通道法， 基因槍，農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化篩選與培育：形成植株外植體愈傷組織細胞系植株(2) 基因槍介導轉(zhuǎn)化法利用火藥爆炸或高壓氣體加速（這一加速設(shè)備被稱為基因槍），將包裹了帶目的基因的DNA溶液的高速微彈直接送入完整的植物組織和細胞中，然后通過細胞和組織培養(yǎng)技術(shù)，再生出植株，選出其中轉(zhuǎn)基因陽性植株即為轉(zhuǎn)基因植株。2022/7/2268（2）轉(zhuǎn)基因植物的發(fā)展1983年首例轉(zhuǎn)基因植物煙草120多種植物獲得轉(zhuǎn)基因植株。 農(nóng)戶：10.3 million；國家：222022/7/2

30、269Global Area of Biotech Crops in 2006: by Country (Million Hectares)RCountryArea (mh)Biotech Crops1*USA54.6Soybean, maize, cotton, canola, squash, papaya, alfalfa2*Argentina18.0Soybean, maize, cotton3*Brazil11.5Soybean, cotton4*Canada6.1Canola, maize, soybean5*India3.8Cotton6*China3.5Cotton7*Parag

31、uay2.0Soybean8*South Africa1.4Maize, soybean, cotton使用基因：抗蟲;抗除草劑2022/7/2270美國No1加拿大No4阿根廷No2巴西No3中國No6印度No52022/7/2271Golden rice： vitamin A 轉(zhuǎn)基因小麥轉(zhuǎn)基因水稻正常稻金稻1金稻2 轉(zhuǎn)基因技術(shù)大事記（1）1981年，第一次成功地將外源基因?qū)雱游锱咛?，?chuàng)立了轉(zhuǎn)基因動物技術(shù)。1982年獲得轉(zhuǎn)基因小鼠。此后相繼培育成功了轉(zhuǎn)基因兔、綿羊、豬、魚、昆蟲、牛、雞、山羊、大鼠等轉(zhuǎn)基因動物。 轉(zhuǎn)基因技術(shù)大事記（2）1983年世界首例轉(zhuǎn)基因植物含有抗生素藥類抗體的煙草培育

32、成功，標志著人類用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良農(nóng)作物的開始。轉(zhuǎn)基因技術(shù)大事記(3)1986年抗病毒棉花試驗成功，在美國進入田間試驗。1987年抗蟲基因、耐除草劑基因和番茄成熟控制基因相繼成功地轉(zhuǎn)入作物。1992年美國建立轉(zhuǎn)基因安全性評估體系。1993年美國授予第一個轉(zhuǎn)基因作物專利。1994年美國Calgene公司培育的延熟保鮮的轉(zhuǎn)基因番茄被批準商品化生產(chǎn)。1995年第一個轉(zhuǎn)基因食品番茄在美國進入超市。1996年全球許多國家開始把轉(zhuǎn)基因作物進入商品化生產(chǎn)，種植面積達170萬公頃。1996年至2000年的5年間，全球轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物種植面積增長了25倍，2000年轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的種植總面積有4420萬公頃。其中，大豆占50%以上，其次是玉米和棉花。帶有抗昆蟲毒素基因的轉(zhuǎn)基因西紅柿植株正常西紅柿植株長保鮮期轉(zhuǎn)基因番茄第一例批準上市的延熟保鮮的轉(zhuǎn)基因番茄，轉(zhuǎn)進去的外源基因的作用是產(chǎn)生反義mRNA部分抑制乙烯形成酶基因的活性，轉(zhuǎn)入基因的本身沒有可檢測到的基因產(chǎn)物，在番茄果實中沒有任何添加成份，作為食品，與非轉(zhuǎn)基因的番茄同樣安全。儲存期延長12個月。 含有胡蘿卜素轉(zhuǎn)基因金稻美國通過基因工程將人的基因植入牛的體內(nèi)，由轉(zhuǎn)基因公牛授精的母牛產(chǎn)下5頭健壯的牛犢，每頭都含有一個人類的基因。Abolish or Encourage美國市場上的一些轉(zhuǎn)